M Ở ĐẦU
1.6.3.Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance
NMR)
Phổ cộng hưởng từ hạt nhân là một phương pháp phổ hiện đại và hữu hiệu nhất hiện nay. Với việc sử dụng kết hợp các kỹ thuật phổ NMR một chiều và hai chiều, các nhà nghiên cứu có thể xác định chính xác cấu trúc của hợp chất, kể cả cấu trúc lập thể của phân tử.
Nguyên lý chung của các phương pháp phổ NMR (phổ proton và carbon) là sự cộng hưởng khác nhau của các hạt nhân từ (1H và 13C) dưới tác dụng của từ trường ngoài. Sự cộng hưởng khác nhau này được biểu diễn bằng độ dịch chuyển hoá học (chemical shift). Ngoài ra, đặc trưng của phân tử còn được xác định dựa vào tương tác spin giữa các hạt nhân từ với nhau (spin coupling).
1.6.3.1. Phổ 1H-NMR: Trong phổ 1H-NMR, độ dịch chuyển hoá học (δ) của các proton được xác định trong thang ppm từ 0-14ppm, tuỳ thuộc vào mức độ lai hoá của nguyên tửcũng như đặc trưng riêng của từng phần. Dựa vào những đặc trưng của độ dịch chuyển hoá học và tương tác spin mà ta có thểxác định được cấu trúc hoá học của hợp chất.
1.6.3.2. Phổ 13C-NMR: Phổ này cho tín hiệu vạch phổ carbon. Mỗi nguyên tử carbon sẽ cộng hưởng ở một trường khác nhau và cho tín hiệu phổ khác nhau. Thang đo của phổ13C-NMR là ppm, với dải thang đo rộng 0-230ppm.
1.6.3.3. Phổ DEPT (Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer): Phổ này cho ta các tín hiệu phân loại các loại carbon khác nhau. Trên phổ DEPT, tín hiệu của các carbon bậc bốn biến mất. Tín hiệu của CH và CH3 nằm về một phía và của CH2 về một phía trên phổ DEPT 1350. Trên phổ DEPT 900 chỉ xuất hiện tín hiệu phổ của CH.
1.6.3.4. Phổ 2D-NMR: Đây là các kỹ thuật phổ hai chiều, cho phép xác định các tương tác của các hạt nhân từ của phân tử trong không gian hai chiều. Một số kỹ thuật chủ yếu thường được sử dụng như sau:
- Phổ HMQC (Heteronuclear Multiple Quantum Coherence): Các tương tác trực tiếp H-C được xác định nhờ vào các tương tác trên phổ này. Trên phổ, một trục là phổ 1H-NMR, còn trục kia là 13C-NMR. Các tương tác HMQC nằm trên đỉnh các ô vuông trên phổ.
- Phổ 1H-1H COSY (HOMOCOSY) (1H-1H Chemical Shif Correlation Spectroscopy): Phổ này biểu diễn các tương tác xa của H-H, chủ yếu là các proton đính với carbon liền kề nhau. Nhờ phổ này mà các phần của phân tử được nối ghép lại với nhau.
- Phổ HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Connectivity): Đây là phổ biểu diễn tương tác xa của H và C trong phân tử. Nhờ vào các tương tác trên phổ này mà từng phần của phân tửcũng như toàn bộ phân tửđược xác định về cấu trúc.
- Phổ NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy): Phổ này biểu diễn các tương tác xa trong không gian của các proton không kểđến các liên kết mà chỉ tính đến khoảng cách nhất định trong không gian. Dựa vào kết quả phổ này có thể xác định cấu trúc không gian của phân tử.
Người ta còn sử dụng hiệu ứng NOE bằng kỹ thuật phổ NOE differences để xác định cấu trúc không gian của phân tử. Bằng việc đưa vào một xung đúng bằng từ trường cộng hưởng của một proton xác định thì các proton có cùng phía về không gian cũng như gần nhau về không gian sẽ cộng hưởng mạnh hơn và cho tín hiệu phổ với cường độ mạnh hơn.
Ngoài ra, người ta còn sử dụng phổ X-RAY (nhiễu xạRơnghen) để xác định cấu trúc không gian của toàn bộ phân tử của hợp chất kết tinh ở dạng đơn tinh thể.
Nhưng phạm vi sử dụng của phổ này hạn chế vì yêu cầu tiên quyết là cần phải có đơn tinh thể. Đây là một điều kiện không phổ biến đối với các hợp chất hữu cơ.
Như trên đã đề cập, ngoài việc sử dụng các loại phổ, người ta còn sử dụng kết hợp các phương pháp chuyển hoá hoá học cũng như các phương pháp phân tích, so sánh, kết hợp khác. Đặc biệt đối với các phân tử nhiều mạch nhánh dài, tín hiệu phổ NMR bị chồng lấp nhiều, khó xác định chính xác được chiều dài các mạch, cũng như đối với các phân tửcó các đơn vịđường thì việc xác định chính xác loại đường cũng như cấu hình đường thông thường phải sử dụng phương pháp thuỷ phân rồi xác định bằng phương pháp so sánh LC-MS hoặc GC-MS với các đường chuẩn dự kiến.
Xác định cấu trúc hóa học các hợp chất bằng các phương pháp phổ: phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): 1H-NMR (500MHz) và 13C-NMR (125MHz) được đo trên máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, Viện Hóa học - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1. Nguyên liệu
Mẫu sao biển được thu thập tại đảo Vạn Bội tháng 06/2012 và được PGS.TS. Đỗ Công Thung - Viện Tài nguyên và Môi trường biển, Viện HLKHCNVN xác định tên khoa học là Anthenea aspera. Tiêu bản được lưu giữ tại Viện Hóa học các Hợp chất thiên nhiên.
Hình 2.1: Ảnh minh họa mẫu sao biển Anthenea aspera.
2.2. Dụng cụ, hóa chất và thiết bị nghiên cứu
Các hóa chất, dung môi sử dụng trong quá trình nghiên cứu được mua của các hãng Merck, Sigma-Aldrich, Xilong. Dung môi chạy sắc ký được cất lại và làm khan trước khi sử dụng.
- Phổ NMR được đo trong dung môi CDCl3, MeOD d4 hoặc DMSO d6 tại nhiệt độ phòng trên máy Bruker AC III, tại 500 MHz cho 1H NMR và 125 MHz cho 13C NMR. Chất chuẩn nội là TMS.
- PhổMS được đo trên máy Agilent (USA) 1100 LC-MSD Trap. - Điểm nóng chảy được đo trên máy Kofler microhot stage
- Sắc ký lớp mỏng (TLC) được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC- Alufolien 60 F254 (Merck). Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại 2 bước sóng 254 nm và 365 nm, hoặc dùng thuốc thử là CeSO4/H2SO4, KMnO4, Dragendoc, N- inhydrin, Iot.
- Sắc ký cột được thực hiện với chất hấp thụlà siligagel pha thường (Merck) và pha đảo (ODS), Sephadex LH-20 và Dianion.
2.3. Phương pháp xử lý mẫu
2.3.1 Thiết bi ̣ nghiên cứu
Phổ1H-NMR (500 MHz) và 13C-NMR (125 MHz) được ghi trên máy Bruker AM500 FT-NMR và TMS được sử dụng là chất chuẩn nội. Điểm nóng chảy được đo trên máy Electrothermal IA-9200 (Anh). Phổ ESI-MS đo trên máy HP-1100 LC/MS Trap.
Sắc ký lớp mỏng (TLC) được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC- Alufolien 60 F254 (Merck) và các vết chất được phát hiện bằng cách phun thuốc thử dung dịch Ninhydrin hoặc thuốc thử KMnO4. Các hóa chất và dung môi được cất lại và làm khan trước khi sử dụng bằng các phương pháp tiêu chuẩn. Sắc ký cột được thực hiện trên silica gel (Merck silica gel Si 60 (40-63 mm).
2.3.2 Phân lập các hợp chất
Các mẫu tươi của Anthenea aspera (10 kg) đã được cắt thành miếng nhỏ và ngâm chiết ba lần với ethanol trong thiết bị siêu âm ở nhiệt độ 40ºC. Dịch tổng thu được được cất kiệt dung môi dưới áp suất giảm, nhiệt độ < 50ºC thu được 213 g cặn chiết tổng EtOH. Cặn chiết này được chiết phân đoạn lần lượt với n-hexane (1L x 3), EtOAc (1Lx3) và methanol (1Lx3) thu được các cặn chiết tương ứng: 45 g cặn n-hexane kí hiệu: SDH, 68 g cặn etyl axetat kí hiệu: SDE và 96g cặn metanol kí hiệu: SDM. Cặn SDH được tách trên cột silica gel, hệ dung môi rửa giải n-hexane/CH2Cl2 và CH2Cl2/MeOH (100-0% -> 0-100% v:v) thu được 9 phân đoạn kí hiệu SDH1- SDH9 tách trên cột silica gel với dung môi rửa giải n- hexane/CH2Cl2 và CH2Cl2/MeOH thu được 2 hợp chất: SD5 (0,53g), SD6 (1,02 g). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hình 2.2. Sơ đồ phân lập Anthenea aspera 2.4. Dữ liệu phổ của các chất phân lập được SD5: 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), (ppm): 4,03 (1H, br, H-3); 1,96 (1H, dt, H- 12); 1,86 (2H, m, H-16); 1,67 (1H, m, H-7); 1,69/1,62 (2H, m, H-2); 1,52 (1H, m, H-5); 1,45 (1H, m, H-1); 1,51 (1H, m, H-25); 1,09 (1H, m, H-17); 0,65 (3H, s, H- 18); 0,78 (3H, s, H-19); 0,90 (3H, d, J = 6,4 Hz, H-21); 0,86 (3H, d, J = 6,0 Hz, H- 26); 0,87 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-27). 13C-NMR (125 MHz, CDCl3), (ppm): 32,2 (t, C-1); 29,1 (t, C-2); 66,6 (d, C- 3); 35,9 (t, C-4); 39,2 (d, C-5); 28,6 (t, C-6); 32,0 (t, C-7); 35,5 (d, C-8); 54,4 (d, C-9); 36,1 (s, C-10); 20,8 (t, C-11); 40,0 (t, C-12); 42,6 (s, C-13); 56,6 (d, C-14); 24,2 (t, C-15); 28,3 (t, C-16); 56,3 (d, C-17); 12,1 (q, C-18); 11,2 (q, C-19); 35,8 (d, C-20); 18,7 (q, C-21); 36,2 (t, C-22); 23,8 (t, C-23); 39,5 (t, C-24) ; 28,0 (d, C-
25); 22,8 (q, C-26) ; 22,6 (q, C-27). SD6: 1H-NMR (500 MHz, CDCl3), (ppm): 5,15 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-7); 3,60 (1H, br, H-3); 1,23 (2H, m, H-12); 1,35 (2H, m, H-16); 1,39 (1H, m, H-5); 1,25 (1H, m, H-17); 0,53 (3H, s, H-18); 0,79 (3H, s, H-19); 0,92 (3H, d, J = 6,5 Hz, H- 21); 0,86 (3H, d, J = 9,0 Hz, H-26); 0,85 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-27). 13C-NMR (125 MHz, CDCl3), (ppm): 37,1 (t, C-1); 31,5 (t, C-2); 71,5 (d, C- 3); 38,0 (t, C-4); 40,3 (d, C-5); 29,7 (t, C-6); 117,8 (d, C-7); 140,0 (s, C-8); 49,5 (d, C-9); 34,2 (s, C-10); 21,6 (t, C-11); 39,6 (t, C-12); 43,4 (s, C-13); 55,0 (d, C- 14); 22,9 (t, C-15); 27,9 (t, C-16); 56,1 (d, C-17); 11,9 (q, C-18); 13,0 (q, C-19); 36,2 (d, C-20); 18,6 (q, C-21); 36,1 (t, C-22); 23,9 (t, C-23); 39,5 (t, C-24) ; 28,1 (d, C-25); 22,6 (q, C-26) ; 22,8 (q, C-27).
Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Xác định cấu trúc hóa học của hợp chất SD5
SD5: Trong các phổ1H-NMR và 13C-NMR kết hợp với phổDEPT đã cho biết trong phân tử của chất SD5 có 27 nguyên tử carbon trong đó có 05 nhóm CH3, 12 nhóm methylen (CH2), 8 nhóm methylene (CH) và 2 nguyên tử carbon bậc 4. Phổ khối lượng ESI-MS cho [M]+ 388 amu. Các dữ liệu phổ13C-NMR và ESI-MS [20] cho phép xác định công thức phân tử chất này là C27H48O. Đây là một hợp chất thuộc khung cholestane.
Trên phổ1H-NMR quan sát được cho tín hiệu của proton thuộc carbon methyl có liên kết với nhóm hydroxyl (OH) tại H 4,03 (H-3), cùng với proton methyl tại H 0,99 (1H, H-14) và 1,09 (1H, H-15). Ngoài ra trên phổ của hợp chất này cũng quan sát được tín hiệu của cacproton thuộc 5 nhóm methyl, trong đó có 2 tín hiệu ở dạng singlet tại H 0,65 (H-18); 0,78 (H-19) và tín hiệu của 3 nhóm methyl còn lại đều ở dạng doublet tại H 0,90 (3H, d, H-21), 0,86 (3H, d, H-26); và 0,87 (3H, d, H-27).
Trên phổ 13C-NMR và DEPT cho biết ở vùng trường thấp có tín hiệu cộng hưởng carbon methyl C 66,6 ppm (C-3) tương ứng với proton tại H 4,03 ppm (H- 3). Hơn nữa cũng thấy rõ đặc trưng của 5 carbon methyl tại C 12,1 (q, C-18); 11,2 (q, C-19); 22,8 (q, C-26) ; 22,6 (q, C-27) tương ứng với phổ 1H-NMR chỉ ra tín hiệu của 5 nhóm methyl.
Hình 3.2. Phổ13C-NMR và DEPT của hợp chất SD5
Phân tích phổ HSQC và HMBC của SD5 chỉ ra một sốtương tác đặc trưng: H-18 tương tác với carbon tại ví trí C-12, C-13 và C-14, H-19 có tương tác với C- 1, C-10, và C-9, H-1 tương tác với C-2, C-19, và C-10.
Hình 3.3. Phổ HSQC của hợp chất SD5
Kết hợp các dữ liệu phổ thu được với tài liệu tham khảo đã cho phép khẳng định cấu trúc của chất SD5 hoàn toàn phù hợp với cấu trúc hoá học của 5α- cholestane-3α-ol. Bảng 3.1: Dữ liệu phổ của hợp chất SD5 CC δc ppm SBI-5 δc ppm (TLTK) δH (SBI-5) (J, Hz) C δc ppm (SBI-5) δc ppm (TLTK) δH (SBI-5) (J, Hz) 1 1 32,2 (t) 32,2 (t) 1.45 (m)/1.29 (m) 15 24,2 (t) 24,2 (t) 1.01 * 22 29,1 (t) 29,1 (t) 1.62 (m)/1.69 (m) 16 28,3 (t) 28,2 (t) 1,86 (2H,m) 33 66,6 (d) 66,5 (d) 4,03 (1H, br, s) 17 56,3 (d) 56,3 (d) 1,09 (1H) 44 35,9 (t) 35,9 (t) 1,49* 18 12,1 (q) 12,1 (q) 0,65 (3H, s) 55 39,2 (d) 39,1 (d) 1,52 (1H, m) 19 11,2 (q) 11,2 (q) 0,78 (3H, s) 66 28,6 (t) 28,6 (t) 1,21* 20 35,8 (d) 35,8 (d) 1.50* 77 32,0 (t) 32,0 (t) 1.67 (m)/1.48 (m) 21 18,7 (q) 18,7 (q) 0,90(3H,d,6.4Hz) 88 35,5 (d) 35,5 (d) 1,35* 22 36,2 (t) 36,2 (t) 1.39 (m)/0.98 (m) 99 54,4 (d) 54,3 (d) 0,74* 23 23,8 (t) 23,9 (t) 1.16 (m) /1.33 (m) 110 36,1 (s) 36,1 (s) - 24 39,5(t) 39,5 (t) 1,13 (2H) 111 20,8 (t) 20,8 (t) 1.55* 25 28,0 (d) 28,0 (d) 1,51 (1H,m) 112 40,1 (t) 40,1 (t) 1.96 (dt) 26 22,8 (q) 22,8 (q) 0,86 (3H,d, 6Hz) 113 42,6 (s) 42,6 (s) - 27 22,6 (q) 22,5 (q) 0,87 (3H,d,6Hz) 114 56,6 (d) 56,5 (d) 0,99 (1H, m)
3.2. Xác định cấu trúc hóa học của hợp chất SD6
SD6: Phổ1H-NMR của SD6 cũng tương tựnhư hợp chất SD5, quan sát thấy đặc trưng của proton thuộc carbon methyl liên kết với nhóm hydroxyl (OH) tại H 3,60 (1H, br, s, H-3). Ngoài ra cũng quan sát được tín hiệu của 5 nhóm methyl, trong đó có tín hiệu của 2 nhóm methyl ở dạng singlet tại H 0,53 (3H, s, H-18) và 0,79 (3H, s, H-19), tín hiệu proton của 3 nhóm methyl còn lại cũng như SD5 ở dạng doublet H 0,92 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-21), 0,86 (3H, d, J = 9,0 Hz, H-26), và 0,85 (3H, d, J = 9,0 Hz, H-27). Tuy nhiên có điều khác biệt là trên phổ hợp chất
SD6 xuất hiện tín hiệu của 1 proton olephin tại H 5,15 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-7).
Hình 3.5 Phổ1H-NMR của hợp chất SD6
Phổ 13C-NMR kết hợp với phổ DEPT của SD6 cho biết có tổng số 27 carbon, trong đó có 3 carbon bậc 4 (C), 8 nhóm carbon methyl (CH), 11 nhóm carbon methylen (CH2) và 5 carbon methyl (CH3). Như vậy khác với SD6, hợp chất SD6 mất đi 1 nhóm CH2, thay vào đó là có thêm một nhóm methyl và 1 carbon bậc 4, như vậy trong phân tử có thêm một nối đôi tại C 117,8 ppm (d) và 140,0 (s), điều này cũng phù hợp với phổ 1H-NMR xuất hiện thêm tín hiệu của
proton tương ứng tại H 5,15 ppm. Và tín hiệu của 5 nhóm methyl tại C 11,9 (q, C-18), 13,0 (q, C-19), 18,6 (q, C-21), 0,86 (q, C-26), 0,85 (q, C-27) với các proton tương ứng lần lượt tại H0,53; 0,79; 0,92; 0,86; 0,85 ppm. Điều này cho thấy SD6 phù hợp với đặc trưng của khung cholestane.
Hình 3.6. Phổ13C-NMR và DEPT của hợp chất SD6
Phân tích phổ HSQC và HMBC xác định được vị trí nối đôi ở C-7 và C-8. Trên phổHMBC cũng quan sát được tương tác xa giữa H-7 với C-6, C-5, và C-9; giữa H-18 với C-12, C-13, C-14, C-17.
Kết hợp phân tích các dữ liệu phổ thu được so sánh với tài liệu tham khảo cho phép xác định SD6 phù hợp với cấu trúc của hợp chất 5-cholest-7-en-3-ol.
Bảng 3.2:Dữ liệu phổ của hợp chất SD6 C δc ppm (SBI-7) δc ppm [TLTK] δH (SBI-7) (J, Hz) C δc ppm (SBI-7) δc ppm [TLTK] δH (SBI-7) (J, Hz) 1 37,1 (t) 37,1 (t) 1,83 (m) 15 22,9 (t) 22,9 (t) 1,52 (2H,m) 2 31,5 (t) 31,3 (t) 1,39(m) / 1.81 (m) 16 27,9 (t) 27,9 (t) 1,35 (2H,m) 3 71,5 (d) 71,7 (d) 3,60 (1H,br, s) 17 56,1 (d) 56,1 (d) 1,25 (1H) 4 38,0 (t) 37,8 (t) 1,71 (m)/1.28 (m) 18 11,9 (q) 11,8 (q) 0,535 (3H,s) 5 40,3 (d) 40,2 (d) 1,39 (1H, m) 19 13,0 (q) 12,9 (q) 0,79 (3H,s) 6 29,7 (t) 29,6 (t) 1,76 ( m)/1.77(m) 20 36,2 (d) 36,1 (d) 1,37 (1H) 7 117,8 (d) 117,2 (d) 5,15 (1H, d, 2Hz) 21 18,6 (q) 18,8 (q) 0,92 (3H,d, 6.5Hz) 8 140,0 (s) 139,3 (s) - 22 36,1 (t) 36,1 (t) 1,00 (2H, m) 9 49,5 (d) 49,4 (d) 1,63 (1H) 23 23,9 (t) 23,9 (t) 1.35 (2H) 10 34,2 (s) 34,1 (s) - 24 39,5 (t) 39,4 (t) 2,02(m)/1.13 (m) 11 21,6 (t) 21,5 (t) 1,55 (2H,m) 25 28,1 (d) 27,9 (d) 1,26(1H, m)/1.52 12 39,6 (t) 39,5 (t) 1,23 (2H) 26 22,6 (q) 22,5 (q) 0,86 (3H,d, 9.0Hz) 13 43,4 (s) 43,2 (s) - 27 22,8 (q) 22,7 (q) 0,85 (3H,d, 9.0Hz) 14 55,0 (d) 54,9 (d) 1,81 (1h)
KẾT LUẬN
1. Đã phân lập được 2 hợp chất khung cholestane từ loài sao biển Anthenea aspera. Các hợp chất 5α-cholestane-3α-ol, 5-cholest-7-en-3-ol, được phân lập bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng.
2. Cấu trúc của các hợp chất này được xác định nhờ vào các phương pháp phổ hiện đại như phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều (1H-NMR, 13C-NMR), hai chiều (COSY, HSQC, HMBC).
TÀI LIỆU THAM KHẢO
[1] http://www.vasi.gov.vn/757/da-xac-dinh-danh-muc-gan-12-000-loai-sinh-vat- bien-viet-nam/t708/c249/i907.
[2] L. H. Hyman, The Invertebrates, Vol. 4: Echinodermats, McGraw-Hill,(1955). [3] Antokhina T. I., O. V. Savinkhin, T. A. Britayev, Asteroidea of Vietnam with
some notes on their symbionts”, (2012).
[4] Đào Tấn Hỗ và c.s, Đa dạng sinh học của động vật Da gai ở Nha Trang và sự
suy giảm nguồn lợi của các loài kinh tế. Hội thảo Quốc gia về sinh thái và tài nguyên sinh vật lần thứ nhất, NXB Nông nghiệp, Hà nội, (2005), 568-572. [5] Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm, Nguyễn Văn Hùng, Nguyễn Hoài Nam, (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
P.V.Cường, Dược liệu biển Việt nam thực trạng và cơ hội phát triển, NXB Khoa học tự nhiên và công nghệ, Hà nội (2012), 59-60.
[6] Blunt J.W et al., Copp B.R.., Munro M.H.G., Northcode P.T., Prinsep M. R,
Marine natural products, Nat. Prod. Rep, 23 (2006) 26-78.
[7] Chong Jiang, kennet G.Boyd, Andrew Mearns spragg- Two Diketopiperazines and One Halogenated Phenol from Cultures of the Marine Bacterium Pseudoalteromonas luteoviolacea, Natural Product Letters, (2000), 14 (6) 435-440.
[8] Phan Tống Sơn, Phan Minh Giang, Hóa học các hợp chất thiên nhiên tập 1, NXB Văn hóa dân tộc, (2016)
[9]. Riccio, Rs. et al., Tet. Lett., (1982), 23, 2899.
[10]. Findlay, J.A. et al., J. Nat. Prod., (1983), 46, 876-880. [11]. Honda, M. et al., Tet. Lett., (1986), 27, 3369-3372. [12]. Pizza, C et al., Gazz. Chim. Ital., (1985), 115, 585. [13]. Casapullo, A. et al., J. Nat. Prod., (1993), 56, 105-115.
[14]. F. De Riccardis, L. Minale, E. Palagiano, R. Ricco, Two novelpolyhydroxysteroids with a 24-Ethyl hydroxy suloxy side chain from the deep water starfish Styracaster caroli, Joural of Natural Products, (1996), 59, 368-390.
[15]. M. Iorizzi, F. De Riccardis, I. Izzo, E. Palagiano, L. Minale, R. Ricco, C. Debitus, D. Duhet, Polyoxygenated marine steroids from the deep water starfish Styracaster caroli, Joural of Natural Products, (1994), 57, 1361-1373. [16]. F. De Riccardis, I. Izzo, M. Iorizzi, E. Palagiano, L. Minale, R. Ricco, Two
novelpolyhydroxysteroids with a 24-Ethyl hydroxy suloxy side chain from the deep water starfish Styracaster caroli, Joural of Natural Products, (1996), 59, 386-390.
[17] M. Iorizzi, G. Bifulco, F. Riccardis, l. Minale, R. Ricco, F. Zollo, A reinvestigation of the polar steroids from the starfish Oreaster reticulatus: isolation of sixteen steroidal oligoglycosides and six polyhydroxysteroids, (1995).
[18] Trịnh Thị Thu Hương, Nghiên cứu thành phần hóa học của loài sao biển Anthenea pentagonula, Luận văn thạc sỹ, (2007).
[19] Châu Văn Minh, Nguyễn Văn Cường, Nguyễn Văn Thanh, Hoàng Thanh Hương, Phan Văn Kiệm, Highly oxygenated sterols from the starfish Archaster typicus, Journal of Chemistry, (2007), 377-381.
[20] Nguyễn Văn Thanhvà c.s, Nghiên cứu thành phần hóa học và khảo sát hoạt
tính gây độc tế bào in vitro của loài Hải sâm Holothuria scabra và loài sao biển Archacter typicus sinh sống tại vùng biển Việt Nam, (2008).
[21] Higuchi, R. et al., Annalen, (1988), 1185-1189.
[22] M. Honda, T. Igarashi, N. Marubayashi, T. Komori, Biologicallly active glycosides from asteroidea, (1991), 595-598.
[23] [24] Y. Peng, J. Zheng, R. Huang, Y. Wang , T. Xu, X. Zhou, Q. Liu, F. Zeng, H. Ju, X. yang, Y. Liu, Polyhydroxy steroids and saponins from China sea starfish Asterina pectinifera and their biological activities, Chemical & pharmaceutical bulletin, (2010), 58, 856-858.
[25] Kicha AA, Ivanchina NV, Kalinovsky AI, Dmitrenok PS, Smirnov AV. Two new steroid glycosides from the Far East starfish Hippasteria kurilensis. Rus J. Bioorg Chem , (2009), 35.
[26] Ngoan BT,Hanh TT, Vien le, Diep CN, Thao NP, Thao do T, Thanh NV, Cuong NX, Nam NH, Thung do, Kiem PV, Kim YH, Minh CV,
Asterosaponins and glycosylated polyhydroxysteroids from the starfish Culcita novaeguineae and their cytotoxic activities, (2015).