Kết quả chiết xuất và tinh sạch DNA

3.3.2. Kết quả giải trình tự gen DNA

3.3.3. Kết quả phân tích độ tương đồng trên NCBI

3.4. MỘT SỐ KẾT QUẢ BỔ SUNG VAI TRÒ DƯỢC CHẤT CÂY THIÊN THẢO THẢO

CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

4.1. KẾT LUẬN

Quá trình nghiên cứu, tổng hợp tài liệu qua các báo cáo khoa học của đã khẳng định.

4.1.1.Mẫu cây Thiên Thảo được thu thập tại An Giang ở vị trí:

- Kinh độ: - Vĩ độ: Tên khoa học: Loài (species): Chi (genus): Họ (familia): Lớp:

Giới (regnum): Plantae.

Tên khác:

Đặc điểm chỉ thị hình thái thu được phù hợp với cây Thiên Thảo mô tả trong đề tài.

Thân Lá Rễ Hoa Quả Hạt Kết luận:

4.1.2. Hoàn thiện quy trình chiết xuất và tinh sạch DNA và chu kỳ PCR cây Thiên Thảo Thảo

4.1.3. Kết quả chiết xuất và tinh sạch DNA cây Thiên Thảo và trình tự gen của cây này

4.2. KIẾN NGHỊ

- Nhà trường tạo điều kiện để chúng em nghiên cứu sâu thêm về dược liệu cây Phước lộc thọ ở Đồng bằng sông Cửu Long.

- Tiếp tục xây dựng thêm chỉ thị phân tử cho nguồn dược liệu ở Đồng bằng sông Cửu Long.

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1. Basilicum polystachyon (L.) Moench a Rare Mint in Taiwan, Department of Biological Sciences and Technology, National University of Tainan, Tainan, Taiwan, 2017.

2. Bộ Y Tế, 2006. Giáo trình Dược cổ truyền.Nhà xuất bản Y học. Tr. 358

3. Bộ Y Tế, 2018. Dược điển Việt Nam 5. Nhà xuất bản Y học. Hà Nội. Tr. 1154- 1156

4. Bộ Y tế, 2018. Dược Điển Việt Nam 4. Nhà xuất bản Y học. Hà Nội. Tr. 606-607- 608.

5. Bộ Y tế, 2018. Dược Thư Quốc Gia Việt Nam. Nhà xuất bản Y học. Hà Nội. Tr. 3081-3087.

6. Nguyễn Đức Thành, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm KH & CN Việt Nam, Tạp chí sinh học Các kĩ thuật chỉ thị DNA trong nghiên cứu và chọn lọc thực vật, 2014.

7. Nguyễn Nghĩa Thìn, 2006. Các phương pháp nghiên cứu thực vật. NXB Giáo Dục. 8. Pharmacognostical studies on the leaves of Basilicum polystachyon Moench / Asian Journal of Traditional Medicines, 2013.

9. The journal of economy, environment and society, JEES Vol. 2 Issue 2/ Singh, V.K., Chaudhuri, S., Maiti, G.G. & Mandal, M . 2018.

10. Trang web https://thongtinthuoc.org/cay-thien-thao.html truy cập ngày 29 tháng 9 năm 2021.

11. Trang web https://www.academia.edu/download/38604710/basilicum.pdf truy cập ngày 29 tháng 9 năm 2021.

12. Trang web https://amp.thaythuoccuaban.com/vithuoc/caythienthao.htm truy cập ngày 29 tháng 9 năm 2021.

PHỤ LỤC

Phụ lục B. Quy trình ly trích DNA

Tách chiết DNA:

- Nghiền 200l mẫu trong túp eppendorf bằng máy nghiền. - Thêm 1ml dung dịch trích (EB) và 50l SDS (10%). - Ủ 65 trong 30’ (5’ đảo nhẹ)

- Li tâm 13.000rpm trong 10’.

- Chuyển phần trong (800l) vào túp mới và thêm một lượng tương đương Isopropanol, ủ 2 giờ ở -20oC.

- Li tâm 13.000rpm trong 10’, hoà tan DNA trong 400 l TE. - Thêm 10l Rnase (10mg/ml) ủ ở 37 trong 15’.

- Thêm 400l CTAB buffer và ủ ở 65 trong 15’, thỉnh thoảng đảo ngược ống túp để trộn đều.

- Thêm 800l Chloroform/Isoamylalcohol (24:1) và trộn đều.Litâm 13.000rpm trong 5’. - Chuyển phần dung dịch trong qua túp 2.2 ml mới, thêm 1ml Ethanol 96% và ủ ở nhiệt

độ phòng trong 15’.

- Li tâm 13.000rpm trong 10’, đổ bỏ phần trong và rửa phần cặn với ethanol 70% bằng 700l.Li tâm lần nữa để loại bỏ ethanol.

- Để vào máy li tâm chân không 45 trong 10’. - Hoà tan DNA trong 200l TE 0.1.

(Nguồn: Sổ tay thực hành SHPT. Trần Nhân Dũng, NXB: ĐHCT, 2011)

Phản ứng PCR

Sau khi tinh sạch DNA, tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi (White et al., 1990) có trình tự sau:

ITS 1: 5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’ ITS 4: 5’-TCCTCCGCTTATTG ATATGC-3’

Quá trình thực hiện phản ứng PCR:

Hóa chất Thể tích (µl)

H20 34,5

PCR buffer (10X Taq buffer

(NH4)2SO4) 5

Polymerisation MgCl2 (25mM) 3

dNTPS 3

Primer F 1

Primer R 1

Taq DNA polymerase (5u/µL) 0,5

DNA 2 Tổng cộng 50 Giai đoạn Tên giai đoạn Chu kỳ Nhiệt độ (0C) Thời gian

1 Biến tính 30 9595 5 phút60 giây

2 Bắt cặp 30 54 50 giây

3 Kéo dài 30 7272 90 giây5 giây

Sản phẩm PCR được tinh sạch và giải trình tự bằng hệ thống giải trình tự tự động. Kết quả này sẽ được so sánh với cơ sở dữ liệu GenBank trên trang web NCBI bằng công cụ BLASTN.

Phụ lục C. CÁC HÌNH ẢNH CÂY THIÊN THẢO TẠI AN GIANG

XÁC NHẬN CỦA GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN

TP. Cần Thơ, ngày… tháng… năm 202..

GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN

TS. THIỀU VĂN ĐƯỜNG

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA GIẢNG VIÊN CHẤM 1 Họ và Tên:… Nhận xét: ……… ……… ……… ……… ………. KÝ TÊN ĐIỂM

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA GIẢNG VIÊN CHẤM 2 Họ và Tên:………..……….. Nhận xét: ……… ……… ……… ……… ………. 30 KÝ TÊN ĐIỂM

Phương pháp chỉ thị phân tử

Phương pháp nghiên cứu tài liệu