PHẦN II: PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.4 Diaxetyl (CH3-CO-CO-CH3) Mục đớch:
Mục đớch:
Xỏc định cỏc chất dixeton trong bia bằng mỏy đo ở bước súng cực tớm
Nguyờn tắc:
Tỏch cỏc chất dixeton từ bia bằng cỏch chưng cất. Cho phản ứng phần chưng cất với dung dịch O- fenilendiamin và tạo được dẫn xuất của quinoxalin.
Axit hoỏ và đo quang phổ cỏc chất thu được từ phản ứng. tớnh nồng độ cỏc chất diaxeton nhờ một hệ số được xỏc định qua chất chuẩn.
Dụng cụ:
Dụng cụ chưng cất parnas hay markam, để chưng cất hơi nước cú thể chứa 100ml mẫu.
Ống đong 25ml và 100ml
Quang phổ kế đo ở bước súng cực tớm Cỏc cuver 10nm
Hoỏ chất:
Axit HCl 4M
O- fenilendiamin dung dịch cú nồng độ 10g/l trong axit HCl 4M, chuẩn bị cựng một ngày và bảo quản chỗ tối. O- fenilendiamin độc và cú thể gõy dị ứng nờn cần phải thao tỏc rất cẩn thận và phải đeo găng tay cao su.
Dung dịch diaxetyl gốc 5g/l trong nước, bảo quản dung dịch này trong lọ thuỷ tinh màu nõu và để trong tủ lạnh. Thời gian bảo quản là 6 thỏng.
Dung dịch diaxetyl chuẩn 250mg/l. Hỳt 5ml dung dịch gốc vào bỡnh định nức 100ml và định mức bằng nước cất. Bảo quản dung dịch trong lọ thuỷ tinh màu nõu, trong tủ lạnh 6 thỏng.
Tiến hành:
Chuẩn bị mẫu: Ly tõm hoặc lọc mẫu cũn chứa nấm men để được dịch bia tinh khiết.
Lấy 100ml mẫu bằng ống đong và đưa mẫu vào bỡnh cất. chưng cất mẫu đến khi thu được 25ml dịch cất sao cho thời gian đun núng khụng quỏ 6 phỳt và thời gian chưng cất từ 8- 10 phỳt. Dựng pipet lấy 10ml dịch cất cho vào ống nghiệm khụ. Thờm 0,5ml dung dịch O- fenilendiamin và lắc đều hỗn hợp phản ứng. Để yờn trong tối 20- 30 phỳt, sau đú thờm 2ml HCl 4M. Đo trờn quang phổ kế ở bước sống hấp thụ là 335nm so sỏnh với nước cất (A335)
Song song làm 1 mẫu trắng bằng cỏch thay dịch cất bằng nước cất. Tiến hành như đó chỉ dẫn ở trờn. Đo trờn quang phổ kế với bước súng hấp thụ là 335nm, so sỏnh với nước (Ab).
Làm mẫu chuẩn: dựng pipet cho 9,9ml nước vào ống nghiệm khụ, thờm 0,1ml dung dịch diaxetyl chuẩn và lắc đều. Tiến hành như ở trờn. Đo trờn quang phổ kế ở bước súng hấp thụ là 335nm, so sỏnh với nước (Ast).
Kết quả:
Tớnh hàm lượng cỏc chất diaxetyl( mg/l) theo cụng thức sau: (A335- Ab) x 0,625/ (Ast- Ab)
Trỡnh bày hiệu suất thu hồi diaxetyl
Bước 1: Lấy 0,5ml diaxetyl gốc vào bỡnh định mức 100ml sau đú định mức đến vạch
Bước 2: Chưng cất mẫu đến khi thu được 25ml dịch cất sao cho thời gian đun núng khụng quỏ 6 phỳt và thời gian chưng cất từ 8- 10 phỳt. Dựng pipet lấy 10ml dịch cất được cho vào ống nghiệm khụ. Thờm 0,5ml dung dịch O- fenilendiamin và lắc đều hỗn hợp phản ứng. Để yờn trong tối 20- 30 phỳt, sau đú thờm 2ml HCl 4M. Đo trờn quang phổ kế ở bước súng hấp thụ là 335nm so sỏnh với nước cất (A335)
Bước 3: lấy 0,1ml dung dịch diaxetyl chuẩn thờm 9,9ml nước cất vào ống nghiệm khụ, thờm 0,5ml dung dịch O- fenilendiamin vào lắc đều hỗn hợp phản ứng. Để yờn trong tối 20- 30 phỳt, sau đú cho thờm 2ml HCl 4M. Đo trờn quang phổ kế ở bước súng hấp thụ là 335nm so sỏnh với nước cất (A335)
Bước 4: kết quả Amẫu cất
Amẫu chuẩn Amẫu trắng
Hiệu suất thu hồi %H
2.5 Độ đắng:
Cỏc hợp chất đắng của bia, chủ yếu là iso- α axit. Xỏc định độ đắng bằng phương phỏp so màu. Bia đục phải được làm trong bằng mỏy ly tõm.
Nguyờn tắc
Cỏc chất đắng trong bia được chiết bằng iso- octan. Sau khi ly tõm độ hấp thụ của lớp iso- octan được đo tại bước súng 275nm so với một mẫu iso- octan tinh khiết.
Dụng cụ:
Quang phổ kế UV, cuver silica 10nm
Mỏy ly tõm vận hành với tốc độ 3000 vũng/ phỳt Mỏy lắc trũn biờn độ giao động 2- 3cm
Hạt hỡnh cầu thuỷ tinh Pipet 5, 10, 20ml
Hoỏ chất:
Iso- octan( 2,2,4- trimetylpentan) dựng cho mỏy quang phổ UV, độ hấp thụ của nú dưới 0,01 khi đo ở 275nm trong cuver 10ml hiệu chỉnh bằng nước cất.
Axit HCl 6M
Tiến hành:
Loại bỏ CO2 trong cỏc mẫu bia nhưng khụng được để mất bọt và chỉnh nhiệt độ tới khoảng 200C trước khi phõn tớch. Dựng pipet lấy chớnh xỏc 10ml mẫu vào ống ly tõm. Thờm 0,5ml HCl, tiếp theo là 20ml iso- octan và 2- 3 hạt thuỷ tinh. Vặn nắp chặt, lắc ống trong 15 phỳt ở 200C ± 10C, dựng mỏy lắc trũn đặt ở 130 ± 5 vũng/ phỳt. Ly tõm trong 3 phỳt ở 3000 vũng/ phỳt. Đo độ hấp thụ của iso- octan ở 275nm so với iso- octan tinh khiết.
Kết quả
Đơn vị độ đắng (BU)= 50 x A275