in vitro của giống lan Cymbidium
TDZ là chất điều hòa sinh trƣởng thuộc nhóm cytokinin có khả năng kích thích sự tạo chồi rất mạnh, do đó trong nuôi cấy in vitro ngoài BA ngƣời ta thƣờng sử dụng TDZ hoặc TDZ kết hợp NAA để tăng khả năng nhân giống in vitro (phát sinh phôi soma, tạo protocorm và hình thành chồi).
Bảng 4.3: Ảnh hƣởng của TDZ và NAA đến khả năng phát sinh phôi soma, tạo protocorm và hình thành chồi lan Cymbidium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro.
Nghiệm thức Số phôi soma Số protocorm Số chồi Chiều cao / mẫu cấy / mẫu cấy / mẫu cấy chồi (cm)
½ MS 0 A 1.67 A 1.67 AB 2.33 D ½ MS+0.05mg/l TDZ 0 A 3.56 BC 2.78 C 2.44 D ½ MS+0.1mg/l TDZ 0 A 4.22 BC 2.56 BC 1.64 C ½ MS+0.5mg/l TDZ 4.22 C 6.11 DE 2.56 BC 1.44 BC ½ MS+1 mg/l TDZ 5.56 D 6.78 E 1.67 AB 0.69 A ½ MS+0.05mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 2.22 B 3.44 B 2.89 C 1.39 BC ½ MS+0.1mg/l TDZ+0.5 mg/l NAA 3.78 C 4.89 CD 1.56 AB 1.25 ABC ½ MS+0.5mg/l TDZ+0.5 mg/l NAA 4.22 C 6.22 DE 1.33 A 1.08 ABC ½ MS+1mg/l TDZ+0.5 mg/l NAA 6.00 D 7.11 E 1.22 A 0.79 AB CV% 2% 1.78% 3.45% 2.95%
*Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05.
Nhận xét:
Qua thống kê trắc nghiệm phân hạng các nghiệm thức của thí nghiệm trên cho thấy sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, có những biểu hiện nhƣ sau:
*Số lƣợng phôi soma:
Dựa vào bảng 4.3 cho thấy có sự khác biệt nhau giữa các yếu tố môi trƣờng đến sự phát sinh phôi soma.
TDZ là chất điều hoà sinh truởng thuộc nhóm cytokinin có hoạt tính mạnh nhằm mục đích cảm ứng tạo phôi vô tính, tuy nhiên ở những môi trƣờng có bổ sung nồng độ TDZ thấp (TDZ = 0.05mg/l; 0.1mg/l) thì cũng không thấy biểu hiện của sự phát sinh phôi soma, còn ở môi trƣờng có nồng độ TDZ cao (TDZ = 0.5mg/l; 1mg/l) khả năng phát sinh phôi soma đƣợc biểu hiện rất rõ. Cũng nhƣ BA khi ta bổ sung kết hợp giữa TDZ và NAA vào môi trƣờng nuôi cấy thì chỉ với nồng độ thấp (TDZ = 0.05mg/l; 0.1mg/l và NAA = 0.5mg/l) thì đã bắt đầu phát sinh phôi soma. Chứng tỏ NAA có vai trò trong quá trình phát sinh phôi khi đƣợc xử lý kết hợp với TDZ.
Nhƣ vậy TDZ và NAA có ảnh hƣởng đến khả năng phát sinh phôi soma ở giai đoạn sau 60 ngày nuôi cấy.
*Số lƣợng protocorm:
Dựa vào bảng 4.3 cho thấy có sự khác biệt nhau giữa các yếu tố môi trƣờng nuôi cấy đến quá trình tạo protocorm ở giai đoạn sau 60 ngày nuôi cấy.
Ở môi trƣờng ½ MS số protocorm tạo ra là 1.67 và số protocorm tăng dần ở những môi trƣờng có bổ sung nồng độ TDZ cao, bảng 4.3 còn cho thấy khả năng tạo protocorm cao khi ta bổ sung kết hợp giữa TDZ và NAA vào môi trƣờng nuôi cấy nhƣ sau:
- Ở môi trƣờng ½ MS + 0.5mg/l TDZ số protocorm: 6.11.
- Ở môi trƣờng ½ MS + 0.5mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số protocorm: 6.22. - Ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l TDZ số protocorm: 6.78.
- Ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số protocorm: 7.11.
Nhƣ vậy có sự ảnh hƣởng TDZ và NAA đến quá trình tạo protocorm ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy.
*Số lƣợng chồi:
Dựa vào bảng 4.3 cho thấy không có sự khác biệt lớn giữa các yếu tố môi trƣờng nuôi cấy lên quá trình hình thành chồi.
Ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy khả năng phát sinh phôi soma và tạo protocorm là chủ yếu do đó số chồi hình thành không cao, ở những môi trƣờng ½ MS; ½ MS + 0.05mg/l TDZ; ½ MS + 0.1mg/l TDZ không có sự hình thành phôi soma và tạo protocorm do đó số lƣợng chồi cao ở các nghiệm thức này và giảm dần ở các nghiệm thức có nồng độ TDZ cao. Khi ta xử lý kết hợp TDZ và NAA thì số chồi hình thành cũng không cao.
Nhƣ vậy ở giai đoạn sau 60 ngày nuôi cấy TDZ và NAA không khích thích quá trình hình thành chồi cao.
*Chiều cao chồi:
Quan sát bảng 4.3 cho thấy có sự khác biệt giữa các yếu tố môi trƣờng nuôi cấy lên sự phát triển chiều cao chồi.
Chiều cao chồi giảm dần ở những môi trƣờng có bổ sung TDZ càng cao, do ở những môi trƣờng nuôi cấy có bổ sung TDZ cao chủ yếu phát sinh phôi soma và tạo chồi, do đó chồi có chiều cao thấp.
Nhƣ vậy chiều cao chồi tỷ lệ nghịch với sự phát sinh phôi soma và tạo protocorm trên môi trƣờng nuôi cấy có bổ sung TDZ và NAA.
Hình 4.5: Chồi lan Cymbidium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung TDZ.
Hình 4.6: Chồi lan Cymbidium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung TDZ và NAA.
Sau 90 ngày nuôi cấy in vitro đa số phôi soma, protocorm đều hình thành chồi lan, do đó ở giai đoạn này ta chỉ theo dõi sự sinh trƣởng và phát triển của chồi lan.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bảng 4.4: Ảnh hƣởng của TDZ và NAA đến sự sinh trƣởng và phát triển chồi lan Cymbidium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro.
Nghiệm thức Số chồi Số lá Số rễ Chiều cao / mẫu cấy / chồi / chồi chồi(cm)
½ MS 2.22 A 2.00 A 1.67 3.56 D ½ MS + 0.05mg/l TDZ 3.22 AB 2.33 C 0 3.04 C ½ MS + 0.1mg/l TDZ 4.11 BCD 2.24 BC 0 2.35 B ½ MS + 0.5mg/l TDZ 5.22 DE 2.08 AB 0 2.18 AB ½ MS + 1mg/l TDZ 6.44 FG 2.00 A 0 1.93 AB ½ MS+0.05mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 3.89 BC 2.37 C 0 3.12 C ½ MS+0.1mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 4.67 CDE 2.63 D 0 2.32 B ½ MS+0.5mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 5.56 EF 2.17 ABC 0 1.88 A ½ MS+1mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 7.22 G 2.10 AB 0 1.77 A CV% 1.66% 0.63% 11.54% 1.12%
*Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05.
Nhận xét:
*Số lƣợng chồi:
Dựa vào bảng 4.4 cho thấy có sự ảnh hƣởng khác nhau giữa các yếu tố môi trƣờng lên khả năng hình thành chồi ở giai đoạn sau 90 ngày nuôi cấy.
Số chồi hình thành ở giai đoạn này rất cao, khả năng hình thành chồi càng cao ở những môi trƣờng có bổ sung nồng độ TDZ cao hoặc TDZ kết hợp NAA nhƣ sau:
- Ở môi trƣờng ½ MS + 0.5mg/l TDZ số chồi hình thành: 5.22
- Ở môi trƣờng ½ MS + 0.5mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số chồi hình thành: 5.56 - Ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l TDZ số chồi hình thành: 6.44
- Ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số chồi hình thành: 7.22 Nhƣ vậy có sự ảnh hƣởng TDZ và NAA lên khả năng hình thành chồi ở giai đoạn sau 90 ngày nuôi cấy.
*Số lá, rễ và chiều cao chồi:
- Số lá: Khi ta bổ sung TDZ hoặc TDZ kết hợp NAA ở nồng độ càng cao vào môi trƣờng nuôi cấy thì bảng 4.4 cho thấy số lá cũng không tăng.
- Số rễ: Khi ta bổ sung TDZ vào môi trƣờng nuôi cấy thì cũng chỉ có ở môi trƣờng ½ MS là có sự hình thành rễ.
- Chiều cao chồi: Bảng 4.4 cho thấy chiều cao chồi giảm trong khi đó số chồi lại tăng cao.
Hình 4.7: Chồi lan Cymbidium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung TDZ.
Hình 4.8: Chồi lan Cymbidium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung TDZ và NAA.