Địa điểm và thời gian nghiên cứu

3.3

Đề tài tiến hành điều tra, thu mẫu keo lai và cây Mỡ bị bệnh tại 3 vƣờn ƣơm sau:

- Vƣờn ƣơm cây rừng, Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên. - Vƣờn ƣơm cây rừng Công ty giống cây trồng Bắc Nam.

- Vƣờn ƣơm cây rừng Trạm giống vật tƣ lâm nghiệp thuộc Công ty ván dăm Thái Nguyên.

Nghiên cứu giám định sinh vật gây bệnh, phân lập, nuôi cấy mầm bệnh đƣợc tiến hành tại Phòng Nghiên cứu bảo vệ thực vật rừng, viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam, Hà Nội.

3.3

Đề tài đƣợc thực hiện từ tháng 1 - 2007 đến 12- 2007.

3.4. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

3.4.1. Xác nguyên nhân keo lai cây M .

3.4.2. Điều tra đánh giá tỷ lệ và bị hại đối với keo lai và cây Mỡ.

3.4. hại chủ yếu.

3.4.3.1 Quá trình phát sinh phát triển của bệnh trong năm.

3.4.3.2 Ảnh hƣởng của tuổi cây chủ đến tỷ lệ và mức độ bị bệnh.

3.4.3.3 Ảnh hƣởng của mật độ đến sự phát sinh và phát triển của bệnh.

3.4.3.4 Ảnh hƣởng của chế độ che bóng đến sự phát sinh phát triển của bệnh 3.4.3.5 Ảnh hƣởng của chế độ chăm sóc đến sự phát sinh phát triển của bệnh. 3.4.3.6 Ảnh hƣởng của bệnh đến sinh trƣởng cây chủ.

3.4.4 ết của một số

nấm bệnh gây .

3.4.4.1 í đến tỷ lệ nảy mầm của

nấm gây bệnh.

3.4.4.2. ảnh hƣởng của nhiệt độ đến tốc độ nảy mầm của ống mầm bào tử.

3.4.4.3. ông khí đến của hệ sợi

nấm gây bệnh.

3.4.4.4. ủa í đến của hệ

sợi nấm gây bệnh.

3.4.4.5. của hệ sợi

3.4.5 giải pháp phòng trừ dịch

3.4.5.1. Đề xuất các biện pháp phòng trừ tổng hợp.

3.4.5.2. Xây dựng mô hình phòng trừ tổng hợp bệnh hại keo lai và cây mỡ ở vƣờn ƣơm.

3.5. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.5.1. Xác định nguyên nhân gây bệnh - Thu thập mẫu bệnh. - Thu thập mẫu bệnh.

Phƣơng pháp tiến hành là điều tra sơ bộ toàn bộ khu vực bị bệnh. Chọn các mẫu lá, hoặc cành bị bệnh có triệu chứng điển hình cắt và đƣợc gói trong giấy báo. Mẫu bệnh đƣợc đựng trong các túi giấy ghi số mẫu và mô tả một số các đặc điểm của khu vực thu mẫu.Trong quá trình thu thập mẫu lá, thân bị bệnh, bảo quản không bị dập nát.

- Phƣơng pháp mô tả triệu chứng bệnh.

Cần phải xác định bộ phận bị bệnh: lá, thân hay rễ. Mô tả đặc điểm về màu sắc, kích thƣớc của vết bệnh. Sử dụng kính lúp cầm tay có độ phóng đại 10 lần quan sát bề mặt vết bệnh, mô tả màu sắc, hình dạng của thể quả nấm bệnh. Đƣa mẫu lá, thân bị bệnh lên kính hiển vi soi nổi, quan sát các đặc điểm về thể quả nấm bệnh và khối bào tử vô tính (conidial mass) đƣợc phun ra từ thể quả nấm bệnh khi gặp điều kiện ẩm. Sau đó chụp ảnh và ghi số hiệu đối với các mẫu bệnh.

- Giám định nguyên nhân gây bệnh

Với những trƣờng hợp trên lá, thân bệnh chƣa xuất hiện cơ quan sinh sản của nấm bệnh thì ta dùng phƣơng pháp để ẩm của Noumow, vì khi có độ ẩm cao sợi nấm sẽ mọc ra ngoài, tổ chức bị bệnh sẽ hình thành cơ quan sinh sản. Các mẫu lá, cành bị bệnh đƣợc thu thập về, bảo quản mẫu không bị dập nát. Cắt các tổ chức bị bệnh ra thành các đoạn 2 - 3cm cho vào hộp lồng để ẩm. Đặt các hộp lồng ở nhiệt độ 280

Để quan sát bào tử của nấm bệnh ta tiến hành nhƣ sau: Nhỏ giọt nƣớc cất lên lam kính, đƣa mẫu lá, thân bị bệnh lên kính soi nổi, dùng que cấy lấy thể quả cho vào lam kính, có nƣớc đậy la men, đƣa mẫu lên kính hiển vi phản pha BX50 có độ phóng đại tối đa 2000 lần để quan sát bào tử nấm bệnh. Trong quá trình quan sát tiến hành mô tả những đặc điểm hình thái về cấu tạo, hình dạng, kích thƣớc, màu sắc bào tử.

Căn cứ vào triệu chứng của bệnh, hình dạng kích thƣớc của thể quả nấm gây bệnh, hình dạng kích thƣớc của bào tử nấm gây bệnh, đối chiếu với các chuyên khảo về vi nấm của Crous P.W., Ferreira, F.A. và Sutton B. 1997; chuyên khảo về nấm túi của Richard T. Hanlin, 1992 .

- Phƣơng pháp phân lập vật gây bệnh

Để có thể phân lập đƣợc VGB ta chuẩn bị môi trƣờng Môi trƣờng PDA Khoai tây: 200 gam

D – Glucose: 20 gam Agar : 18 gam

Nƣớc cất: 1000ml

Khoai tây rửa sạch sau đó cắt thành từng miếng có kích thƣớc ( 1x 1x 1) cm sau đó cho vào nồi và đổ nƣớc 1000ml đun sôi, sau khi sôi để nguội trong 30 phút, lọc lấy nƣớc trong, sau đó cho thêm nƣớc vào vừa đủ 1000ml. Cho D- Glucose và Agar vào các bình tam giác 500ml, nút bông, cuốn giấy đầu cổ bình (3 bình, mỗi bình 330ml), hấp khử trùng ở môi trƣờng 1210

C (tƣơng đƣơng 1atm) trong 30 phút. Sau đó đổ ra hộp lồng để trong tủ cấy.

Tiến hành phân lập: Các mẫu thu thập về cắt các tổ chức lá bị bệnh thành các đoạn ngắn 2-3cm, sau đó đặt các mẫu bệnh rửa sạch cho vào hộp lồng để ẩm, sợi nấm mọc từ các tổ chức bị bệnh. Sau khi nấm mọc tiến hành phân lập bằng cách dùng que cấy cấy truyền các mầm bệnh sang môi trƣờng dinh dƣỡng mới. Khi thấy sợi nấm đã mọc tốt, không bị lẫn tạp vớí các loài nấm khác thì đƣợc coi là thuần khiết.

- Thí nghiệm gây bệnh nhân tạo

Việc gây GBNT giúp cho ta khẳng định đƣợc nấm mà ta phân lập đƣợc từ các tổ chức bị bệnh có chính xác hay không.

Phương pháp: Lấy các bào tử từ hệ sợi bằng que cấy đƣợc khử trùng trên ngọn đèn cồn. Pha bào tử trong nƣớc cất vô trùng có mật độ 1 x 106

tế bào/ ml. Nhúng các mẫu lá, thân vào cốc nƣớc dung dịch bào tử, sau đó để vào trong hộp lồng ẩm băng keo lại xung quanh hộp. Mỗi hộp ta để khoảng 2 -3 lá. Thí nghiệm đƣợc tiến hành với 10 hộp lồng, 3 lần lặp, theo dõi thời gian xuất hiện triệu chứng và kiểm tra bào tử trên các lá gây bệnh nhân tạo.

3.5.2. Điều tra đánh giá tỷ lệ và

Phương pháp đánh giá bệnh: Các loài cây ở vƣờn ƣơm thƣờng đƣợc gieo cấy thành hàng, hoặc gieo vãi trên luống. Trên luống gieo tiến hành lập 3 ODB, một ô đầu luống, một ô giữa luống và một ô cuối luống. Diện tích mỗi ODB bằng chiều rộng luống x 1m. Trên ODB điều tra 30 cây theo phƣơng pháp hệ thống, trên luống gieo cách 2 cây điều tra một cây. Cây điều tra đƣợc tiến hành phân cấp bị bệnh, cấp bị bệnh đƣợc chia làm 5 cấp và đánh số từ 0 đến 4:

0 là cây không bị bệnh, 4 là cây bị bệnh ở cấp cao nhất. Chỉ tiêu của từng cấp bệnh nhƣ sau:

Bệnh hại thân cành

Cấp bệnh Chỉ số và biểu hiện của triệu chứng 0 Không bị hại 1 Bị hại <20% thân, cành 2 Bị hại 20 - 50% thân, cành 3 Bị hại 50-70% thân, cành 4 Bị hại > 70% thân cành Bệnh hại lá

Cấp bệnh Chỉ số và biểu hiện của triệu chứng

0 Cành non, lákhông bị bệnh, cây sinh trƣởng phát triển tốt 1 Dƣới 25% diện tích lá bị bệnh hoặc số lá của cây bị bệnh

3 50 -75% diện tích lá bị bệnh hoặc số lá của cây bị bệnh 4 > 75% diện tích lá bị bệnh hoặc số lá của cây bị bệnh Từ kết quả phân cấp chỉ số bệnh, tính toán các chỉ tiêu sau:

+ Tỷ lệ bị bệnh: Là phần trăm số cây bị bệnh so với tổng số cây điều tra đƣợc tính theo công thức sau

P = N n x 100 Trong đó: P Tỷ lệ cây bị bệnh (%) n: Số cây bị bệnh

N: Tổng số cây trong điều tra

+ Chỉ số bệnh trung bình: Chỉ số bệnh trung bình đƣợc tính bình quân gia quyền cho từng loại bệnh sau đó tính trung bình cho loài, đƣợc tính theo công thức: R = NV nivi 4 1

Trong đó: R là chỉ số bệnh của từng loại bệnh ni là số cây bị bệnh ở cấp bệnh thứ i vi là trị số của cấp bệnh thứ i

N là tổng số cây điều tra

V là trị số của cấp bệnh cao nhất (4)

- Mức độ bị hại: Mức độ bị hại dựa trên chỉ số bệnh trung bình của từng loại bệnh, mức độ bị hại đƣợc phân làm 5 cấp từ cây khoẻ đến cây bị bệnh rất nặng, với cách tính nhƣ sau:

Chỉ số bệnh trung bình = 0 Cây khoẻ (0)

Chỉ số bệnh trung bình: Từ 1,0 đến 2,0 Cây bị bệnh trung bình (++) Chỉ số bị bệnh trung bình: Từ 2,0 đến 3,0 Cây bị bệnh nặng ( +++) Chỉ số bệnh trung bình: Từ 3,0 đến 4,0 Cây bị bệnh rất nặng (++++)

3.5.3. chủ

3.5.3.1. Quá trình phát sinh phát triển của bệnh trong năm.