4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.2.1Sự phát triển của các nguồn nấm B.cinerea trên môi trường dinh
Nghiên cứu ảnh hưởng của các loại môi trường khác nhau đến sự phát triển của nấm B.cinerea thu thập từ các nguồn hoa hồng, cà chua, đào, dâu tây, lạc. Thí nghiệm được tiến hành tại phòng thí nghiệm Chẩn đoán bệnh cây – Bộ môn Chẩn đoán Giám định - Viện Bảo vệ thực vật
Môi trường PDA rất thích hợp cho nấm B.cinerea phát triển sau 4 ngày tản nấm của các nguồn nấm được phân lập từ các ký chủ khác nhau đã đạt kích thước từ 74,8 – 85,0 mm. Nguồn nấm phân lập từ hoa hồng và cà chua có kích thước tản nấm lớn nhất (85,0 mm), nguồn nấm phân lập từ dâu tây phát triển kém hơn sau 4 ngày nuôi cấy kích thước tản nấm đạt 74,8 ± 0,04 mm (bảng 4.3).
Môi trường PDA cũng rất thích hợp cho sự hình thành của bào tử nấm. Thời gian hình thành bào tử của các nguồn nấm dao động trong khoảng từ 3 đến 6 ngày. Trên môi trường PDA các nguồn nấm phân lập từ cà chua, dâu tây hình thành bào tử sau 3 ngày và nguồn nấm phân lập từ đào phải mất 6 ngày mới hình thành bào tử. Kích thước bào tử nấm đạt giá trị lớn nhất trên nguồn nấm phân lập từ hoa hồng (11,0 x 6,7µm), nguồn nấm phân lập từ dâu tây có kích thước bào tử nhỏ nhất (8,86 x 6,72µm). Sau 6 ngày nguồn nấm phân lập từ hoa hồng Đà Lạt bắt đầu hình thành hạch, nguồn nấm phân lập từ lạc và dâu tây hình thành hạch sau 9 ngày. Nguồn nấm phân lập từ cà chua không hình thành hạch trên môi trường PDA. Hạch của nguồn nấm phân lập từ hoa hồng đạt kích thước lớn nhất (5,3 mm) và nhỏ nhất là hạch của nguồn nấm phân lập từ dâu tây (2,3 mm) (Bảng 4.3).
Bảng 4.3. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau trên môi trường PDA (Viện BVTV 2010 )
Hình thành bào tử Hình thành hạch TT Ký chủ của nấm Kích thước tản nấm sau 4 ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm) 1 Hoa hồng 85,0 4 11,0 x 6,7 6 5,3 x 3,4 2 Đào 79,0 ± 0,20 6 9,2 x 7,0 8 2,7 x 1,9 3 Dâu tây 74,8 ± 0,04 3 8,9 x 6,7 9 2,3 x 1,7 4 Cà chua 85,0 3 9,9 x 6,2 7 - 5 Lạc 81,0 ± 0,08 5 9,1 x 6,8 9 2,6 x 2,0 50 60 70 80 90 m m
Hoa hồng Đào Dâu tây Cà chua Lạc
Ký chủ
Kích thước tản nấm
Hình 4.3: Sự phát triển của các nguồn nấm B.cinerea sau 4 ngày nuôi cấy trên môi trường PDA
Môi trường bột đậu cũng thích hợp để nuôi cấy nấm B.cinerea. So với môi trường PDA sự phát triển của tản nấm trên môi trường bột đậu có kém hơn. Sau 4 ngày nguồn nấm phân lập từ cà chua có kích thước tản nấm lớn nhất 79,2 mm và nhỏ nhất là tản nấm của nguồn nấm phân lập từ dâu tây 71,4 mm (bảng 4.4). Nguồn nấm phân lập từ dâu tây và cà chua có thời gian hình thành bào tử sau 3 ngày, thời gian hình thành bào tử của nguồn nấm phân lập từ đào và lạc chậm hơn so với thời gian hình thành bào tử của dâu tây và cà chua là 2 ngày và phải sau nuôi cấy 4 ngày nguồn nấm từ hoa hồng mới hình thành bào tử. Trên môi trường bột đậu nguồn nấm phân lập từ đào có kích thước bào tử lớn nhất (9,9 x 7,6 µm), nguồn nấm phân lập từ lạc có kích thước bào tử nhỏ nhất (8,4 x 6,1 µm). Nguồn nấm phân lập từ hoa hồng và đào không hình thành hạch trên môi trường bột đậu, nguồn nấm phân lập từ dâu tây, cà chua, lạc chỉ hình thành hạch nhỏ li ti màu đen nằm dưới đáy môi trường và mép đĩa Petri
Bảng 4.4. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau trên môi trường Bột đậu (Viện BVTV 2010)
Hình thành bào tử Hình thành hạch
TT Ký chủ
của nấm
Kích thước tản nấm sau
4 ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm)
1 Hoa hồng 77,0 ± 0,13 4 9,5 x 7,1 - - 2 Đào 73,0 ± 0,04 5 9,9 x 7,6 - - 3 Dâu tây 71,4 ± 0,13 3 8,6 x 6,3 4 Hạch nhỏ 4 Cà chua 79,2 ± 0.11 3 9,7 x 6,6 Hạch nhỏ 5 Lạc 76,0 ± 0,05 5 8,4 x 6,1 - Hạch nhỏ Ghi chú: Hạch nhỏ: kích thước ≤ 1 mm
Môi trường cà rốt không thích hợp cho sự phát triển tản nấm của các nguồn nấm phân lập từ hoa hồng, đào nhưng thích hợp cho các nguồn nấm phân lập từ dâu tây, cà chua và lạc. Kích thước tản nấm của hoa hồng và đào chỉ đạt tương ứng 66,0 và 51,0 mm trong khi đó kích thước tản nấm của các nguồn nấm phân lập từ dâu tây, cà chua và lạc đạt tương ứng 79,8; 83,4 và 84,6 mm (bảng 4.5). Nguồn nấm phân lập từ dâu tây không hình thành bào tử trên môi trường cà rốt, nguồn nấm phân lập từ hoa hồng và cà chua có thời gian hình thành bào tử sau 3 ngày, nguồn nấm từ lạc và đào có thời gian hình thành bào tử tương ứng 7 và 8 ngày. Nguồn nấm phân lập từ cà chua có kích thước bào tử lớn nhất 9,5 x 6,4µm.
Nguồn nấm phân lập từ đào không hình thành hạch, nguồn nấm phân lập từ cà chua và lạc chỉ hình thành hạch nhỏ. Nguồn nấm phân lập từ hoa hồng và dâu tây hình thành hạch lớn trên môi trường cà rốt với kích thước tương ứng 3,5 x 2,4 và 2,6 x 2,1 mm (bảng 4.5).
Bảng 4.5. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau trên môi trường Cà rốt (Viện BVTV 2010)
Hình thành bào tử Hình thành hạch
TT Ký chủ
của nấm
Kích thước tản nấm sau 4
ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm)
1 Hoa hồng 66,0 ± 0,04 3 9,0 x 6,7 7 3,5 x 2,4 2 Đào 51,0 ± 0,08 8 9,4 x 6,9 8 - 3 Dâu tây 79,8 ± 0,09 - - 9 2,6 x 2,1 4 Cà chua 83,4 ± 0.04 3 9,5 x 6,4 7 Hạch nhỏ 5 Lạc 84,6 ± 0.02 7 7,9 x 6,1 - Hạch nhỏ Ghi chú: Hạch nhỏ: kích thước ≤ 1 mm
Trên môi trường chzapeck sự phát triển của nguồn nấm phân lập từ đào kém nhất, sau 4 ngày nuôi cấy kích thước tản nấm chỉ đạt 47,0 mm, thời gian hình thành bào tử và thời gian hình thành hạch dài nhất lần lượt là 9 và 10 ngày, nhưng kích thước bào tử của nguồn nấm phân lập từ đào lại lớn nhất lớn nhất (9,7 x 7,1 µm) (bảng 4.6 và hình 4.4).
Thời gian hình thành bào tử của các nguồn nấm cũng kéo dài hơn các môi trường khác. Nguồn nấm phân lập từ dâu tây không hình thành bào tử trên môi trường chzapeck, nhưng có thời gian hình thành hạch sớm nhất (4 ngày). Nguồn nấm phân lập từ hoa hồng có kích thước hạch nấm lớn nhất (5,5 x 3,8 mm), nguồn nấm phân lập từ cà chua có kích thước nhỏ nhất là 2,3 x 1,7 mm
Bảng 4.6. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau trên môi trường Chzapeck (Viện BVTV 2010)
Hình thành bào tử Hình thành hạch TT Ký chủ
của nấm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Kích thước tản nấm sau 4
ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm)
1 Hoa hồng 73,0 ± 0,04 5 9,0 x 7,1 7 5,5 x 3,8 2 Đào 47,0 ± 0,03 9 9,7 x 7,2 10 3,0 x 2,2 3 Dâu tây 79,6 ± 0,05 - - 4 3,2 x 2,2 4 Cà chua 82,0 ± 0,11 5 9,4 x 7,1 6 2,3 x 1,7 5 Lạc 72,0 ± 0,11 5 8,9 x 6,9 6 4,0 x 3,4
30 40 50 60 70 80 90 m m Hoa hồng
Đào Dâu tây Cà chua Lạc
Ký chủ
Kích thước tản nấm
Hình 4.4. Sự phát triển của các nguồn nấm B.cinerea sau 4 ngày nuôi cấy trên môi trường Chzapeck
Nguồn nấm phân lập từ Dâu tây Nguồn nấm phân lập từ Đào
Hình 4.5. Sự phát triển của nấm B.cinerea trên các môi trường dinh dưỡng
Trong 4 môi trường nuôi cấy nấm, môi trường PDA phù hợp nhất cho nấm B.cinerea phát triển, thứ tự tiếp theo là môi trường cà rốt, môi trường bột đậu và cuối cùng là môi trường Chapeck. Kết quả nghiên cứu trên đã chỉ ra rằng
các nguồn nấm B.cinerea có xuất xứ nguồn gốc khác nhau thì sự phát triển của nấm trên các môi trường dinh dưỡng cũng khác nhau. Các nguồn nấm phân lập từ hoa hồng, cà chua, lạc, đào có thể hình thành bào tử trên tất cả 4 loại môi trường PDA, bột đậu, cà rốt và chapeck. Nguồn nấm phân lập từ dâu tây chỉ hình thành được bào tử trên các môi trường PDA, bột đậu mà không hình thành được bào tử trên môi trường Cà rốt và Chapeck. Các kết quả này cũng đồng thời chỉ ra rằng trên các môi trường dinh dưỡng khác nhau sự sinh trưởng và phát triển của nấm B.cinerea là khác nhau. Các kết quả nghiên cứu về ảnh hưởng của dinh dưỡng tới sự phát triển của nấm cũng tương tự với các kết quả nghiên cứu của Leach, 1962 [41]; Đặng Vũ thị Thanh, Vũ Duy Hiện, Mai Văn Quân, 2008 [7].
4.2.2 Ảnh hưởng của độ pH đến sự phát triển của nấm B.cinerea trên môi trường PDA
Các nguồn nấm B.cinerea phân lập được từ trên hoa hồng, đào, cà chua, lạc và môi trường PDA được sử dụng trong thí nghiệm.
Tất cả các nguồn nấm phân lập từ hoa hồng, đào, cà chua và lạc đều không phát triển trong môi trường PDA được điều chỉnh ở mức pH 4,0. Ở mức pH 4,5 chỉ có nguồn nấm phân lập từ đào có khả năng phát triển nhưng rất yếu. Sau 4 ngày nuôi cấy kích thước tản nấm chỉ đạt 46,0 mm, sau 11 ngày nấm mới hình thành bào tử. Ở mức pH 4,5 nấm không hình thành hạch
Ở mức pH 5,0 hầu hết các nguồn nấm thí nghiệm đều phát triển chậm, nguồn nấm phân lập từ đào phát triển tốt, sau 4 ngày nuôi cấy kích thước tản nấm là 72,0 mm, nguồn nấm phân lập từ cà chua phát triển chậm nhất kích thước của tản nấm sau 4 ngày chỉ đạt 32,4 mm (bảng 4.7). Sau 5 đến 8 ngày các nguồn nấm đều hình thành bào tử. Sau 10 ngày nguồn nấm phân lập từ đào hình thành hạch, kích thước hạch nấm là 2,8 x 2,0 mm, các nguồn nấm khác không hình thành hạch lớn mà chỉ hình thành hạch nhỏ kích thước khoảng 1 mm, màu đen (bảng 4.7).
Bảng 4.7. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau ở mức pH 5,0 (Viện BVTV 2010) Hình thành bào tử Hình thành hạch TT Ký chủ của nấm Kích thước tản nấm sau 4 ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm) 1 Hoa hồng 35,0 ± 0,09 6 8,9 x 6,7 - Hạch nhỏ 2 Đào 72,0 ± 0,05 8 9,1 x 6,7 10 2,8 x 2,0 3 Cà chua 32,4 ± 0,17 5 9,2 x 7,2 - Hạch nhỏ 4 Lạc 46,4 ± 0,17 5 8,6 x 6,5 - Hạch nhỏ Ghi chú: Hạch nhỏ: kích thước ≤ 1 mm 10 20 30 40 50 60 70 80 m m
Hoa hồng Đào Cà chua Lạc
Ký chủ
Kích thước tản nấm
Hình 4.6. Sự phát triển của các nguồn nấm B.cinerea sau 4 ngày nuôi cấy ở pH 5,0
Mức pH 5,5 thích hợp cho sự phát triển của nấm. Sau 4 ngày tản nấm đã phủ gần kín đĩa Petri, đường kính tản nấm đạt từ 83 – 85 mm. Sự phát triển của các nguồn nấm khá đồng đều về kích thước tản nấm, kích thước bào tử. Nguồn
nấm phân lập từ cà chua phát triển thích hợp trong mức pH 5,5 sau 4 ngày nuôi cấy kích thước tản nấm đạt 85,0 mm, thời gian hình thành bào tử chỉ có 3 ngày và kích thước bào tử cũng đạt lớn nhất 9,2 x 7,0 µm. Sau 7 ngày các nguồn nấm bắt đầu hình thành hạch, kích thước hạch đạt lớn nhất là của nguồn nấm phân lập từ hoa hồng (bảng 4.8)
Bảng 4.8. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau ở mức pH 5,5 (Viện BVTV 2010) Hình thành bào tử Hình thành hạch TT Ký chủ của nấm Kích thước tản nấm sau 4
ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm)
1 Hoa hồng 83,0 ± 0,02 5 9,0 x 6,9 8 4,3 x 3,3 2 Đào 83,0 ± 0,09 6 9,0 x 6,8 8 2,5 x 2,0 3 Cà chua 85,0 3 9,2 x 7,0 9 2,4 x 1,8 4 Lạc 83,0 ± 0,02 5 8,6 x 6,8 7 2,2 x 1,8 Cũng tương tự như mức pH 5,5, mức pH 6,0 cũng rất thích hợp cho nấm
B.cinerea phát triển. Sau 4 ngày nuôi cấy nấm đã phát triển phủ gần kín bề mặt đĩa Petrri đường kính tản nấm đạt từ 79,0 – 85,0 mm. Nguồn nấm phân lập từ đào phát triển chậm hơn so với các nguồn nấm phân lập từ hoa hồng, lạc, cà chua, kích thước tản nấm nhỏ nhất 79,0 mm, thời gian hình thành bào tử dài nhất 6 ngày. Ở mức pH 6,0 các nguồn nấm hình thành hạch sau 5 đến 8 ngày. Nguồn nấm phân lập từ lạc có thời gian hình thành hạch sau 5 ngày nuôi cấy và có kích thước hạch lớn nhất là 3,2 x 2,2 mm (bảng 4.9).
Bảng 4.9. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau ở mức pH 6,0 (Viện BVTV 2010) Hình thành bào tử Hình thành hạch TT Ký chủ của nấm Kích thước tản nấm sau 4
ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm)
1 Hoa hồng 85,0 3 9,4 x 7,1 8 3,1 x 2,4 2 Đào 79,0 ± 0,09 6 9,2 x 6,8 8 3,0 x 2,1 3 Cà chua 85,0 3 9,4 x 7,2 5 2,7 x 0,17 4 Lạc 85,0 5 9,0 x 6,7 5 3,2 x 2,2 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ở mức pH 6,5 các nguồn nấm phân lập từ hoa hồng, cà chua, lạc phát triển rất tốt trên môi trường. Sau 4 ngày đường kính của tản nấm đã đạt 85,0 mm. Nguồn nấm phân lập từ cà chua có thời gian hình thành bào tử sớm nhất là 3 ngày, đồng thời có kích thước bào tử lớn nhất (9,8 x 7,1 µm) (bảng 4.10).
Bảng 4.10. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau ở mức pH 6,5 (Viện BVTV 2010) Hình thành bào tử Hình thành hạch TT Ký chủ của nấm Kích thước tản nấm sau 4
ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm)
1 Hoa hồng 85,0 5 9,5 x 7,3 7 3,4 x 2,5 2 Đào 72,0 ± 0,07 6 9,0 x 6,8 8 2,7 x 2,3 3 Cà chua 85,0 3 9,8 x 7,1 6 0,26 x 1,6 4 Lạc 85,0 4 9,1 x 7,0 6 2,4 x 1,9
Nguồn nấm phân lập từ đào phát triển chậm hơn, sau 4 ngày nuôi cấy kích thước tản nấm chỉ đạt 72,0 mm. Thời gian hình thành bào tử và hình thành hạch của nguồn nấm phân lập từ đào cũng dài nhất 6 và 8 ngày. Các nguồn nấm đều hình thành hạch ở mức pH 6,5 nguồn nấm phân lập từ cà chua có kích thước hạch nhỏ nhất là 0,26 x 1,6 mm.
Sự phát triển của các nguồn nấm ở mức pH 7,0 được trình bày tại bảng 4.11. Kết quả cho thấy 3 nguồn nấm phân lập từ hoa hồng, cà chua, lạc sau 4 ngày nuôi cấy đều có kích thước tản nấm khá đồng đều, đường kính tản nấm đạt từ 82,8 – 84,2 mm. Nguồn nấm phân lập từ đào không thích hợp ở mức pH 7,0 nấm phát triển chậm, sau 4 ngày kích thước tản nấm chỉ đạt 49,0 mm. Thời gian hình thành bào tử của nguồn nấm phân lập từ cà chua là ngắn nhất (4 ngày). Nguồn nấm phân lập từ cà chua không hình thành hạch lớn mà hình thành hạch nhỏ li ti ở pH 7,0. Các nguồn nấm phân lập từ hoa hồng và lạc có thời gian hình thành hạch sớm nhất là 7 ngày, nguồn nấm phân lập từ đào sau 10 ngày mới hình thành hạch (bảng 4.11)
Bảng 4.11. Sự phát triển của nấm B.cinerea phân lập từ các ký chủ khác nhau ở mức pH 7,0 (Viện BVTV 2010) Hình thành bào tử Hình thành hạch TT Ký chủ của nấm Kích thước tản nấm sau
4 ngày (mm) Ngày Kích thước TB (µµµµm) Ngày Kích thước (mm)
1 Hoa hồng 84,2 ± 0,04 6 10,1 x 7,2 7 3,4 x 2,0 2 Đào 49,0 ± 0,07 5 9,3 x 7,0 10 3,0 x 1,8 3 Cà chua 82,8 ± 0,05 4 9,8 x 7,5 - Hạch nhỏ 4 Lạc 83,8 ± 0,07 6 9,0 x 7,1 7 2,8 x 1,6
30 45 60 75 90 m m
Hoa hồng Đào Cà chua Lạc
Ký chủ
Kích thước khuẩn lạc
Hình 4.7. Sự phát triển của các nguồn nấm B.cinerea sau 4 ngày nuôi cấy ở pH 7,0
Trong môi trường a xít mạnh pH 4,5 nấm B.cinerea không phát triển hay phát triển rất yếu. Khoảng pH thích hợp cho các nguồn nấm B.cinerea phân lập