cho vào có tác dụng được với enzyme hay không cũng như đánh giá lượng enzyme đã bị ức chế bởi tác động của thuốc acarbose khi đo mật độ quang của phức hợp tính bột - 1od ở bước sóng 660 nm.
Một nghiệm thức đối chứng âm tương ứng với lượng DMSO có trong từng nông độ thuốc được cho vào trong 100 uÍ enzyme (2 mg/ml) được ủ ở 37°C trong thời gian 2 - 3 phút, một lượng tinh bột với thê tích 450 uÍ ở nông độ 5 mg/ml được cho thêm vào sau khi đã cho thuốc vào được 10 phút, hỗn hợp được ủ tiếp trong 7 phút để tỉnh bột có thể tác dụng được với một lượng enzyme còn lại sau phản ứng. Lượng tỉnh bột còn lại sau phản ứng được xác định sau khi cho tiếp 550
ul dung dịch 1od vào và đo mật độ quang ở bước sóng 660 nm.
Lượng tỉnh bột ban đầu cho vào trong phản ứng thủy phân được xác định bằng
cách thực hiện tương tự như trên nhưng 100 uÍ dung dịch đệm phosphate 0,25M,
pH = 5 được cho vào thay cho thể tích thuốc và cũng đo mật độ quang của phức hợp tính bột - 1od ở bước sóng 660 nm.
3.2.3.6 Khảo sát khả năng ức chế enzyme giucoamylase của cao chiết rỄ nhau trong phản ng thủy phân tỉnh bột
Cao chiết rễ nhàu có nông độ 26 mg/ml được pha trong dung dịch DMSO làm dung dịch gốc cho thí nghiệm, tiếp tục pha loãng thành các nồng độ lần lượt là
0,08; 0,80; 1,60; 1,80; 2,00; 2,20; 2,40; 2,60; 2,89 và 5,2 mg/ml.
Tiến hành thí nghiệm với 100 uI dung dịch cao chiết ở các nồng độ khác nhau được cho vào trong 100 ul enzyme có nồng độ 2 mg/ml được ủ ở 37°C trong 2 - 3 phút, hỗn hợp được ủ trong 10 phút, lẫy 450 hl tỉnh bột ở nồng độ 5 mg/ml thêm vào trong phản ứng và được ủ tiếp trong thời gian 7 phút, sử dụng dung dịch iod ở nồng độ 5 mM với thể tích 550 tI cho vào trong hỗn hợp phản ứng, để phát hiện lượng tính bột còn lại sau phản ứng khi đo mật độ quang của phức hợp giữa tính
bột và 1od ở bước sóng 660 nm.
Nghiệm thức đối chứng dương với thuốc acarbose ở nồng độ 65 mg/ml pha trong dung dịch đệm phosphate được thực hiện tương tự như thí nghiêm với dung dịch cao chiết, với thể tích cao chiết cho vào trong phản ứng được thay bằng thuốc, các thành phân và điều kiện khác không thay đồi.
Nghiệm thức đối chúng âm với dung dịch DMSO được thực hiện tương tự như
nghiệm thức đối chứng dương với thuốc acarbose nhưng 100 ul thuốc được thay