PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1. đỐI TƯỢNG
3.1.1. Dược liệu thắ nghiệm:
Cây Bồ công anh. Tên khoa học Lactuca indica L. Thuộc họ Cúc Asteraceae.
3.1.2. động vật thắ nghiệm: Gà thịt giống Ross 308
3.2. NỘI DUNG
đểựạt ựược các mục tiêu nêu trên của ựề tài, chúng tôi cần thực hiện các nội dung sau:
Bào chế thử nghiệm các dạng chế phẩm của cây Bồ công anh: dạng bột, cao ựặc và nước sắc. Thông qua các thắ nghiệm ở phần sau ựể so sánh hiệu quả của 3 dạng trên cơ sở ựó chọn dạng bào chế cũng như cách sử dụng thắch hợp với ựiều kiện chăn nuôi gà.
Ảnh hưởng của các dạng bào chế từ cây BCA ựến khả năng tăng trọng trên ựàn gà thịt.
Ảnh hưởng của các dạng bào chế từ cây BCA ựến khả năng phòng một số bệnh thường gặp trên ựàn gà thịt.
Ảnh hưởng của các dạng bào chế từ cây BCA ựến một số chỉ tiêu sinh lý máu.
Ảnh hưởng của các dạng bào chế từ cây BCA ựến hiệu quả sử dụng thức ăn.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ32
Ảnh hưởng của các dạng bào chế từ cây BCA ựến năng suất gà lúc 42 ngày tuổi.
3.3. NGUYÊN LIỆU
3.3.1. Dược liệu:
Cây BCA. Tên khoa học Lactuca indica L. Thuộc họ Cúc Asteraceae. BCA khô ựược mua tại cửa hàng dược liệu, loại bỏ tạp chất, rửa sạch, ựể ráo nước, bào chế thành các dạng khác nhau tuỳ mục ựắch.
3.3.2. Dụng cụ, hoá chất:
Dụng cụ: bếp ựiện, xoong, tủ sấy, tủ lạnh, kắnh hiển vi quang học, cân tiểu ly, cân ựĩa, buồng ựếm Newbaoer, cốc ựong, phiến kắnh, pipet, bình tam giác các loại, cồn, thuốc nhuộm tiêu bản, dung dịch ựếm hồng cầu, dung dịch ựếm bạch cầu, natri xitrat, dung dịch HayemẦ
3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
- Nghiên cứu theo dõi tác dụng phòng trị bệnh của các dạng chế phẩm từ cây Bồ công anh theo phương pháp dược lý thực nghiệm trong từ ựiển Bách khoa dược học, 1999 và Dược ựiển Việt Nam, 2002.
- Phương Pháp bào chế các chế phẩm của cây Bồ công anh dạng: bột, cao ựặc và nước sắc dược liệu theo giáo trình ỘBào chế ựông dượcỢ(2000); giáo trình ỘDược học cổ truyềnỢ (2000) của trường đại học Y Hà Nội, khoa Y học Cổ truyền, và giáo trình ỘKỹ thuật bào chế và sinh dược học các dạng thuốcỢ tập I và II (2004) của bộ môn Bào chế trường đại học Dược Hà Nội. Kiểm nghiệm ựịnh tắnh các dạng chế phẩm theo Dược ựiển Việt Nam 2002. Các dạng chế phẩm trên cần thêm một ựiều kiện nữa là phải phù hợp với ựiều kiện chăn nuôi gà ở Việt Nam.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ33
(Bộ môn Dược học cổ truyền, 2000) [2]. 3.4.1.1. Bào chế bột BCA
Bồ công anh khô (mua tại cửa hàng thuốc nam) ựem về làm sạch lại bằng cách sàng sẩy ựể tiếp tục loại bỏ các tạp chất lạ nếu còn, sau khi làm sạch, ựem sấy khô ở nhiệt ựộ 600c, cân trọng lượng lại và ựem nghiền thành bột mịn qua rây số 24 ộm (rây số 24). Sấy khô lại ở nhiệt ựộ 500C sau khi nghiền nếu cần thiết (bột chưa ựạt ựộ ẩm tiêu chuẩn). Bột ựược ựóng thành các gói nhỏ 100g, 500g và 1000g ựể bảo quản trong hộp xốp nơi thoáng mát. 3.4.1.2. Bào chế cao ựặc BCA
Dược liệu khô (mua tại cửa hàng thuốc nam) ựem về làm sạch lại bằng cách sàng sẩy ựể tiếp tục loại bỏ các tạp chất lạ nếu còn, cân lấy vừa ựủ 1kg dược liệu ựã làm sạch. Sau ựó rửa sạch thật nhanh dược liệu ựể loại ựất cát còn lẫn trong thuốc, chờ ráo nước, bỏ dược liệu ựó cho vào nồi nhôm dầy. Cứ 1 kg dược liệu cho vào 5 lắt nước, ngâm 2- 3 giờ, sắc trên bếp ựiện, nhỏ lửa ựến sôi, ựảo ựều dược liệu. Chú ý không ựể trào dịch chiết hoặc cháy dược liệu, sau 2 giờ tắnh từ lúc bắt ựầu sôi chắt dịch chiết. Sắc lần 2 thêm 3 lắt nước lại tiếp tục sắc trong vòng 2 giờ kể từ khi sôi. Khi chắt dịch chiết lần 2 cần ép bã thuốc ựể lấy hết dịch thuốc còn lại. Sau ựó trộn ựều, gộp 2 lần nước chắt ựược chờ nguội lọc qua hai lớp vải gạc có ựộn lớp bông ở giữa.
Tiếp tục cô cách thủy dịch chiết thu ựược ở hai lần sắc thành dạng cao mềm (nghiêng bát không chảy ra ngoài). Tiếp tục cô cao mềm ở tủ sấy 500C cho ựến khi khối lượng không ựổi thành dạng cao ựặc.
Dựa vào kết quả nghiên cứu của năm trước khi theo dõi ựộ an toàn và tác dụng của các nồng ựộ cao ựặc 10%, 15%, 20% và 40% trong phòng thắ nghiệm trên ựộng vật, chúng tôi thấy cao ựặc Bồ công anh nồng ựộ 20% và 40% cho kết quả tốt. Nhưng nếu sử dụng nồng ựộ 40% sẽ lãng phắ thuốc.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ34
Trên cơ sở ựó năm nay chúng tôi tiếp tục theo dõi tác dụng của cao ựặc nồng ựộ 20% bổ sung vào nước uống cho gà. Cách pha như sau: cân 20 gam cao ựặc BCA cho vào bình tam giác, thêm 30 ml nước cất lắc nhẹ chờ cao tan hoàn toàn, sau cùng thêm nước cất vừa ựủ 100 ml.
Chế nước sắc cô ựặc BCA 20%: So với bào chế cao ựặc BCA, phương pháp bào chế nước sắc cô ựặc ựơn giản và tiết kiệm hơn nhiều cả về thời gian và chi phắ. Liệu nước sắc cô ựặc có tác dụng tốt như cao ựặc hay không nhất là thời gian và ựiệu kiện bảo quản? ựể trả lời câu hỏi này chúng tôi ựã bố trắ thắ nghiệm so sánh hiệu quả của 2 dạng chế phẩm này trên gà thắ nghiệm.
Phương pháp bào chế nước sắc giống như bào chế cao ựặc, nhưng nước sắc khi cô cách thủy tới thể thể tắch pha ựược từ cao ựặc Bồ công anh 20% với khối lượng nguyên liệu tương ứng dừng lại. tức cứ 1kg dược liệu sau khi ựã làm sạch, sắc 2 lần như nêu trên rồi ựem cô cách thuỷ ựến khi lượng dịch chiết cô ựặc còn lại ựúng 500ml.
3.4.2. Bố trắ thắ nghiệm
Gà thịt thương phẩm nuôi theo phương thức công nghiệp với hình thức nuôi trên nền có ựệm lót, chuồng kắn ựể khống chế nhiệt ựộ. đàn gà ựược chăm sóc theo quy trình hướng dẫn của Công ty Dabaco và ăn thức ăn hỗn hợp của Công ty sản xuất.
Thắ nghiệm ựược tiến hành trên gà thịt từ 7 ựến 42 ngày tuổi. Gà thắ nghiệm khỏe mạnh, ựược tiêm phòng ựầy ựủ các vacxin theo ựúng lịch, khối lượng gà ở các lô tương ựối ựồng ựều. Tất cả các gà ựược chọn làm thắ nghiệm ựều sống trong một chuồng nuôi có tiểu khắ hậu như nhau, chế ựộ chăm sóc nuôi dưỡng như nhau.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ35
Gà thắ nghiệm ựược phân thành 03 lô và 01 lô ựối chứng
Các lô thắ nghiệm Gà thắ nghiệm (con/lô) PP bổ sung 1: đối chứng
2 : Bổ sung bột BCA 5% 3: Bổ sung cao BCA 20% 4: Bổ sung nước sắc BCA 20%
200 200 200 200 - Trộn thức ăn Nước uống Nước uống 3.4.3. Phương pháp bổ sung Với chế phẩm bột : Trộn thức ăn của gà vào buổi sáng. Với chế phẩm cao và nước sắc: cho uống vào buổi sáng.
Trước khi bổ sung, úp máng ăn, cắt nước cho gà nhịn ựói, nhịn khát khoảng 30 phút. Gà uống ựến khi hết lượng nước thuốc hoặc ăn hết lượng thức ăn trộn bột BCA thì lại cho gà ăn, uống nước bình thường.
Lô bột BCA 5%: bổ sung vào thức ăn (5% lượng thức ăn trong ngày). Theo liệu trình sau:
Trong tuần thứ hai (từ 7-14 ngày tuổi), chúng tôi bổ sung các chế phẩm: bột, cao BCA, nước sắc cô ựặc hàng ngày cho các lô gà thắ nghiệm theo công thức quy ựịnh ở phần trên.
Từựầu tuần thứ ba (gà 14 ngày tuổi) ựến xuất chuồng, chúng tôi bổ sung các chế phẩm BCA theo lịch trình cách 3 ngày.
3.4.4. Phương pháp cân khối lượng gà
Chúng tôi tiến hành cân khối lượng gà các lô thắ nghiệm và lô ựối chứng ở các ngày tuổi: 7 ngày, 14 ngày, 21 ngày, 28 ngày, 35 ngày và 42 ngày. Mỗi lô chúng tôi bắt ngẫu nhiên 10 con, Từ ngày 28 trởựi khi giới tắnh gà ựã rõ, nên bắt cân bằng cả sống và mái (5 sống và 5 mái) cân từng con ựể lấy khối lượng trung bình.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ36
Tại thời ựiểm 7, 14, 21, 35 và 42 ngày tuổi, ngoài cân ngẫu nhiên 10 con, chúng tôi còn cân cả lô ựể làm cơ sở xác ựịnh hệ số tiêu thụ thức ăn.
3.4.5. Phương pháp xét nghiệm chỉ tiêu sinh lý máu. 3.4.5.1 đếm số lượng hồng cầu
(Hồ Văn Nam và cộng sự, 1997) [13] .
đếm qua kắnh hiển vi quang học những hồng cầu tươi trong một khối lượng máu ựã ựược pha loãng chắnh xác, ghi kết quả ựếm ựược trên 1mm3 máu.
Chuẩn bị: + Máu gà
+ Dung dịch pha loãng hồng cầu + Buồng ựếm Newbauer
Tiến hành:
Dùng ống hút Thomas hút máu ựến vạch 0,5 hút tiếp dung dịch pha loãng hồng cầu ựến vạch 101, ựảo nhẹ ựể máu hòa ựều trong dung dịch pha loãng. đậy Lamen lên mặt buồng ựếm, cho dung dịch pha loãng hồng cầu vào buồng ựếm (chú ý bỏ ựi vài giọt ựầu rồi mới cho dung dịch vào buồng ựếm, không ựược ựể không khắ lọt vào). đợi sau 2- 3 phút ựể hồng cầu lắng xuống rồi mới ựưa lên kắnh hiển vi ựểựếm.
Cách tắnh kết quả : ựếm tất cả hồng cầu có ở trong 5 ô trung bình. Chú ý mỗi ô trung bình có 4 cạnh, những hồng cầu nằm trên 4 cạnh chỉ ựếm hồng cầu ở hai cạnh.
Gọi số hồng cầu ựếm ựược ở 5 ô trung bình là A thì số hồng cầu có trong 1 mm3 máu là : A x 10000
3.4.5.2. đếm số lượng bạch cầu
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ37
Chuẩn bị: +Máu gà
+Dung dịch pha loãng bạch cầu + Buồng ựếm Newbauer
Tiến hành:
Dùng ống hút thomas hút máu ựến vạch 0,5 hút tiếp dung dịch pha loãng bạch cầu ựến vạch 11, ựảo nhẹ ựể máu hòa ựều trong dung dịch pha loãng. đậy lamen lên mặt buồng ựếm, cho dung dịch pha loãng bạch cầu vào buồng ựếm (chú ý bỏ ựi vài giọt ựầu rồi mới cho vào buồng ựếm, không ựược ựể không khắ lọt vào). đợi sau 2- 3 phút ựể hồng cầu lắng xuống rồi mới ựưa lên kắnh hiển vi ựểựếm. Cách tắnh kết quả: đếm tất cả bạch cầu ở 4 ô to ở 4 góc buồng ựếm Chú ý mỗi ô to có 4 cạnh, những bạch cầu nằm trên 4 cạnh thì chỉ ựếm bạch cầu ở hai cạnh. Gọi số bạch cầu ựếm ựược ở 4 ô to là B thì số hồng cầu có trong 1 mm3 máu là B x 50 3.4.5.3. Cách ựo huyết sắc tố (Hồ Văn Nam và cộng sự, 1997) [13] .
Nguyên tắc: cho HCl vào máu nó sẽ kết hợp với hemoglobin thành acid hematin chloric màu nâu sẫm, rồi ựem so với ống chuẩn.
Ống Shali: gồm ống ựo ở giữa, hai ống mẫu ở hai bên. Ống mẫu màu vàng nâu, tương ựương với dung dịch 1% hemoglobin; ống ựo hình trụ tròn, dọc theo ống ựo có hàng cột số, ghi số gam hemoglobin (g%)
Tiến hành: cho HCl 0,1N vào ống so màu ựến vạch 2. Hút máu vào ống hút tới vạch 0,02; dùng bông lau sạch máu dắnh ngoài ống hút. Cho ống hút
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ38
xuống tận ựáy ống so màu, thổi nhẹ cho máu vào hết ống. Từ từ ựưa ống hút lên, hút dung dịch HCl ở phắa trên ựể tráng máu trong ống hút. Lắc nhẹ ựể máu và acid trộn ựều. để yên trong 5 phút cho hemoglobin tác dụng với acid tạo thành hermatin chloric. Cho vào vài giọt nước cất và dùng ựũa thuỷ tinh khuấy ựều ựến khi màu của ống ựo ngang bằng màu của ống chuẩn. đọc số gam trên ống ựo là số gam hemoglobin trong 100 ml máu.
3.4.5.4. Xác ựịnh công thức bạch cầu
Sau khi lấy máu phiết kắnh 3 tiêu bản/01 con, mỗi lô lấy 10 con. Máu lấy tươi (chắch lấy 01 giọt, không dùng Nitrat natri) ựể phiết kắnh. Phiến kắnh ựược sử lý nhuộm HE.
Quan sát trên kắnh hiển vi quang học, có máy ựếm các loại bạch cầu, ựếm ựủ 100 bạch cầu các loại. Số lượng mỗi loại bạch cầu có trong 100 bạch cầu của vi trường là công thức bạch cầu.
3.4.6. Phương pháp mổ khảo sát năng suất thịt gà thắ nghiệm
Theo phương pháp của Uỷ ban gia cầm Ờ Viện hàn lâm khoa học Nông nghiệp Bỉ (dẫn theo Nguyễn Chắ Bảo, 1978)[25] .
Bước 1 (chọn mẫu): Chọn mỗi lô 3 trống, 3 mái với khối lượng xấp xỉ khối lượng trung bình của lô, ựeo số cho từng con ựểựánh dấu.
Bước 2: để gà nhịn ựói từ 12 ựến 18 giờ, chỉ cho uống nước, sau ựó cân ựể kiểm tra khối lượng sống.
Bước 3: Cắt tiết và cân khối lượng sau khi cắt tiết.
Bước 4: Vặt lông, mổ gà lấy nội tạng, treo khô từ 15 Ờ 20 phút, sau ựó cân ựể có khối lượng móc hàm và cân nội tạng ựể lấy khối lượng nội tạng.
Bước 4: Bỏ ựầu (cắt tại xương chẩm), cắt chân (cắt tại khớp khuỷu) rồi cân ựể lấy khối lượng thân thịt.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ39
Bước 6: Chia gà thành hai phần, chỉ lấy phần bên trái ựể so sánh, cân khối lượng cơựùi trái và cơ ngực trái.
Bước 7: Bóc lấy hai lá mỡ bụng cân ựể tắnh khối lượng mỡ bụng.
3.4.7. Một số công thức sử dụng trong thắ nghiệm.
+ Khối lượng sống (kg): khối lượng sau khi gà ăn 12 giờ. + Khối lượng thân thịt (kg)
Khối lượng gà sau khi cắt tiết, vặt lông bỏ nội tạng, cắt ựầu ở ựoạn giữa xương chẩm và xương atlat, cắt chân ởựoạn khớp khuỷu.
Khối lượng thân thịt (g) Tỷ lệ thân thịt (%) =
Khối lượng sống (g) x 100 Khối lượng thịt ựùi trái (g) x 2
Tỷ lệ cơựùi (%) = Khối lượng thân thịt (g) x 100 Khối lượng thịt ngực trái (g) x 2 Tỷ lệ cơ lườn (%) = Kh ối lượng thân thịt (g) x 100 Khối lượng mỡ bụng (g) Tỷ lệ mỡ bụng (%) = Khối lượng sống (g) x 100 - Lượng thức ăn thu nhận
Lượng thức ăn cho ăn (g) Ờ lượng thức ăn thừa (g) LTĂTN =
Số gà trong lô (con) - Hiệu quả sử dụng thức ăn
HQSDTĂ chắnh là tiêu tốn thức ăn cho một kg tăng khối lượng cơ thể. Hiệu quả sử dụng thức ăn tắnh theo công thức Lượng thức ăn thu nhận (kg) HQSDTĂ = Khối lượng gà tăng (kg) -Tốc ựộ tăng trọng Trọng lượng kỳ sau (g) Tốc ựộ tăng trọng (%) = Trọng lượng kỳ trước (g) X 100
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ40
3.4.8. Phương pháp xử lý số liệu nghiên cứu.
Số liệu ựược xử lý theo phương pháp thống kê sinh học, trên phần mềm Excel 2003
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ41 Tóm tắt sơựồ thắ nghiệm Kết quả theo dõi: Tăng trọng Khả năng phòng một số bệnh thông thường Các chỉ tiêu sinh lý máu
Hiệu quả sử dụng thức ăn Các chỉ tiêu mổ khảo sát