- Thermonuclease cụa S aureus: cũng như tât cạ các vi sinh vaơt khác S aureus đeău có theơ toơng hợp DNAse ngối bào, như có đieơm khác bieơt so với tât cạ các loài vi sinh vaơt khác,
3. PHƯƠNG PHÁP MĂU DÒ (Gene probes)
Vào những naím 1980, có nhieău nghieđn cứu ứng dúng kỹ thuaơt sinh hĩc vào lĩnh vực thực phaơm, đaịc bieơt là trong chaơn đoán vi sinh. Phương pháp sử dúng mău dò (probe) trong vieơc phát hieơn vi sinh vaơt trong thực phaơm thođng qua sự phát hieơn moơt trình tự DNA đaịc trưng. Các mău dò thường sử dúng RNA ribosome (rRNA) làm múc tieđu, do trong cơ theơ sô lượng bạn sao rRNA lớn, đụ đeơ làm taíng đoơ nháy cụa phương pháp phađn tích. Nguyeđn taĩc cụa phương pháp mău dò là lai phađn tử, đó là baĩt caịp giữa hai trình tự DNA tương đoăng. Moơt trong hai trình tự (thường là trình tự đích, tức là trình tự DNA cụa tê bào vi sinh vaơt) được cô định tređn moơt giá theơ raĩn hoaịc tređn tê bào hay mođ. Sự lai phađn tử xạy ra khi các trình tự boơ sung gaịp nhau do chuyeơn đoơng nhieơt và khi nhieơt đoơ mođi trường thâp hơn Tm ít nhât vài đoơ. Sự lai phađn tử còn có theơ xạy ra giữa DNA và RNA. Quá trình lai phađn tử chịu ạnh hưởng rât nhieău bởi các yêu tô: noăng đoơ DNA trong mođi trường, nhieơt đoơ và thời gian phạn ứng, kích thước các trình tự lai và lực ion cụa mođi trường.
Moơt ví dú veă heơ thông phát hieơn baỉng mău dò là thông Gentrak (Framingham, USA). Phương pháp phađn tích này sử mău dò đeơ phát hieơn Listeria trong mău bơ sữa và mău mođi trường. Mău dò là những đốn oligomer DNA đánh dâu baỉng hoá chât phát quang. Quy trình phađn tích có theơ được chia thành 6 bước: 1. Phá vỡ tê bào thu nhaơn rRNA, 2. mău dò DNA thu giữ có đuođi deoxyadenylic nucleotide (dA) và mău dò phát hieơn (reporter probe) chứa fluorescein isothiocyanate (F) ở đaău 5’ và 3’ cụa phađn tử, 3. Que thử được bao bĩc bởi polydeoxythymidine (dT) được đát vào với múc đích gaĩn những mău dò với với que thử, 4. que thử được đát vào ông chứa enzyme lieđn kêt với mău dò phát hieơn, 5. Sau khi rửa lối phaăn enzyme thừa, que thử được đaịt vào ông chứa cơ chât táo màu, 6. Sau khi ụ đeơ hieơn màu, màu được phát hieơn ở bước sóng 450 nm.
http://www.ebook.edu.vn 42
Sơ đoă quy trình phát hieơn Listeria với mău dò phát quang