2 Sản xuất oligosaccharides và và cacbohydrat monomeric từ cây oliu.
3.6 Phương pháp enzyme kết hợp
Để tổng hợp sialyllactose từ enzyme, phản ứng tuần tự các enzyme và một hệ thống tái tạo nucleotide cần được liên kết với các chất nền trong một bình phản ứng (Hình 3) . Để sản xuất nếu từ GlcNAc , GlcNAc 2 epimerase (EC 5.1.3.8 ) và Neu5Ac aldolase (EC 4.1.3.3 ) đã được thường được sử dụng theo thứ tự ( Lee et al. , 2004 , 2007). GlcNAc 2 epimerase chuyển đổi GlcNAc đến N -acetyl- D- mannosamine ( ManNAc ) , sau đó phản ứng với pyruvate để tạo thành Neu5Ac qua các hoạt động của enzym của Neu5Ac aldolase
Các động vật có vú GlcNAc2-epimerase , một loại protein được gọi renin- binding ( Maru và cộng sự , 1996 .Takahashi et al. , 2001) , đã được sử dụng để sản xuất Neu5Ac ( Lee et al. ,2004). GlcNAc 2 epimerase từ Synechocystis sp. đã được
cũng được sử dụng
cho các ứng dụng thực tế ( Tabata et al. , 2002). Enzyme thứ hai ,Neu5Ac aldolase ( tên trước đây N- acetylneuraminate lyase )được tìm thấy trong vi khuẩn E. coli K12 ( Ohta et al. , 1985) và nhiều vi khuẩn gây bệnh khác.( Li et al. , 2008). Gen E. coli cho Neu5Ac đã được biểu hiện quá mức và được sử dụng để sản xuất Neu5Ac từ ManNAc và pyruvate (Mahmoudian et al. , 1997) và để sản xuất 2 -keto- 3 -deoxy-D- glycero -D- galacto- nonopyranulosonicaxit (KDN) từ D-mannose và pyruvate ( Wang và Lee , 2006). Thiết lập một thủ tục tổng hợp hiệu quả Neu5Ac, Neu5Ac aldolase đã được cố định trên Eupergit-C (Mahmoudian et al., 1997) và cũng đã được giữ lại trong bình phản ứng bằng việc sử dụng màng siêu lọc (Salagnad et al., 1997). Hơn nữa, một công nghệ tổng hợp gen sử dụng GlcNAc 2 - epimerase và Neu5Ac aldolase đã được
sử dụng có hiệu quả tổng hợp acid sialic( Wang et al. , 2009).
Vi khuẩn synthetases CMP- Neu5Ac đã được sử dụng trong các ứng dụng công nghệ sinh học, trong khi các enzym được tìm thấy trong cả hai tế bào sinh vật nhân thực eukaryote và prokaryote (Bảng 2) . Enzyme từ N. meningitidis thường xuyên được sử dụng và các thông tin toàn diện về enzyme có sẵn trong cơ sở dữ liệu Brenda (http://www.brenda-enzymes.org )nơi một người đọc có thể lựa chọn các sinh vật cụ thể để có thể mô tả đặc tính của của enzyme .
Như thể hiện trong phần trên của hình . 3 , CMP- NeuAc có thể được sản xuất qua 2 cytidine triphosphate (CTP) khác nhau hệ thống tái sinhsử dụng kinase acetate, cytidine monophosphate(CMP)kinase,và enzym kinase polyphosphate . CTP được tổng hợp không tốn kém CMP bề mặt năng suất cao hơn 97% thông qua cytidine diphosphate (CDP) của CMP -kinase và kinase acetate (Woo và cộng sự . ,2008). Theo nghiên cứu, một hỗn hợp của các chất nền khác nhau và enzym đã phản ứng chung một bình lên men, do đó, phản ứng của mỗi enzyme có thể được tối đa, và CMP - Neu5Nac có thể tổng hợp tại một năng suất cao hơn 90 %, thậm chí nếu một lượng nhỏ các enzyme và chất nền được sử dụng. Là chất hỗ trợ cho phosphate CDP, một số lượng rất nhỏ của adenosine triphosphate (ATP) là được sử dụng và việc sử dụng các adenosine diphosphate (ADP) là kinh tế trong đó nó đã được tái sử dụng bởi Pi acetyl dư thừa và kinase acetate . đặc biệt ,trong phương pháp này, một quá trình phức tạp để loại bỏ ADP còn lại như một tạp chất sau khi hoàn thành phản ứng có thể được loại bỏ thông qua việc sử dụng CTP thay vì ATP như các nhà tài trợ phosphate cho CDP . cho việc chuyển đổi của CDP để CTP cũng như cho sự tái sinh ATP,một kinase acetate đã được sử dụng . Có báo cáo thực hiện tái sinh ATP bằng cách sử dụng nội sinh kinase acetate trong E. coli mà không cần giải nén Ngoài ra bất kỳ enzyme ngoại sinh ( Ryabova et al. , 1995). nội sinh pyrophosphatase vô cơ trong E. coli cũng được sử dụng để làm suy giảm pyrophosphate vô cơ ( Lee et al. , 2002). Ngoài ra, phương pháp sử dụng enzyme polyphosphate vô cơ ( polyp ) là nhà tài trợ duy nhất phốt pho đã được phát triển để tái tạo CTP từ CMP ( Lee et al. , 2002). Các hoạt động kết hợp của polyp kinase ( PPK ) và CMP kinase từ E. coli chuyển đổi CMP vào CDP, trong khi PPK tự tiếp tục phosphoryl hóa CDP nàyhệ thống tái sinh
được kết hợp với CMP- NeuAc synthetase của H. influenzae tổng hợp CMP- NeuAc . ATP hoặc CTP cũng có thể được tổng hợp từ NMPs cùng nguồn gốc một cách polyp phụ thuộc .nó có Được biết PPK có trách nhiệm tổng hợp các polyp từ ATP trong E. coli và nó phụ thuộc vào xúc tác polyp phosphoryl của tất cả 4 NDPs . Nó đã được chứng minh rằng polyp và PPK chức năng như một thay thế cho ATP adenylate kinase hoặc CMP kinase để cung cấp cho polyp : AMP hay CMP hoạt động phosphotransferase ( Ishige et al. , 2001).
4.Sản xuất pectin từ vỏ bưởi:
Nguyên liệu:
Vỏ bưởi: sử dụng phần vỏ, gọt bỏ phần vỏ xanh ở bên ngoài, cắt nhỏ kích thước 3-5 mm, ngâm với nước nóng (70-80oC) trong khoảng 10 phút, vớt ra, rửa lại bằng nước lạnh, vắt khô đem sấy, cũng có thể dung nguyên liệu tươi không qua sấy để tiến hành thí nghiệm.
Bã táo và cà rốt: ép lấy nước dung làm nước giải khát, lấy phần bã còn lại đem sấy khô.
Nguyên tắc xác định hàm lượng pectin trong mỗi nguyên liệu:
- Trong môi trường kiềm loãng, pectin hòa tan sẽ giải phóng nhóm methoxyl thành rượu methylic và acid pectic tự do. Acid pectic tự do trong môi trường acid acetic sẽ kết hợp với CaCl2 thành dạng muối kết tủa canxi pectat. Từ hàm lượng muối kết tủa có thể tính được hàm lượng pectin có trong mẫu phân tích.
Hàm lượng pectin trong các nguyên liệu.
Nguyên liệu Độ ẩm (% NL) Hàm lượng pectin (%NL) Hàm lượng pectin so với chất khô (%) Vỏ bưởi tươi 80,16 2.77 13,96 Vỏ bưởi khô 3,52 12,79 13,26 Bã táo tươi 89,35 0,73 6,89 Bã táo khô 9,44 5,70 6,29 Bã cà rốt tươi 29,23 5,54 7,82 Bã cà rốt khô 8,843 6,34 6,96 Nhận xét:
Hàm lượng pectin so với chất khô của nguyên liệu tươi cao hơn nguyên liệu khô. Vì trong quá trình sấy khô, pectin có thể bị biến đổi, tuy nhiên mức độ cao hơn
không nhiều nên chọn nguyên liệu khô để thu nhận pectin. Điều này thuận lợi cho việc xử lý và bảo quản nguyên liệu, chủ động trong sản xuất.
Tài Liệu Tham Khảo:
1) Jian-Hua Xie, Ming-Yue Shen, Shao-Ping Nie, Xin Liu, Hui Zhang, Ming- Yong Xi (2013), Analysis of monosaccharide composition of Cyclocarya paliuruspolysaccharide with anion exchange chromatography, State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China.
2) Ma Jiangwei, Qiao Zengyong∗, Xiang Xia (2010), Optimisation of extraction procedure for black fungus polysaccharides and effect of the polysaccharides on blood lipid and myocardium antioxidant enzymes activities,
Department of Cardiovascular Medicine, Fengxian Branch of Shanghai 6th People’s Hospital, Shanghai, 201400, PR China.
3) Carl P. Dietrich*b, Guacyra G.M. Fariasa, Luiz R.D. de Abreu”, Edda L. Leitea, Luci F. da Silva”, Helena B. Naderb (1995), A new approach for the characterization of polysaccharides from algae: presence of four main acidic polysaccharides in three species of the class Phaeophycea.
4) Sheng Chao Yang a, Jian Xin Pu b,*, Ying Lu a, Feng Hui Xiao a, Wei Lie Xiao b, Han Dong Sun b (2008), A new lipophilic monosaccharide from Erigeron annuus. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960852412014204 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0734975011001959 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0144861712012477 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960852413009024 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9781845694654500129 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0141813014000403 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0144861713005031