M Ở ĐẦU
4. BÀN LUẬN
4.3. Về kết quả phân tích gen APC ở nhóm đối chứng
Phân tích đột biến gen APC ở 15 người khỏe mạnh không mắc bệnh lý đại trực tràng cho thấy, không đột biến nào được phát hiện. Như vậy, có thể thấy sự đột biến trên gen APC là một đặc điểm rất điển hình của bệnh đa polyp tuyến gia đình (FAP), đặc biệt là của các bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình.
KẾT LUẬN
Nghiên cứu các đột biến dòng mầm trên exon 15 của gen APC ở 22 bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình (FAP), 25 người thân trong 15 gia đình của các bệnh nhân và 15 người khỏe mạnh bằng kỹ thuật giải trình tự trực tiếp DNA, chúng tôi rút ra các kết luận sau:
1. Ở các bệnh nhân ung thưđại trực tràng thểđa polyp tuyến gia đình: - Đã phát hiện các đột biến trên gen APC ở 19/22 (86,36%) bệnh nhân ung thư ĐTT thể FAP.
- Các đột biến dịch khung (cài hoặc xóa từ 1 đến 4 nucleotid) là loại đột biến phổ biến nhất, chiếm 86%, còn lại là đột biến thay thế (1 hoặc 2 nucleotid). Các đột biến dịch khung và thay thế nucleotid có thể dẫn đến các mã kết thúc (stop codon), làm cho sự sinh tổng hợp protein APC sớm bị dừng lại, protein APC bị cắt đoạn ngắn, chức năng ức chế khối u bị giảm hoặc mất. Kết quả này cho thấy vai trò của đột biến gen APC trong cơ chế bệnh sinh của bệnh ung thư ĐTT thể FAP.
- Vùng tập trung đột biến của gen APC là từ codon 1001-1400, chiếm 89,40%, trong khi ở vùng codon 656 – 1000, số đột biến chỉ chiếm 10,60%. - Không phát hiện được các đột biến trên gen APC ở những người khỏe mạnh đối chứng.
2. Đột biến trên exon 15 gen APC ở các thành viên có quan hệ huyết thống với bệnh nhân mang gen đột biến
- Cósự lặp lại giống nhau về vị trí và kiểu đột biến của gen APC giữa các thành viên trong cùng một gia đình.
- 15/25 (60%) thành viên của 15 gia đình bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể FAP có mang gen APC đột biến, trong đó chỉ có 3/15 (20%) người thân mang gen đột biến đã biểu hiện bệnh đa polyp tuyến gia đình (FAP). Như vậy, các đột biến của gen APC có khả năng di truyềnở các gia đình bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình.
KHUYẾN NGHỊ
Đề nghị Bộ Y tế cho phép tiến hành xác định đột biến trên exon 15 của gen APC (vùng liên quan nhiều đến ung thư đại trực tràng thể FAP: từ codon 1000 đến 1400) ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể FAP và những thành viên có quan hệ huyết thống trong gia đình của họ để phát hiện sớm nguy cơ và có biện pháp phòng ngừa trước khi ung thư xuất hiện.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TIẾNG VIỆT
1. Nguyễn Bá Đức (2000), Hóa chất điều trị bệnh ung thư, NXB Y học, Hà nội: 87-94.
2. Hiệp Hội quốc tế chống ung thư (1995), Cẩm nang ung bướu học lâm sàng tập I, II, xuất bản lần thứ 6, NXB Y học, Hà Nội, tr.177-181: 475- 493.
3. Nguyễn Văn Hiếu (2007), Ung thư đại tràng,Chẩn đoán và điều trị bệnh ung thư, NXB Y học, Hà Nội: 223 - 236.
4. Phạm Đức Huấn (2006), Ung thưđại tràng,Bệnh học ngoại khoa, tập I (sau đại học). NXB Y học, Hà Nội: 249 - 258.
5. Tạ Long (1992), Ung thư đại tràng, Bài giảng bệnh học nội khoa sau đại học tập II, Học viện Quân Y, Hà Nội: 75 - 81.
6. Hoàng Gia Lợi (1995), Các khối u ruột non và đại tràng, Bài giảng bệnh học nội tiêu hoá, Học viện Quân Y, Hà Nội: 215 - 225.
7. Lê Đình Roanh (2001), Bệnh học các khối u, NXB y học, Hà Nội
8. Nguyễn Khánh Trạch, Lê Tuyết Anh, Phạm Thị Bình, Mai Minh Huệ, …(2008), Nội soi tiêu hoá, NXB y học, Hà Nội: 128 – 152.
9. Đỗ Đức Vân (2006), Polyp đại tràng, Triệu chứng học ngoại khoa, NXB y học, Hà Nội: 187-191.
10.Hồ Huỳnh Thùy Dương (1998), Các phương pháp lai phân tử, Sinh học phân tử,NXB Giáo dục: 149-162.
11.Võ Thị Hương Lan (2002), ADN tái tổ hợp,Sinh học phân tử, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội: 139-170.
12.Lê Đình Lương (2001), “Chọn lọc, sàng lọc và phân tích các thể tái tổ hợp”, Nguyên lý kỹ thuật di truyền, NXBKhoa học và kỹ thuật: 118-130.
13.Khất Hữu Thanh (2006), “Một số phương pháp cơ bản sử dụng trong kỹ thuật gen”, Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen, Nhà xuất bản Khoa học và kỹ thuật: 137-64.
14.Phạm Hùng Vân (2009), “Real-time PCR- Các vấn đề cơ bản”, PCR và real- time PCR – Các vấn đề cơ bản và các áp dụng thường gặp, Nhà xuất bản Y học: 34-59.
TIẾNG ANH
15.Ahmed, Y., Nouri, A. and Wieschaus, E. (2002). Drosophila Apc1 and Apc2 regulate Wingless transduction throughout development. Development 129, 1751-1762.
16.Akiyama, T. and Kawasaki, Y. (2006). Wnt signalling and the actin cytoskeleton. Oncogene 25, 7538-7544.
17.Andrzej Plawski, Ryard Slomski (2008). APC gene mutations causing familial adenomatous polyposis in Polish patients. J Appl Genet 49 (4): 407- 414.
18.Aoki K, Aoki M, Sugai M, Harada N, Miyoshi H, Tsukamoto T, Mizoshita T, Tatematsu M, Seno H, Chiba T et al (2007). Chromosomal instability by -catenin/TCF transcription in APC or -catenin mutant cells. Oncogene 26: 3511-3520.
19.Barker N and Clevers H (2006). Mining the Wnt pathway for cancer therapeutics. Nat Rev Drug Discov5: 997-1014.
20.Beroud C and Soussi T (1996). APC gene: database of germline and somatic mutations in human tumors and cell lines. Nucleic Acids Res;24: 121-124. 21.Bienz M (2002). The subcellular destinations of APC proteins. Nat Rev Mol
Cell Biol3: 328-338.
22.Bienz M and Hamada F (2004). Adenomatous polyposis coli proteins and cell adhesion. Curr Opin Cell Biol16: 528-535.
23.Bodmer WF et al (1987) Localization of the gene for familial adenomatous polyposis on chromosome 5. Nature, 328: 614–616.
24.Bülow S, Berk T, Neale K. The history of Familial Adenomatous Polyposis.
Fam Cancer 2006, 5 : 213-220.
25.Dikovskaya D, Schiffmann D, Newton I P, Oakley A, Kroboth K, Jamieson T J, Meniel V, Clarke A, Sansom O and Nathke I S (2007). Loss of APC induces polyploidy as a result of a combination of defects in mitosis and apoptosis. J. Cell Biol. 176: 183-195.
26.Fearnhead NS, Britton MP and Bodmer WF (2001). The ABC of APC.
Human Molecular Genetics; 10 (7): 721-733.
27.Friedl W, Caspari R, Sengteller M, Uhlhaas S, Lamberti C, Jungck M, Kadmon M, Wolf M, Fahnenstich J, Gebert J, Möslein G, Mangold E, Propping P (2001). Can APC mutation analysis contribute to therapeutic
28.Glass D A, Bialek P, Ahn J D, Starbuck M, Patel, M S, Clevers H, Taketo M M, Long F, McMahon A P, Lang R A et al (2005). Canonical Wnt signaling in differentiated osteoblasts controls osteoclast differentiation. Dev. Cell 8: 751-764.
29.Groden J, Thliveris A, Samowitz W, Carlson M, Gelbert L, Albertsen H, Joslyn G, Stevens J, Spirio L, Robertson M et al (1991). Identification and characterization of the familial adenomatous polyposis coli gene. Cell 66: 589-600.
30.Hamada F and Bienz M (2002). A Drosophila APC tumour suppressor homologue functions in cellular adhesion. Nat Cell Biol;4: 208-213.
31.Hamada F and Bienz M (2004). The APC tumor suppressor binds to C- terminal binding protein to divert nuclear -catenin from TCF. Dev Cell 7: 677-685.
32.Hamada F, Murata Y, Nishida A, Fujita F, Tomoyasu Y, Nakamura M, Toyoshima K, Tabata T, Ueno N and Akiyama T (1999). Identification and characterization of E-APC, a novel Drosophila homologue of the tumour suppressor APC. Genes Cells4, 465-474.
33.Harada N, Tamai Y, Ishikawa T, Sauer B, Takaku K, Oshima M and Taketo M M (1999). Intestinal polyposis in mice with a dominant stable mutation of the -catenin gene. EMBO J18: 5931-5942.
34.Hayden M A, Akong K and Peifer M (2007). Novel roles for APC family members and Wingless/Wnt signaling during Drosophila brain development.
Dev Biol305: 358-376.
35.Henderson B R and Fagotto F (2002). The ins and outs of APC and -catenin nuclear transport. EMBO Rep3: 834-839.
36.Jian Q S, Wei J C, Lei F (2010). APC gene mutations in Chinese familial adenomatous polyposis patients. World J Gastroenterol; 16 (12): 1522-1526. 37.Joncourt F, Neuhaus B, Foegen KJ, Kleinle S, Steiner B, Gallati S (2004),
“Rapid Identification of Female Carriers of DMD/BMD by Quantitative Real-Time PCR”, Human Mutation, 23: 385-391.
38.Kelly J Smith, Karen A (2003). The APC gene product in normal and tumorcells. Proc Natl , 90: 2846-2850.
39.Koolman J (2005), DNA sequencing, Color Atlas of Biochemistry, 2nd ed: 260-262.
40.Kawasaki Y, Sato R and Akiyama T (2003). Mutated APC and Asef are involved in the migration of colorectal tumour cells. Nat Cell Biol 5: 211- 215.
41.Kemler R (1993). From cadherins to catenins: cytoplasmic protein interactions and regulation of cell adhesion. Trends Genet9: 317-321.
42.Kielman M F, Rindapaa M, Gaspar C, van Poppel N, Breukel C, van Leeuwen S, Taketo M M, Roberts S, Smits R and Fodde R (2002). Apc
modulates embryonic stem-cell differentiation by controlling the dosage of -catenin signaling. Nat Genet32: 594-605.
43.Kinzler K W et al (1991). Identification of FAP locus genes from chromosome 5q21. Science, 253: 661–665.
44.Knudsen AL, Bisgaard ML, Bülow S: Attenuated familial adenomatous polyposis (AFAP).A review of the literature. Fam Cancer 2003, 2 : 43-55. 45.Kroboth K, Newton I P, Kita K, Dikovskaya D, Zumbrunn J, Waterman-
Storer C M and Nathke I S (2007). Lack of adenomatous polyposis coli protein correlates with a decrease in cell migration and overall changes in microtubule stability. Mol Biol Cell;18: 910-918.
46.Lee HH, Morse SA, Olsvik O (1997), “Nucleic acid amplification technologies: application to disease diagnosis”, Eaton Publishing: 49-60. 47.Louie R K, Bahmanyar S, Siemers K A, Votin V, Chang P, Stearns T,
Nelson W J and Barth A I (2004). Adenomatous polyposis coli and EB1 localize in close proximity of the mother centriole and EB1 is a functional component of centrosomes. J Cell Sci; 117: 1117-1128.
48.Mahmoud N N, Boolbol S K, Bilinski R T, Martucci C, Chadburn A and Bertagnolli M M (1997). Apc gene mutation is associated with a dominant- negative effect upon intestinal cell migration. Cancer Res; 57: 5045-5050. 49.Marrtjie N, Elsa B, Frederik J H (2007). Genotyp-phenotype corelations in
19 Dutch cases with APC gene deletions and a literature review. Eur J hum Genet;15 (10) : 1034-1042.
50.McPherson MJ, Hames BD, Taylor GR (1995). Optimizing PCR, PCR 2- A practical approach, Oxford University Press: 1-22.
51.Miyashiro I, Senda T, Matsumine A, Baeg G H, Kuroda T, Shimano T, Miura S, Noda T, Kobayashi S, Monden M et al (1995). Subcellular localization of the APC protein: immunoelectron microscopic study of the association of the APC protein with catenin. Oncogene; 11: 89-96.
52.Miyoshi Y, Ando H, Nagase H, Nishisho I, Horii A, Miki Y, Mori T, Utsunomiya J, Baba S, Petersen G (1992). Germ-line mutations of the APC gene in 53 familial adenomatous polyposis patients. Proc Natl Acad Sci U S
53.Moisio A, Jurvinen H, Peltomaki P (2002). Genetic and clinical characterisation of familial adenomatous polyposis: a population based study,
Gut50 (6): 845-850.
54.Morin P J, Vogelstein B and Kinzler K W (1996). Apoptosis and APC in colorectal tumorigenesis. Proc Natl Acad Sci USA; 93: 7950-7954.
55.Morrison E E, Wardleworth B N, Askham J M, Markham A F and Meredith D M (1998). EB1, a protein which interacts with the APC tumour suppressor, is associated with the microtubule cytoskeleton throughout the cell cycle.
Oncogene;17: 3471-3477.
56.Moseley J B, Bartolini F, Okada K, Wen Y, Gundersen G G and Goode B L (2007). Regulated binding of Adenomatous polyposis coli protein to actin. J Bio Chem282: 12661-12668.
57.Munemitsu S, Souza B, Muller O, Albert I, Rubinfeld B and Polakis P (1994). The APC gene product associates with microtubules in vivo and promotes their assembly in vitro. Cancer Res; 54: 3676-3681.
58.Nakamura M, Zhou X Z and Lu K P (2001). Critical role for the EB1 and APC interaction in the regulation of microtubule polymerization. Curr Biol;
11: 1062-1067.
59.Nathke I (2006). Cytoskeleton out of the cupboard: colon cancer and cytoskeletal changes induced by loss of APC. Nat Rev Cancer;6: 967-974. 60.Noritake J, Watanabe T, Sato K, Wang S and Kaibuchi K (2005). IQGAP1:
a key regulator of adhesion and migration. J Cell Sci;118: 2085-2092.
61.Powell S M, Zilz N, Beazer-Barclay Y, Bryan T M, Hamilton S R, Thibodeau S N, Vogelstein B and Kinzler K W (1992). APC mutations occur early during colorectal tumorigenesis. Nature; 359: 235-237.
62.Reece RJ (2004). Polymerase chain reaction. Analysis of Genes and Genomes, John Wiley & Sons Ltd: 153-182.
63.Rowley PT (2004). Screening for an inherited susceptibility to colorectal cancer. Genet Test ; 8 : 421-430.
64.Sieber OM, Lamlum H, Crabtree MD (2002). Whole gene APC deletions cause classical familial adenomatous polyposis but not attenuated polyposis or “multiple” colorectal adenomas, Proc Natl; 99 (95): 2954-2958.
65.Schouten JP, McElgunn CJ, Waaijer R, Zwijnenburg D, Diepvens F, Pals G (2002). Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation-dependent probe amplification. Nucleic Acids Res; 30 (12): 57.
66.Sellner LN, Taylor GR (2004), “MLPA and MAPH: New Techniques for Detection of Gene Deletions”, Human Mutation, 23: 413-9
67.Shee Ping Chen, Shih Tzu, Shu Wen Jao (2006). Single nucleotid polymorphisms of the APC gene and colorectal cancer risk: a case control study in Taiwan. BMC Cancer; 6: 83-89.
68.Sorscher DH (1997). DNA amplification techniques. Molecular Diagnostics,
Humana Press: 98-101.
69.Su L K, Burrell M, Hill D E, Gyuris J, Brent R, Wiltshire R, Trent J, Vogelstein B and Kinzler K W (1995). APC binds to the novel protein EB1.
Cancer Res;55: 2972-2977.
70.Taketo M M (2006). Wnt signaling and gastrointestinal tumorigenesis in mouse models. Oncogene25: 7522-7530.
71.Tighe A, Johnson V L and Taylor S S (2004). Truncating APC mutations have dominant effects on proliferation, spindle checkpoint control, survival and chromosome stability. J Cell Sci; 117: 6339-6353.
72.Turcot J, Després JP, St Pierre F. Malignant tumors of the central nervous system associated with familial polyposis of the colon: report of two cases.
Dis Colon Rectum 1959, 2: 465-468.
73.van Es J H, Giles R H and Clevers H C (2001). The many faces of the tumor suppressor gene APC. Exp Cell Res; 264: 126-134.
74.Vander Lujit RB, Khan RM, Vasen HF (1997). Molecular Analysis of the APC gene in 105 Dutch kindreds with familial adenomatous polyposis: 67 germline mutations indentified by DGGE, PTT and Sothern analysis; 9 (1): 7-16.
75.Wallis YL, Morton DG, McKeown CM and Macdonald. Molecular analysis of APC gene in 205 families: extended genotype-phenotype correlations in FAP and evidence for the role of APC amino acid changes in colorectal cance predispoition. J Med Genet 1999; 36: 14-20.
76.Watanabe T, Wang S, Noritake J, Sato K, Fukata M, Takefuji M, Nakagawa M, Izumi N, Akiyama T and Kaibuchi K (2004). Interaction with IQGAP1 links APC to Rac1, Cdc42, and actin filaments during cell polarization and migration. Dev Cell; 7: 871-883.
PHỤ LỤC 1: mRNA CỦA GEN APC
GenBank: M74088.1 Vùng đề tài khảo sát là phần gạch dưới: từ codon 653 (bp 1967) đến codon 1601 (bp 4803), trong đó vùng hotspot là vùng được in đậm: từ codon 998 (bp 2994) đến codon 1467 (bp 4401).
Human APC gene mRNA, complete cds
LOCUS HUMFAPAPC 8972 bp mRNA linear PRI 09-DEC-1993
DEFINITION Human APC gene mRNA, complete cds. ACCESSION M74088
VERSION M74088.1 GI:182396 KEYWORDS .
SOURCE Homo sapiens (human)
ORIGIN
1 gtccaagggt agccaaggat ggctgcagct tcatatgatc agttgttaaa gcaagttgag 61 gcactgaaga tggagaactc aaatcttcga caagagctag aagataattc caatcatctt 121 acaaaactgg aaactgaggc atctaatatg aaggaagtac ttaaacaact acaaggaagt 181 attgaagatg aagctatggc ttcttctgga cagattgatt tattagagcg tcttaaagag 241 cttaacttag atagcagtaa tttccctgga gtaaaactgc ggtcaaaaat gtccctccgt 301 tcttatggaa gccgggaagg atctgtatca agccgttctg gagagtgcag tcctgttcct 361 atgggttcat ttccaagaag agggtttgta aatggaagca gagaaagtac tggatattta 421 gaagaacttg agaaagagag gtcattgctt cttgctgatc ttgacaaaga agaaaaggaa 481 aaagactggt attacgctca acttcagaat ctcactaaaa gaatagatag tcttccttta 541 actgaaaatt tttccttaca aacagatatg accagaaggc aattggaata tgaagcaagg 601 caaatcagag ttgcgatgga agaacaacta ggtacctgcc aggatatgga aaaacgagca 661 cagcgaagaa tagccagaat tcagcaaatc gaaaaggaca tacttcgtat acgacagctt 721 ttacagtccc aagcaacaga agcagagagg tcatctcaga acaagcatga aaccggctca 781 catgatgctg agcggcagaa tgaaggtcaa ggagtgggag aaatcaacat ggcaacttct 841 ggtaatggtc agggttcaac tacacgaatg gaccatgaaa cagccagtgt tttgagttct 901 agtagcacac actctgcacc tcgaaggctg acaagtcatc tgggaaccaa ggtggaaatg 961 gtgtattcat tgttgtcaat gcttggtact catgataagg atgatatgtc gcgaactttg 1021 ctagctatgt ctagctccca agacagctgt atatccatgc gacagtctgg atgtcttcct 1081 ctcctcatcc agcttttaca tggcaatgac aaagactctg tattgttggg aaattcccgg 1141 ggcagtaaag aggctcgggc cagggccagt gcagcactcc acaacatcat tcactcacag 1201 cctgatgaca agagaggcag gcgtgaaatc cgagtccttc atcttttgga acagatacgc 1261 gcttactgtg aaacctgttg ggagtggcag gaagctcatg aaccaggcat ggaccaggac 1321 aaaaatccaa tgccagctcc tgttgaacat cagatctgtc ctgctgtgtg tgttctaatg 1381 aaactttcat ttgatgaaga gcatagacat gcaatgaatg aactaggggg actacaggcc 1441 attgcagaat tattgcaagt ggactgtgaa atgtacgggc ttactaatga ccactacagt 1501 attacactaa gacgatatgc tggaatggct ttgacaaact tgacttttgg agatgtagcc 1561 aacaaggcta cgctatgctc tatgaaaggc tgcatgagag cacttgtggc ccaactaaaa 1621 tctgaaagtg aagacttaca gcaggttatt gcaagtgttt tgaggaattt gtcttggcga 1681 gcagatgtaa atagtaaaaa gacgttgcga gaagttggaa gtgtgaaagc attgatggaa 1741 tgtgctttag aagttaaaaa ggaatcaacc ctcaaaagcg tattgagtgc cttatggaat 1801 ttgtcagcac attgcactga gaataaagct gatatatgtg ctgtagatgg tgcacttgca 1861 tttttggttg gcactcttac ttaccggagc cagacaaaca ctttagccat tattgaaagt 1921 ggaggtggga tattacggaa tgtgtccagc ttgatagcta caaatgagga ccacaggcaa