III. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.3.Thí nghiệm 3: Khảo sát thời gian tạo đáp ứng miễn dịch dặc hiệu trên cá rơ phi đỏ (Oreochromis sp.) sau khi tiêm huyền dịch dạng FKC của
trên cá rơ phi đỏ (Oreochromis sp.) sau khi tiêm huyền dịch dạng FKC của vi khuẩn Streptococcus sp.
Vật liệu và dụng cụ:
+ Cá rơ phi đỏ cĩ trọng lượng trung bình là 87,3 g được mua từ bè nuơi của nơng dân, cá được nuơi trong điều kiện thí nghiệm 1 tháng trước khi tiến hành thí nghiệm. Cá được cho ăn thức ăn viên cơng nghiệp.
+ Bể nuơi: là bể xi măng, cĩ thể tích 0,75 m3, đặt trong mái che, sục khí liên tục và được thay nước đã được khử chlorine hàng ngày.
+ Huyền dịch dạng FKC của vi khuẩn Streptococcus sp.: chuẩn bị theo mục
3.3.4
+ Thuốc gây mê: loại ethylenglycol monophenylether
+ Bơm tiêm: loại 1 ml dùng dể tiêm vaccine, loại 5ml dùng để lấy mẫu máu. + Lam kính
+ Nước muối sinh lí + Máy li tâm
Cách tiến hành:
Thí nghiệm được chia thành 2 lơ: A1 và A2. Mỗi lơ bố trí 50 con cá.
Chuẩn bị huyễn dịch vi khuẩn Streptococcus sp. dạng FKC cĩ nồng độ 1 mg/ml bằng cách pha lỗng với nước muối sinh lí 0,9%. Tiêm với liều 0,2 ml vào xoang bụng cá. Lơ A2 được tiêm nhắc với liều lượng như trên vào ngày thứ 15 sau khi tiêm lần thứ nhất. Trước khi tiêm, cá được gây mê.
Sau khi tiêm, định kì lấy máu cá, thu huyết thanh, thử phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính. Thực hiện liên tục cho đến khi nào khơng phát hiện kháng thể đặc hiệu với vi khuẩn Streptococcus sp.
Bảng 3.3 : Cách bố trí thí nghiệm 3 Lơ thí nghiệm A1 A2 Tổng số cá (con) Số lần tiêm (lần) Nồng độ vaccine (mg/ml) Liều tiêm (ml/cá thể)
Ngày lấy máu kể từ sau khi tiêm
50 1 1 0,2 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 50 2 1 0,2 15, 20, 25, 30.