a/ Phương pháp ñếm hồng cầu: Dựa trên phương pháp của Bauer (1974) (trích dẫn bởi Đỗ Thị Thanh Hương, 1998).
Dùng pipet hút 5µl máu cho vào eppendoff chứa 995 µl dung dịch Natt & Herick (pha loãng 200 lần), lắc ñều và ñể trong 3 phút.
Dùng pipét hút mẫu máu ñã ñược pha loãng cho lên buồng ñếm Neubauer và
ñếm trên kính hiển vi ở vật kính E40 ở 5 ô trên buồng ñếm. Mật ñộ hồng cầu ñược tính theo công thức:
H = C * 10 * 5 * D
Trong ñó: H là tổng số hồng cầu (tế bào/mm3).
C là tổng số hồng cầu ñếm ñược trên 5 vùng ñếm. D là số lần pha loãng.
Hình 3.2: Vị trí các ô ñếm hồng cầu trên buồng ñếm Neubauer Ruling Nguồn: http://www.lo-laboroptik.de/englisch/info/neubauer.gif
b/ Phương pháp ñếm bạch cầu: Cho một giọt máu lên góc lam và dùng lamen dàn ñều mẫu máu về phía trước. Nhanh chóng làm khô sau ñó cố ñịnh bằng methanol 1-2 phút. Đợi khi mẫu khô (khoảng 15 phút) sau ñó tiến hành nhuộm mẫu.
Mẫu nhuộm tiêu bản (Humason, 1979) (trích dẫn Lương Thị Diễm Trang, 2009) với các bước sau:
1. Nhuộm với dung dịch Wright trong 5 phút. 2. Ngâm trong dung dịch pH 6,2-6,8 trong 5 phút. 3. Nhuộm trong Giemasa trong 30 phút.
4. Rửa bằng nước cất cho sạch thuốc nhuộm trên lam. 5. Ngâm trong dung dịch pH 6,2 trong 15 phút.
6. Rửa sạch bằng nước cất và ñể khô tự nhiên.
Lam ñược quan sát trên kính hiển vi ở vật kính 100X. Các tế bào bạch cầu
ñược xác ñịnh theo phương pháp của Supranee (1991) (trích dẫn Lương Thị
Diễm Trang, 2009). Công thức tính bạch cầu :
Tổng số bạch cầu: W = (h * H)/ (1500 – h) Trong ñó:
H: Số bạch cầu ñếm ñược trong tổng số 1500 tế bào H: Mật ñộ hồng cầu trong mẫu máu.
c/ Phương pháp ño hematocrit (tỉ lệ huyết sắc tố %): Dựa trên phương pháp của Larsen và Snieszko (1961) (trích dẫn bởi Đỗ Thị Thanh Hương, 1998). Máu thu ñược cho vào ống thủy tinh (hematocrit tube) ñểño tỷ lệ huyết sắc tố. Ly tâm hematocrit tube bằng máy ly tâm chuyên biệt trong 6 phút với tốc ñộ là 12.000 vòng/phút. Dùng vòng ño chiều dài có vạch từ 0-100% ñể xác ñịnh tỷ
lệ huyết sắc tố.
Các chỉ số liên quan ñến hồng cầu ñược tính dựa theo phương pháp của
Weiberg et al., (1972) trích dẫn Lương Thị Diễm Trang (2009). Thể tích hồng cầu
MCV (µ3) = 10 * [tỷ lệ huyết cầu (%) / số lượng hồng cầu (106/mm3)] Khối lượng trung bình của huyết sắc tố trong hồng cầu (MCH)
MCH (pg) = 10 * [huyết sắc tố (g/100ml)/ số lượng hồng cầu (106/mm3)] Nồng ñộ của huyết sắc tố trong hồng cầu (MCHC)