Moâ taû qui trình saûn xuaát

3.2.2.1. Xử lý bao bì (lọ thủy tinh, nút cao su, nắp nhôm)

Trong quá trình nghiên cứu, chúng tôi sử dụng loại nút cao su xẻ rãnh có tráng silicon, đã được tiệt trùng, đựng trong bao bì kín.

Lọ thủy tinh được xử lý theo sơ đồ 3.1 Nắp nhôm được xử lý theo sơ đồ 3.2

Lọ thủy tinh



Chọn lựa



Rửa nước xà phòng



Rửa dung dịch proxitan 0,5%



Rửa dung dịch Na.Laurylsulfat



Rửa nước RO



Rửa nước cất đã lọc qua màng lọc lỗ xốp 0,2 m



Tiệt khuẩn bằng nhiệt khô 160C/3h

Nắp nhôm



Rửa nước thường



Rửa nước xà phòng



Rửa nước thường



Rửa nước cất 1 lần



Sấy khô 50C/3h

3.2.2.2. Phương pháp sản xuất : được tóm tắt theo sơ đồ 3.3

Pha dung dịch đệm phosphat trong nước 40⁰C - 50⁰C



Hòa tan dược chất, tá dược độn, chất bảo quản vào dung dịch ðệm



Đo pH và điều chỉnh nếu cần



Thêm nước đến đủ thể tích



Lọc qua màng lọc lỗ xốp 0,2  m



Đóng lọ thể tích 1ml

 Đông khô  Đóng gói  Nhập kho

Sơ đồ 3.3. Trình tự các giai đoạn sản xuất

3.2.2.3. Mô tả qui trình sản xuất

a) Pha chế dung dịch thuốc trước khi đông khô:

- Pha dung dịch đệm Na₂HPO₄.12H₂O và NaH₂PO₄.2H₂O trong khoảng 2/3 lượng nước cất (40C - 50C) trong công thức  (1).

- Tiếp tục hòa tan methylprednisolon sodium succinate, lactose monohydrate, D-manitol (nếu có) vào dung dịch (1)  (2)

- Hòa tan benzyl alcohol vào (2).

- Đo pH, chỉnh pH 7,3 – 7,4 bằng dung dịch HCl 2N nếu cần

- Bổ sung nước cất vừa đủ thể tích. Khuấy trộn thêm khoảng 5 phút.

- Lọc dung dịch thu được qua màng lọc cản khuẩn kích thước lỗ xốp 0,2m. - Đóng dịch vào các lọ đã được xử lý sạch, vô khuẩn, mỗi lọ 1ml bằng máy

đóng dịch. Đậy hờ nút cao su vô trùng (trên máy đóng dịch) - Chuyển bán thành phẩm vào buồng máy đông khô.

b) Tiến hành đông khô sản phẩm:

- Đông lạnh sản phẩm ở - 35^oC và giữ nhiệt ổn định trong 2 giờ. - Làm lạnh bình ngưng tụ (condenser) đến -60C

- Hút chân không , đồng thời gia nhiệt, tiến hành giai đoạn làm khô sơ cấp. Thời gian cho quá trình này tiến hành trong 20 giờ. Mặt phân cách thăng hoa phải hạ xuống đến điểm thấp nhất của lọ trước khi kết thúc quá trình. - Tiếp tục giai đoạn làm khô thứ cấp trong thời gian 10, 15 hoặc 20 giờ

theo bố trí thí nghiệm ở bảng 3.6. Kết thúc quá trình đông khô, nhiệt độ duy trì ở cuối quá trình là 30C, áp suất buồng không vượt quá 0,25 mbar.

- Khi sản phẩm khô hoàn toàn, các lọ được đóng kín ngay trong buồng đông khô. Bộ phận nén thủy lực sẽ đẩy các nút cao su khít vào miệng lọ thuốc ở điều kiện áp suất giảm.

- Lấy sản phẩm ra khỏi buồng đông khô, khằn nắp nhôm, dán nhãn hoàn thiện sản phẩm. Đóng gói mỗi lọ bột đông khô với 1 ống dung môi 1 ml nước cất.

- Kiểm nghiệm thành phẩm.

Mỗi mẻ đông khô khi nghiên cứu với công suất 200 lọ/mẻ

3.2.3. Đánh giá các tiêu chuẩn theo DĐVN III [1] để lựa chọn công thức sản xuất thực nghiệm

Các mẫu lọ bột đông khô sẽ được đánh giá chất lượng sơ bộ qua một số chỉ tiêu: Hình thức bánh thuốc sau khi đông khô, độ trong dung dịch sau khi hòa tan lại theo bảng 3.8 (DĐVN III). Công thức nào thỏa mãn các tiêu chuẩn đề xuất sẽ được lựa chọn làm công thức sản xuất thực nghiệm và tiếp tục được đánh giá các chỉ tiêu: độ ẩm, độ đồng đều khối lượng, pH, định tính, định lượng.

Bảng 3.8. Một số chỉ tiêu đánh giá chất lượng lọ bột đông khô

STT Chỉ tiêu Phương pháp Tiêu chuẩn

1 Hình thức khối bột

Quan sát cảm quan Bột đông khô màu trắng, đóng trong lọ thủy tinh, không teo vón và không nứt bể khối

2 Độ trong dịch hòa tan lại

Bơm 1ml nước cất vào lọ bột đông khô

Dung dịch thuốc khi pha với nước cất phải đạt độ trong theo qui định ghi trong chuyên luận thuốc tiêm của DĐVN III

3.3. Xây dựng các tiêu chuẩn kiểm tra sản phẩm theo DĐVN III (2002) và USP 24 (2003)

3.3.1. Hình thức:

Theo cảm quan. Bánh thuốc màu trắng, không teo vón, không nứt bể khối Chỉ tiêu hình thức được đề nghị dựa trên tính chất bền vững của cấu trúc nhằm mục đích hạn chế sự teo vón của bánh thuốc do sự có mặt một hàm lượng nước nhất định trong chế phẩm, làm giảm tốc độ hòa tan trong dung môi.

3.3.2. Độ trong dung dịch sau khi hòa tan lại 3.3.2.1. Pha hỗn dịch mẫu:

Chuẩn đục: Hòa tan 1,0 g hydrazin sulfat trong nước vừa đủ 100,0 ml và để yên trong 4 -6 giờ. Thêm 25,0 ml dung dịch thu được vào một dung dịch chứa 2,5 g hexamin trong 25,0 ml nước, lắc kỹ và để yên trong 24 giờ. Nếu được bảo quản trong lọ thủy tinh tốt, hỗn dịch thu được bền vững trong vòng 2 tháng.

Hỗn dịch này phải không được bám dính vào thủy tinh và phải được lắc kỹ trước khi dùng.

Để có chuẩn đục, pha loãng 15,0 ml hỗn dịch trên tới 1000,0 ml với nước. Chuẩn đục này chỉ được sử dụng trong vòng 24 giờ.

3.3.2.2. Hỗn dịch chuẩn đối chiếu

Các hỗn dịch chuẩn đối chiếu từ I đến IV được chuẩn bị như chỉ dẫn trong bảng 3.9 (DĐVN III) Mỗi hỗn dịch phải được trộn kỹ và lắc trước khi sử dụng

Bảng 3.9- Cách pha hỗn dịch chuẩn đối chiếu

I II III IV

Chuẩn đục (ml) 5.0 10.0 30.0 50.0

3.3.2.3. Cách thử:

Việc so sánh được tiến hành trong các ống nghiệm giống nhau, bằng thủy tinh trung tính, trong, không màu, đáy bằng, có đường kính trong khoảng từ 15mm đến 25 mm. Chiều dày của lớp dung dịch thử và của hỗn dịch chuấn đối chiếu là 40 mm. Hỗn dịch chuẩn đối chiếu sau khi pha 5 phút phải được so sánh ngay với dung dịch cần thử bằng cách quan sát từ trên xuống chất lỏng trong các ống nghiệm trên nền đen dưới ánh sáng khuếch tán ban ngày.

3.3.2.4. Cách đánh giá kết quả:

Một chất lỏng được coi như trong nếu nó tương đương với độ trong của nước hay của dung môi đã dùng khi khảo sát trong những điều kiện như đã mô tả hoặc nếu chất lỏng đó hơi đục nhẹ thì cũng không được đục quá hỗn dịch chuẩn đối chiếu số I

Các yêu cầu khác nhau về độ đục được biểu thị theo hỗn dịch chuẩn đối chiếu số I, II, III, và IV.

3.3.3. Độ đồng đều khối lượng

Để bổ sung vào việc đánh giá hàm lượng hoạt chất, cũng như để có thêm dữ liệu tham khảo cho các công thức điều chế thuốc tiêm đông khô methylprednisolon sodium succinat, chúng tôi tiến hành xác định độ đồng đều khối lượng theo tiêu chuẩn DĐVN III, chế phẩm được phép ± 10% khối lượng trung bình bột thuốc trong lọ.

Cách tiến hành: Loại bỏ hết các nút, cân ngay khối lượng của thuốc và vỏ. Lấy hết thuốc ra, dùng bông lau sạch, nếu cần thì rửa bằng nước, sau đó rửa bằng ethanol 96% rồi sấy ở 100C đến 105C trong 1 giờ, để nguội trong bình hút ẩm và cân .

Hiệu số khối lượng 2 lần cân là khối lượng của thuốc. Làm như vậy với 9 đơn vị khác được lấy bất kỳ . Tính khối lượng trung bình, cho phép không quá 1 đơn vị lệch ra ngoài qui định theo bảng 3.10 (DĐVN III, PL 8.3) nhưng không lệch trên 20%.

Bảng 3.10. Qui định chênh lệch khối lượng

Dạng bào chế Khối lượng trung bình (KLTB)

% chênh lệch so với KLTB

Thuốc để pha tiêm hoặc truyền tĩnh mạch (đơn liều) dạng bột hoặc dung dịch đậm đặc

Lớn hơn 40 mg 10

3.3.4. Mất khối lượng do sấy khô

Trong phần đánh giá chỉ tiêu độ mất khối lượng do sấy khô, chúng tôi dựa trên chuyên luận xác định mất khối lượng do làm khô theo DĐVN III (2002) (PL 5.16 và USP 24 (2003)

Mẫu được sấy ở nhiệt độ sấy khô 105C trong 3 giờ [25]

Tiến hành

- Sấy chén cân có nút mài dùng làm bì ở 105C đến khối lượng không đổi, để nguội trong bình hút ẩm silicagen, cân khối lượng bì (m₁)

- Cân ngay vào bì chính xác khoảng 2,1 gram bột thuốc (tương đương với lượng bột của 2 lọ đông khô) vào đĩa cân, đọc khối lượng (m₂), đưa vào buồng sấy

- Sấy ở nhiệt độ 105C trong 3 giờ. để nguội trong bình hút ẩm và cân (m₃) Kết quả độ mất khối lượng do sấy khô được tính theo công thức:

% 100 ) ( ) ( % 1 2 1 3 1 2 ^{ }_ ^   ^{m m}_{m m}^{m m} MKL

Thử 3 lần, lấy kết quả trung bình, độ mất khối lượng do sấy khô không được lớn hơn 3,0% (kl/kl).

3.3.5. pH

Lấy chế phẩm pha với nước cất pha tiêm để được dung dịch có chứa khoảng 50mg methylprednisolon sodium succinate trong 1 ml nước.

Tiến hành đo pH bằng máy đo pH Inolab 720 với nhiệt độ 20C - 25C. Trước khi đo, hiệu chuẩn điện cực bằng các dung dịch chuẩn qui định như trong DĐVN III. Chế phẩm phải có pH trong khoảng 7,0 – 8,0.

3.3.6. Định tính

Phải thể hiện phép thử định tính của methylprednisolon sodium succinate trên sắc ký đồ thu được ở phần định lượng, dung dịch thử cho pic có thời gian lưu phù hợp thời gian lưu của pic methylprednisolon sodium succinate chuẩn.

3.3.7.Định lượng: bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao thực hiện trên máy HPLC

Điều kiện sắc ký: - Cột RP 18 (5m)

- Pha động: Acetonitril: nước (60:40) - Detector UV 254 nm

Tiến hành:

- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác 50 mg chuẩn methylprednisolon sodium succinate vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 30 ml nước

cất, lắc siêu âm 10 phút. Thêm nước cất vừa đủ đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc kích thước lỗ lọc 0,45m.

- Dung dịch thử: Cân chính xác một lượng chế phẩm tương đương với 50 mg methylprednisolon sodium succinate vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 30 ml nước cất, lắc siêu âm 10 phút. Thêm nước cất vừa đủ đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc kích thước lỗ lọc 0,45m.

Hình3.8- Sắc ký đồ methylprednisolon sodium succinate trong mẫu chuẩn

Hình 3.9- Sắc ký đồ methylprednisolon sodium succinate trong mẫu thử

Me th yl pr ed ni so lo n Na S uc ci na t 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Retention Time (min) 0 500 1000 1500 In te ns it y (m V) Me th yl pr ed ni so lo n Na S uc ci na t 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Retention Time (min) 0 500 1000 1500 In te ns it y (m V)

- Tiêm dung dịch chuẩn, dung dịch thử vào hệ thống sắc ký, ghi lại sắc ký đồ.

- Kết quả: Dựa vào diện tích pic, lượng cân và độ pha loãng của dung dịch chuẩn, dung dịch thử để tính toán hàm lượng methylprednisolon sodium succinate.

- Hàm lượng methylprednisolon trong mỗi lọ phải chứa từ 90,0% đến 110,0% so với lượng ghi trên nhãn.

- Tính đặc hiệu của phương pháp: So sánh thời gian lưu của các đỉnh đáp ứng từ methylprednisolon sodium succinate trên các sắc ký đồ mẫu chuẩn và mẫu thử, khả năng tách rời với các cấu tử khác có trong thành phần chế phẩm. Kết quả được trình bày ở các hình 3.8 và 3.9 Nhận xét: Với các điều kiện sắc ký xác định, kết quả cho thấy thời gian lưu của methylprednisolon sodium succinate khoảng 4 phút. Đỉnh đáp ứng từ methylprednisolon sodium succinate tách rõ với các đỉnh của các thành phần khác có trong hỗn hợp phân tích. Thời gian lưu của đỉnh thu được từ sắc ký đồ mẫu thử phù hợp với thời gian lưu của đỉnh thu được từ mẫu chuẩn.

3.3.8. Nội độc tố

Không được có nhiều hơn 0,17 đơn vị nội độc tố tính cho 1 mg methylprednisolon sodium succinate[1], [25]

3.3.9. Độ vô khuẩn

Chế phẩm phải vô khuẩn.

Tiến hành thử theo phương pháp màng lọc (DĐVN III, PL 10.8) với bộ dụng cụ gồm phểu lọc, giá đỡ màng lọc, bình hứng, hút chân không. Màng lọc có đường kính lỗ lọc từ 0,2 m đến 0,45 m. Lượng chế phẩm dùng để thử là ½

đơn vị đóng gói theo DĐVN III đối với dung dịch thuốc tiêm có từ 1 đến dưới 4 ml trong 1 đơn vị đóng gói.

Rót lên màng lọc (sau khi đã được thấm ướt bằng dung môi) lượng mẫu thử. Hút chân không để lọc. Rửa màng 3 lần, mỗi lần 100 ml dung môi thích hợp.

Ủ màng lọc môi trường thyoglycolat ở 30C - 35C ít nhất 7 ngày.

3.4. Thiết kế tối ưu hóa [3]

Trong phần thiết kế tối ưu hóa, chúng tôi sử dụng mô hình bố trí thí nghiệm kiểu từng phần ¼ với yếu tố khảo sát X_i bao gồm 4 biến độc lập, mỗi biến 2 mức: thấp (X_m) và cao (X_M). Số thí nghiệm 2^k-2 = 4 thí nghiệm

Thông số tối ưu y được chọn là độ mất khối lượng (%) sau khi sấy khô. Đây là một chỉ tiêu quan trọng ảnh hưởng đến cấu trúc bánh thuốc và sự thủy phân hoạt chất trong quá trình bảo quản, cần phải đánh giá và chọn thông số tối ưu.

Các biến của X_i được chọn:

- X₁ : Khối lượng NaH₂PO₄.2H₂O trong công thức

- X₂ : Khối lượng D-manitol của hỗn hợp 35 mg lactose monohydrate và D-manitol

- X₃ : Thời gian sấy khô - X₄ : Aùp suất buồng đông khô

Xác định phương trình hồi qui thực nghiệm và kiểm tra các hệ số b_i Xác định công thức tối ưu bằng phương pháp Box-Willson

3.5. Thiết kế theo dõi độ ổn định [8], [11]

Sau khi khảo sát đánh giá các chỉ tiêu của các công thức thực nghiệm và tối ưu hóa để chọn ra 1 công thức và các thông số kỹ thuật, chúng tôi tiến hành sản

xuất thử 3 lô với số lượng 1.000 lọ/lô. Sản phẩm được xây dựng tiêu chuẩn và theo dõi độ ổn định trước khi gửi hồ sơ đăng ký thuốc.

Với lần thử nghiệm đầu tiên, sản phẩm của 3 lô nghiên cứu được thử tất cả các chỉ tiêu theo tiêu chuẩn đề xuất. Sau đó, tiếp tục theo dõi độ ổn định với 2 điều kiện bảo quản: già hóa cấp tốc và thử nghiệm ở điều kiện thực để xác định tuổi thọ, hạn dùng của thuốc.

Trong thiết kế phương pháp theo dõi độ ổn định, chúng tôi có tham khảo một số qui định của WHO, ICH, FDA & EU theo các tài liệu về độ ổn định thuốc

[8], [11]. Trong điều kiện cho phép, trong phần theo dõiû cấp tốc, chúng tôi chỉ chọn 1 điều kiện nhiệt độ 50C ±5C, 75%±5%RH để tiến hành thử nghiệm.

Bảng 3.11-.Qui định về điều kiện bảo quản trong các loại thử nghiệm

(Nguồn: Một số chuyên đề về bào chế hiện đại ^[11])

Loại thử nghiệm

Điều kiện bảo quản Thời gian tối thiểu

Số lô tối thiểu

Với các nước Châu Âu, Nhật, Mỹ: 25C±2C, 60%±5%RH

12 tháng 3 lô

Dài hạn (trong điều kiện

thực) Với các nước Đông Nam á 30C±2C, 70%±5%RH

12 tháng - Thuốc có dược chất bền vững: 2 lô - Thuốc có dược chất kém bền vững: 3 lô Lão hóa cấp

tốc

Qui định chung với các nước: 40C±5C, 75%±5%RH (Thử nghiệm bổ sung: 30C±2C, 60%±5%RH)

3.4.1 Thông tin chung

- Thiết kế thử nghiệm được dựa trên đặc tính ổn định của hoạt chất methylprednisolon sodium succinate (dễ bị thủy phân làm biến đổi cấu trúc bánh thuốc, làm giảm hàm lượng và thay đổi pH của chế phẩm )

- Lọ thủy tinh chứa bánh thuốc phải còn nguyên vẹn, nút kín trước khi tiến hành thử nghiệm

- Các lọ thuốc được đóng gói và bảo quản trong điều kiện được thử nghiệm

- Dự kiến hạn dùng của thuốc: 24 tháng

3.4.2 Chỉ tiêu thử nghiệm

Sau những khoảng thời gian nhất định theo bảng 3.12 kiểm tra một số chỉ tiêu chất lượng của chế phẩm theo các phương pháp thử đã được trình bày trong phần 3.3

- Cảm quan: So sánh hình thức, độ trong của dịch pha lại - pH của dung dịch pha lại

- Độ mất khối lượng do sấy khô

- Hàm lượng methylprednisolon sodium succinate bằng phương pháp HPLC

3.4.3 Kế hoạch thử : theo thời gian lấy mẫu và điều kiện bảo quản được ghi ở