4.1. Kết quả nghiên cứu khử trùng vật liệu khởi đầu ( thí nghiệm 1):
Một trong những yếu tố quan trọng nhất trong nuôi cấy mô - tế bào là tạo nguồn vật liệu khởi đầu hoàn toàn sạch nấm khuẩn, có khả năng sinh trưởng tốt. Đây là bước quyết định sự thành bại đầu tiên của quá trình nghiên cứu, cần phải lựa chọn loại hoá
chất, nồng độ, thời gian khử trùng thích hợp để đảm bảo tỷ lệ mẫu sống vơ trùng cao nhất và có khả năng tái sinh cao. Vì vậy, chúng tơi đã tiến hành thí nghiệm nghiên cứu phương pháp khử trùng cho chồi bên hoa lily bằng NaOCl trong các khoảng thời gian 8 phút, 10 phút, 12 phút, 14 phút, 16 phút để lựa chọn ra thời gian khử trùng tối ưu nhất.
Bảng 4.1. Ảnh hưởng của NaOCl đến hiệu quả khử trùng chồi bên lily (sau 15 ngày nuôi cấy):
Tỉ lệ %
Thời gian lắc (phút)
Mẫu chết Mẫu nhiễm Mẫu sống vô trùng 8 8,3 53,6 38,1 10 15,7 26,2 58,1 12 5,2 11,4 83,4 14 21,5 7,4 71,1 16 44,1 1,6 54,3
Nhìn vào bảng 4.1 và đồ thị 4.1 trên, chúng ta thấy rằng với thời gian khử trùng khác nhau thì hiệu quả khử trùng cũng khác nhau. Tỷ lệ mẫu sống vô trùng cao nhất là ở thời gian khử trùng 12 phút (83,4%), tiếp đến là 14 phút (71,1%) và 10 phút (58,4%).
Với thời gian khử trùng là 8 phút thì ta thấy rằng tỷ lệ mẫu nhiễm là rất cao (53,6%) do thời gian khử trùng ngắn mặc dù mẫu không bị chết nhưng chất khử trùng không đủ hiệu lực để diệt nấm và vi khuẩn của mẫu nên tỷ lệ mẫu nhiễm cao.
Với thời gian khử trùng là 14 và 16 phút thì tỷ lệ mẫu nhiễm giảm (7,4% và 1,6%) nhưng tỷ lệ mẫu chết lại khá cao (21,5% và 44,1%) do thời gian khử trùng quá dài làm cho hoá chất khử trùng thấm sâu vào mẫu gây chết mẫu.
Như vậy, có thể thấy rằng thời gian khử trùng 12 phút,lắc với 150 vòng/phút là cho kết quả tối ưu, với tỷ lệ mẫu sống đạt 83,4%.
4.2. Kết quả thí nghiệm 2: Ảnh hưởng phytohoocmone lên sự phát sinh hình thái trong ni cấy lát mỏng chồi bên hoa lily trong nuôi cấy lát mỏng chồi bên hoa lily
Chúng tôi tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của BA đến khả năng nhân nhanh chồi của lily. Trong thí nghiệm chúng tơi đã sử dụng mơi trường MS có bổ sung BA với nồng độ BA: 0,1 mg/l; 0,3mg/l; 0,5mg/l; 0,7mg/l; 0,9mg/l.
Kết quả được đánh giá sau 4-5 tuần theo giỏi.
Bảng 4.2. Ảnh hưởng của BA đến khả năng nhân nhanh chồi bên hoa Lily Chỉ tiêu Công thức Hệ số nhân chồi (lần) Chiều dài (cm) Số lá/ chồi (lá) 0,1 mg/l BA 1,15 2,18 3,56 0,3mg/l BA 1,58 3,02 3,68 0,5mg/l BA 3,15 5,14 6,58 0,7mg/l BA 2,25 3,58 4,52 0,9mg/l BA 1,86 2,89 3,25
Biểu đồ 4.2. Ảnh hưởng của BA đến khả năng nhân nhanh chồi bên hoa lily (sau 4-5 tuần nuôi cấy).
Kết quả ở bảng 4.2 và biểu đồ 4.2 kết hợp với q trình quan sát thí nghiệm cho thấy rằng:
Trong q trình quan sát thí nghiệm thấy rằng, mơi trường có bổ sung 0,5mg/l BA làm tằng số chồi cao nhất (3,15 lần), chất lượng chồi tốt nhất, đồng đều, to khoẻ (6,85 lá/chồi, chiều dài chồi lá 5,14cm), khơng có sự hình thành rễ nhưng rễ. Cịn với 0,1mg/l BA thì hệ số nhân chồi thấp nhất (1,15 lần) và có một số chồi lá phát triển kém, khơng tốt bằng mơi trường có bổ sung 0,5mg/l BA nhưng mẫu cũng có khả năng sử dụng để tạo cây hồn chỉnh. Trong mơi trường có bổ sung 0,7mg/l BA làm tăng chồi khá tốt (2,25 lần), với chiều dài (3,58 cm) và soa lá (4,52 lá/chồi) và khơng có sự hình thành rễ nhưng khả năng tạo cây hồn chỉnh là khá tốt. Với mơi trường có bổ sung 0,3mg/l BA và 0,9mg/l BA làm tăng số chồi là tương đối (1,58 và 1,86 lần), chồi lá phát triển tốt và khá đồng đều.
Theo Bhojwani (1980), ở một số lồi, mơi trường ni cấy chỉ có một loạicytokinin cũng cho hệ số tạo chồi cực đại. Với cây ngũ cốc sự phối hợp của hai hay nhiều loại cytokinin cho kết quả tốt hơn khi sử dụng một cytokinin riêng rẽ. Tuy nhiên muốn có tương quan sinh trưởng tối ưu thì phải cần bằng hoocmon thích hợp. Nhiều tác giả đã tổng kết rằng sự biệt hoá cơ quan thực vật in vitro là kết quả tác động qua lại giữa hai nhóm auxin và cytokinin. Tỷ lệ auxin/cytokinin cao kích thích sự tạo
rễ, trái lại sẽ đẩy mạnh biệt hố chồi, cịn tỷ lệ trung gian mơ sẹo được hình thành. Đó là ngun tắc chung, cịn phản ứng của các loại mơ là khơng giống nhau. Vì thế mỗi loại mô, ở từng giai đoạn sinh trưởng khác nhau thì tổ hợp nồng độ auxin/cytokinin là rất quan trọng.
Trong thí nghiệm này mơi trường có bổ sung 0,5mg/l BA mang lại hiệu quả cao nhất, tuy nhiên vẫn chưa thể khẳng định đây là mơi trường tối ưu nhất vì chưa có sự giảm dần về hệ số nhân chồi.
Chương V