Đoạn DNA cần được giải trình tự được sử dụng như trình tự mẫu cho phản ứng khuếch đại gen (PCR) bắt đầu từ vị trí gắn mồi. Hỗn hợp của deoxy- và dideoxynucleotid được sử dụng trong phản ứng với nồng độ sao cho các dideoxynucleotid sẽ gắn vào mỗi vị trí mà các deoxynucleotid thường gắn trên đoạn DNA đang được tổng hợp. Sự gắn của các dideoxynucleotidsẽ
làm gián đoạn quá trình kéo dài các đoạn DNA được tổng hợp, kết quả sẽ tạo ra hỗn hợp các sợi DNA có kích thước khác nhau. Nucleotid tận cùng trên mỗi sợi DNA có thể được xác định bằng cách chạy đồng thời bốn phản ứng riêng biệt trong đó mỗi phản ứng chứa một loại dideoxynucleotid(ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP) hoặc bởi một phản ứng hỗn hợp nhưng từng loại dideoxynucleotid được đánh dấu bằng các chất phát huỳnh quang đặc hiệu khác nhau. Kết quả là hỗn hợp các sợi DNA tổng hợp từ sợi khuôn được phân tách bằng điện di trên gel acrylamid có độ phân giải cao, cho phép phân biệt được các sợi đơn DNA hơn kém nhau một nucleotid. Trình tự các nucleotide được xác định tương ứng với trình tự của các vạch trên gel ứng với mỗi loại dideoxynucleotid. Sau đó, trình tự gen của mẫu nghiên cứu sẽ được đối chiếu với trình tự gen trên ngân hàng gen thế giới (GenBank) và được phân tích để xác định vùng hoặc điểm đột biến.
1.5. Các nghiên cứu về đáp ứng điều trị viêm gan C gần đây:
1.5.1. Trong nước
Theo Võ Ngọc Quốc Minh khi kết hợp Interferon với Ribavirin trong điều trị viêm gan C mạn tính cho đáp ứng lâu dài 58,7%, theo Đinh Dạ Lý Hương là 72%, theo Phạm Thị Thu Thủy 58,1% . Trong phác đồ sử dụng Peginterferon alfa kết hợp Ribavirin để điều trị viêm gan C mạn tính, theo tác giả Đinh Dạ Lý Hương tỷ lệ đạt được SVR 84,7%.
Peginterferon alfa 2b tỏ ra hiệu quả hơn Peginterferon alfa 2a đối với bệnh nhân cân nặng cao (61,9% và 28,57%) theo công trình tác giả Phạm Thị Thu Thủy.
1.5.2. Ngoài nước
Các công trình so sánh 2 loại Peginterferon alfa trong điều trị viêm gan C mạn tính, kết quả tùy tác giả, có tác giả cho rằng có khác nhau, có tác giả cho rằng giống nhau. Có tác giả cho rằng khác nhau tùy yếu tố bệnh nhân:
béo phì, lớn tuổi, genotype virus, lượng virus…. . Theo tác giả S. Mauss đáp ứng của hai loại Peginterferon gần như tương đương nhau (51%, 45%) theo tác giả R. Cozzolongo cũng như vậy (33%, 33%). Theo tác giả Almasio, Peginterferon alfa - 2b tỏ ra hiệu quả hơn Peginterferon alfa - 2a đối với genotype 1 (49% và 36%). Theo tác giả Cesario. K đối với bệnh nhân cân nặng cao (>75kg) Peginterferon alfa - 2b tỏ ra hiệu quả hơn Peginterferon alfa 2a (52% và 18%). Ngược lại một số tác giả cho rằng Peginterferon alfa-2a kết hợp Ribavirin cho SVR cao hơn Peginterferon alfa-2b kết hợp Ribavirin, tác giả Antonio và cộng sự cho thấy rằng SVR nhóm 2a là 68,8% và nhóm 2b là 54,4%.
Một nghiên cứu báo cáo về vai trò và mức độ liên quan của đa hình di truyền IL-28B được mô tả gần đây đối với kết quả điều trị PegIFN và RBV đối với bệnh nhân nhiễm mạn tính với genotype 2 hoặc 3 HCV. Nhóm nghiên cứu này đã đánh giá sự tương tác giữa yếu tố quyết định di truyền và đáp ứng điều trị ở những bệnh nhân được xem xét thay đổi thời gian điều trị dựa trên đáp ứng virus 4 tuần điều trị.
Dữ liệu chỉ ra rằng đa hình IL-28B có liên quan đến kết quả điều trị, mặc dù mức độ yếu hơn ở những bệnh nhân châu Âu nhiễm genotype 2/3, so với quan sát ban đầu ở bệnh nhân Bắc Mỹ bị nhiễm HCV genotype 1 (kiểu gen 2 / 3: OR, 1,76; KTC 95%, 1,16–2,66; so với kiểu gen 1: OR, 5,2; KTC 95%, 4,1–6,714). Sự suy giảm mức độ đáp ứng chung phần lớn là do tỷ lệ RVR cao hơn nhiều xảy ra ở bệnh nhân kiểu gen 2/3; Loại IL-28B không ảnh hưởng đến kết quả đạt được đáp ứng virus nhanh. Tác động chính của biến thể di truyền này là ở những bệnh nhân không đạt được đáp ứng nhanh vào tuần thứ 4, lúc đó loại IL-28B có ảnh hưởng mạnh đến tỷ lệ đạt được SVR. Một điểm tương phản thứ hai giữa nhóm này và kiểu gen 1 Bắc Mỹ trước đây được báo cáo là sự hiện diện của một alen đơn C đã được ghi nhận để mang lại lợi ích
lâm sàng đáng kể. Ngược lại, trong nhiễm HCV genotype 1, lợi ích lâm sàng bị hạn chế hơn đối với đồng hợp tử IL-28B CC.
Mặc dù mối liên hệ giữa loại IL-28B và tỷ lệ đạt được SVR chung, không có mối liên quan đáng kể giữa đa hình IL-28B và tỷ lệ sạch virus sau 4 tuần, mặc dù RVR cao hơn ở bệnh nhân CC và CT so với bệnh nhân TT. Tuy nhiên, vào tuần thứ 8, tỷ lệ làm sạch virus gặp cao hơn ở bệnh nhân CC và CT. Điều này được giải thích là đa hình IL-28B có liên quan đến động học virus ở các mức độ khác nhau, tương tự như quan sát ở kiểu gen 1, nhưng tỷ lệ này ở tuần thứ 4 không có sự khác biệt, nhưng có sự khác biệt đáng kể ở tuần 8.
Nghiên cứu không được hỗ trợ để đánh giá chính thức vai trò của loại IL-28B để đưa ra quyết định về việc lựa chọn bệnh nhân RVR trong 12 tuần điều trị. Hướng dẫn hiện tại áp dụng phương pháp này cho bệnh nhân nhiễm HCV kiểu gen 2/3, đạt được RVR và tải lượng virus thấp. Có thể giả định rằng việc điều trị như vậy sẽ phù hợp nhất cho bệnh nhân CC. Mặc dù dữ liệu thu được phù hợp với nhóm bệnh nhân RVR có khả năng đạt được tỷ lệ đáp ứng tương đương, không có sự khác biệt đáng kể trong nhóm điều trị 12 và 24 tuần và không thể đưa ra kết luận chắc chắn. Vai trò tiềm năng cho kiểu gen IL-28B trong việc lựa chọn bệnh nhân không dùng RVR để điều trị 24 tuần tiêu chuẩn hoặc điều trị kéo dài hơn cần được nghiên cứu sâu hơn để giải quyết các vấn đề này.
Tóm lại, những phát hiện này nhấn mạnh tầm quan trọng của sự tương tác giữa kiểu gen HCV và các yếu tố quyết định di truyền trong việc tác động đến đáp ứng điều trị. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng sự biến đổi di truyền trong IL-28B có liên quan đến đáp ứng điều trị ở những bệnh nhân bị nhiễm HCV kiểu gen 2/3. Hiệu ứng này bị suy giảm so với các báo cáo trước đây trong HCV kiểu gen 1, phù hợp với độ nhạy IFN được công nhận của các kiểu gen này, và cũng cho thấy rằng sự khác biệt chính về khả năng tránh được các
đáp ứng miễn dịch kháng virus bẩm sinh có khả năng tồn tại giữa kiểu gen 1 và kiểu gen 2/3 HCV. Loại IL-28B đặc biệt quan trọng ở những bệnh nhân không đạt được RVR. Vì vậy cần nghiên cứu thêm các nghiên cứu ngẫu nhiên tiềm năng để điều tra xem bệnh nhân không có RVR mang lại lợi ích kiểu gen không thuộc CC-ILB 28 từ thời gian điều trị kéo dài.
KẾT LUẬN
Bệnh nhân nhiễm HCV mang kiểu gen CC đồng hợp tử có khả năng đạt được SVR cao hơn. Ngoài ra, bệnh nhân mang T / T (rs8099917) có cơ hội cao hơn của RVR.