L Ờ IC ẢM ƠN
4.1. Kết quả xác định độ nhớt và hàm lượng Polysaccaride của cácchủng
4.1. Kết quảxác định độ nhớt và hàm lượng Polysaccaride của các chủng VSV sinh màng nhầy VSV sinh màng nhầy
Căn cứ vào phân lập tuyển chọn các chủng vi sinh VSV sinh màng nhầy trong phòng thí nghiệm đã tiến hành sử dụng 11 chủng VSV sinh màng nhầy để đánh giá độ nhớt và hàm lượng polysaccarits tạo được thành, kết quả được trình bày qua bảng 4.2.
Bảng 4.2: Độ nhớt của 11 chủng VSV sinh màng nhầy STT Ký hiệu mẫu Độ nhớt (centipoise, cP) 1 P40 9 2 P41 7 3 P43 8 4 P47 5 5 P51 2 6 P52 8 7 P16 3 8 P16.1 4 9 P19 2 10 P21 1 11 P44 3
Từ kết quả thí nghiệm và bảng 4.2ta có biểu đồ hình 4.2
Hình 4.2. Biểu đồ khả năng tạo độ nhớt của các chủng VSV sinh màng nhầy
Hình 4.3. Khảnăng sinh polysaccarit của chủng P16.1 và P51
Theo bảng số liệu 4.2 và biểu đồ hình 4.2 ta thấy cả 11chủng đều có khả năng tạo độ nhớt, trong đó:
Chủng P40 sản sinh ra lượng Polysaccarrit lớn nhất, đạt 9 centipoise.
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 P40 P41 P43 P47 P51 P52 P16 P16.1 P19 P21 P44 Độ nhớt (centipoise, cP) Độ nhớt (centipoise, cP)
Chủng P21 sản sinh ra lượng Polysaccarrit ít nhất, đạt 1 centipoise. Hai chủng P43 và P52 đều sản sinh được lượng Polysaccarrit là 8 centipoise. Các chủng còn lại sản sinh lượng Polysaccarrit ở mức độ trung bình 3-5 centipose.
P.43 P.52
P.40 P.51
Hình 4.4: Các chủng vi khuẩn sinh màng nhầy tiến hành nghiên cứu 4.2. Kết quảxác đinhmôi trường nhân sinh khối phù hợp
Thí nghiệm chỉ thực hiện đối với 3 chủng VSV có khả năng sinh màng nhày có chỉ số độ nhớt cao nhất: P.40; P.43; P.52.
Mỗi chủng vi khuẩn có môi trường dinh dưỡng phù hợp khác nhau được thể hiện ở khả năng sinh trưởng (mật độ lạc khuẩn hữu hiệu trên 1 ml dung dịch nuôi cấy là lớn nhất). Chính vì vậy, nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến mật độ khuẩn lạc giúp chúng ta biết được trên môi trường nào
vi khuẩn có khả năng sinh trưởng và phát triển tốt nhất, từ đó xác định được môi trường nhân sinh tốt nhất. Thí nghiệm được thực hiện trên 3 môi trường dinh dưỡng khác nhau, kết quả thí nghiệm được trình bày ở bảng 4.3.
Bảng 4.3: Ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến môi trường mật độ vi khuấn sinh màng nhầy
TT Môi trường nhân sinh khối
Mật độ tế bào hữu hiệu của các chủng vi khuẩn sinh màng nhầy
(CFU/ml)
P.43 P.40 P.52
1 Môi trường PD 3.9 x 109 5.4 x 109 6.7 x 109
2 Môi trường Hansen 5.7 x 109 7.2 x 109 5.2 x 109
3 Môi trường King’ B không có agar 5.3x 109 5.9 x 109 5.5 x 109
Qua thí nghiệm đã tiến hành ở 3 MT khác nhau và kết quả ở bảng 4.3 ta có biểu đồ hình 4.3.
Hình 4.5. Biều đồ mức độ phát triển của các chủng vi sinh vật ở các môi trường nhân sinh khối khác nhau
0 1 2 3 4 5 6 7 8 P.43 P.40 P.52 MT PD MT Hansen MT King' B
Qua bảng số liệu bảng 4.3 và hình 4.5 cho thấy các chủng khuẩn sinh màng nhầy này đều có khả năng sinh trưởng ở 3 môi trường dinh dưỡng. Ngoài ra bảng số liệu cho thấy có sự chênh lệch về mật độ khuẩn lạc của cácchủng khi được nuôi cấy ởcác môi trường khác nhau:
- Đối với 2 chủng P40 và P43 mật độ tế bào cao nhất khi nuôi cấy trong môi trường Hansen, mật độ tếbào đạt tới 5.7*109 và 7.2*109 CFU/ml.
- Chủng P52 ở môi trường PD cho thấy mật độ tế bào đạt cao nhất 6.7*109 CFU/ml.
Kết luận: Qua kết quả thí nghiệm đã tiến hành và số liệu ở bảng 4.3
cho thấy MT Hansen là MT tốt nhất để nuôi cấy chủng P40 và P43, còn MT PD là môi trường thích hợp để nuôi cấy chủng P52.
MT King’B không agar MT Hansen MT PD
Hình 4.6. Mật độ khuẩn lạc của chủng P43 ở 3 môi trường nuôi cấy 4.3. Kết quảđánh giá ảnh hưởng của nhiệt độđến sựsinh trưởng của các chủng VSV sinh màng nhầy
Sự phù hợp của nhiệt độ đến từng chủng VSV biểu hiện ở khả năng sinh trưởng của chúng (mật độ khuẩn lạc hữu hiệu trên 1ml dung dịch nuôi cấy là lớn nhất). Ở mỗi loài vi khuẩn thì sự phù hợp với các nhiệt độ là khác nhau đểđảm bảo được mật độ khuẩn lạc hữu hiệu tối ưu thí nghiệm được thực
hiện trên 8 chế độ nhiệt độ khác nhau: 50C, 100C, 150C, 200C, 250C, 300C, 350C, 400C kết quả thí nghiệm được trình bày ở bảng 4.4.
Bảng 4.4: Ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy đến mật độ tế bào vi khuẩn sinh màng nhầy
TT Chủng VSV Mật độ tế bào hữu hiệu của các chủng VSV (cfu/ml) 5oC 10oC 15oC 20oC 25oC 30oC 35oC 40oC 1 P43 6,3.104 7,4.105 7,1.107 9,7.108 3,8.109 2,5.109 8,2.107 8,5.107 2 P40 6,7.104 6,8.105 6,8.107 1,9.109 4,1.109 3,5.109 7,9.107 6,8.107 3 P52 6,1.104 5,5.105 5,4.107 8,7.108 2,3.109 1,1.109 8,3.107 9,7.107
Thí nghiệm xác định nhiệt độ nuôi cấy phù hợp với các chủng vi khuẩn sinh màng nhầy được thực hiện ở 8 thang nhiệt độ từ 5 đến 40 độ C. Qua bảng số liệu ta có thể thấy rằng các chủng vi sinh vật đều có thể sinh trưởng được trong khoảng nhiệt độ từ 5 đến 400C. Nhưng khi ở điều kiện nhiệt độ 5 và 100C các chủng VSV phát triển kém, mật dộ tế bào chỉ đạt được 105CFU/ml.
Khi thí nghiệm tăng nhiệt độ từ10 đến 250C mật độ tế bào ở từng thang nhiệt độ cũng tăng lên.
Mật độ tế bào đạt cao nhất khi nuôi cấy ở 25oC.
Khi tăng nhiệt độ lên trên 250C mật độ tế bào có trong môi trường nuôi cấy bắt đầu giảm.
Nhìn chung, 3 chủng VSV đều có khả năng sinh trưởng ở nhiệt độ từ 5 đến 40oC nhưng qua bảng 4.4 ta thấy mức nhiệt độ mà cả 3 chủng VSV sinh trưởng tốt nhất là 25oC cho thấy mức nhiệt độ 25oC là thích hợp nhất để nuôi cấy 3 chủng VSV.
5 oC 10 oC 15 oC 20 oC
25 oC 30 oC 35 oC 40 oC
Hình 4.7. Mật độ khuẩn lạc của chủng P40 ở 8 thang nhiệt độ khác nhau 4.4. Kết quả đánh giá ảnh hưởng của ẩm độ đến sự sinh trưởng của các chủng VSV sinh màng nhầy
Qua thí nghiệm tiến hành để đánh giá ảnh hưởng của ẩm độ đến sự sinh trưởng của 3 chủng VSV P40, P43 và P52 đã thực hiện với 5 mức ẩm độ khác nhau từ 60% đến 100% và kết quả được trình bày tại bảng 4.5.
Bảng 4.5: Ảnh hưởng của ẩm độ môi trường đến đường kính khuẩn lạc vi khuẩn sinh màng nhầy
STT KH Mẫu Ẩm độ (mm)
60% 70% 80% 90% 100%
1 P40 15.2 19 22.5 17.5 16
2 P43 13.5 15.5 18 14.5 12.5
Từ bảng 4.5 ta có biểu đồ hình 4.8.
Hinh 4.8. Biểu đồ ảnh hưởng của độ ẩm nuôi cấy đến đường kính khuẩn lạc vi sinh vật sinhmàng nhầy sau 10 ngày nuôi cấy
Qua bảng số liệu 4.5 và biểu đồ 4.5, sau 10 ngày nuôi cấy, các chủng vi sinh vật sinh màng nhầy sinh trưởng và phát triển được ở cả 5 thang ẩm độ thí nghiệm.
Chủng P.40 phát triển mạnh nhất so với 2 chủng VSV còn lại, đạt đường kính khuẩn lạc lớn nhất 22.5 mm.
Cả 3 chủng VSV đều đạt đường kính lớn nhất ởđiều kiện độẩm 80%. Khi độ ẩm tăng từ 60 đến 80%, đường kính khuẩn lạc trên môi trường nuôi cấy cũng tăng theo.
Độ ẩm tăng từ 80% đến 100%, đường kính khuẩn lạc giảm dần.
0 5 10 15 20 25 P40 P43 P52 60% 70% 80% 90% 100%
60% 70% 80%
90% 100%
Hình 4.9: VSV P.43 ở các ẩm độ khác nhau sau 5 ngày nuôi cấy
Sau 10 ngày nuôi cấy trên môi trường PDA, chủng P43 sinh trưởng và phát triển được ở cả 5 thang ẩm độ nghiên cứu.
Ở điều kiên ẩm độ 80%, khuẩn lạc của chủng P.43 có đường kính lớn nhất, đạt 18 mm.
Ở điều kiện ẩm độ 60%, khuẩn lạc có đường kính nhỏ nhất, đạt 13.5 mm. Khi ẩm độ tăng từ 60 đến 80%, đường kính khuẩn lạc tăng dần. Đường kính khuẩn lạc giảm khi ẩm độtăng từ80 đến 100%.
Qua kết quả phân tích cho ta thấy, cả 3 chủng P40, P43 và P52 đều có thể sinh trưởng ở các mức ẩm độ từ 60 đến 100% nhưng qua bảng 4.5 và biểu đồ hình 4.8 cho thấy mức ẩm độ thích hợp để nuôi cấy của cả 3 chủng là mức ẩm độ 80%.
PHẦN 5
KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ
5.1. Kết luận
- Khóa luận đã bước đầu xác định được 3 chủng P40, P43, P52 có khả năng sản sinh ra lượng Polysaccarrit lớn nhất, đạt 8 centipoise trở lên.
- Tiếp tục đánh giá sinh trưởng và phát triển của 3 chủng Vi sinh vật sinh màng nhầy ở các môi trường nuôi cấy khác nhau, các điều kiện nhiệt độ và ẩm độkhác nhau, có được kết quả:
+ Chủng P40 khi tiến hành lắc nhân sinh khối đạt mật độ cao nhất ở môi trường Hansen, mật độ đạt được 7,2 x 109CFU/ml, nhiệt độ nuôi cấy tốt nhất ở khoảng 25oC.
+ Chủng P43 nhân sinh khối đạt mật độ cao nhất ở môi trường Hansen nhiệt độ nuôi cấy khoảng 25oC,mật độđạt được 5.7 x 109CFU/ml.
+ Chủng P52 nhân sinh khối đạt mật độ cao nhất ở môi trường PD đạt 6.7 x 109, nhiệt độ nuôi cấy tốt nhất khoảng 25oC.
+ Cả 3 chủng P40, P43, P52 đều sinh trưởng tốt nhất ởẩm độ 80%.
5.2. Kiến nghị
Tiếp túc nghiên cứu ảnh hưởng của các điều kiện sinh trưởng: thời gian nhân sinh khối, tốc độ lắc, pH môi trường của 3 chủng VSV, tiến hành định danh xác định mức độ an toàn sinh học.
TÀI LIỆU THAM KHẢO I. Tài liệu tiếng Việt
1. Nguyễn Kiều Băng Tâm (2009), Chế phẩm nấm men Lipomyces sinh màng nhầy nhằm giữ ẩm và cải thiện một số tính chất đất dốc tại huyện Mê Linh, tỉnh Vĩnh Phúc, Luận án Tiến sỹ trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc Gia Hà Nội
2. Tống Kim Thuần, Đặng Thị Mai Anh, Đỗ Thị Thu Phương (2005), Nghiên cứu sản xuất chế phẩm giữ ẩm vi sinh vật giữ ẩm Lipomycin starkeyi PT7.1 trên cơ chất bột sắn. Những vấn đềcơ bản trong nghiên cứu sinh học sự sống. Báo cáo khoa học tại Hội nghị Toàn quốc lần thứ 5. Đại học Y Hà Nội 3/11/2005
3. Nguyễn Thị Thúy Nga (2010). “Phân lập, tuyển chọn vi sinh vật có khả năng phân giải xenlulo hiệu lực cao, phù hợp với điều kiện đất bạc màu và đặc điểm sinh học của chúng để sản xuất phân vi sinh cho cây lâm nghiệp”. Tạp chí khoa học lâm nghiệp, Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt
Nam số 4/2010.
II. Tài liệu tiếng Anh
4. Lu WJ., Wang HT., Nie YF., Wang ZC., Huang HY., Qiu XY., Chen JC. (2005), “Effect of inoculating flower stalks and vegetable waste, Awith ligno- cellulolytic microorganisms on the composting process”, Journal of Environmental Science and Health B.39 (5-6), pp.871-875
5. Hsi-Jien Chen, Han-Ja Chang, Chahhao Fan, Wen-Hsin Chen, Meng (2011). “Screening, isolation and characterization of xenlulo biotransformation bacteria from specific soils”, International Conference on Environment and Industrial Innovation IPCBEE vol.12 (2011) IACSIT Press, Singapore.
6. Lamot E.L and Voets J.P. (1978), “Microbial bio - degradation of cellophane”, Zeitschrift fur allgemeine.18, pp.183-188.
7. Bashir Ahmad, Sahar Nigar, S. Sadaf Ali Shah, Shumaila Bashir, Javid Ali, Saeeda Yousaf an Javid Abbas Bangash (2013), “Isolation and Identification of Xenlulo Degrading Bacteria from Municipal Waste and their Scereening for potenital Antimicrobitial Activity”, World applied sciences Journal 27 (11): 1420-1426, 2013
PHỤ LỤC
MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM