Nguyín tắc: Urease lă enzyme có thể thủy giải urease theo phản ứng sau: (NH2)2CO + H2O → (NH4)2CO3
Nếu thím formol văo môi trường, sẽ có phản ứng tạo thănh hexamethylene tetramine vă acid carbonic theo phản ứng sau:
2 (NH4)2CO3 + 6 HCHO → (CH2)6N4 + 6 H2O + H2CO3
Acid tạo thănh có thể được định phđn bằng kiềm vă xâc định lượng urea bị thủy giải, từ đó suy ra hoạt tính của enzyme urease.
Hóa chất
- Dung dịch N/20.
- Dung dịch urea 2% (w/v). - Formol trung hòa.
- Dung dịch urease: Khuấy 3 gam bột đậu nănh trong 100 mL nước cất. Để yín trong 15 phút. Nước ở trín chứa nhiều urease. Đem lọc thu lấy dịch lọc.
- Dung dịch phenolphtalein 1% trong alcol.
Tiến hănh
Chuẩn bị câc ống nghiệm theo bảng sau:
Ống nghiệm 1 2
Thể tích dung dịch urea 2% (mL) 5 5 Thể tích dung dịch enzyme urease (mL) 5 0 Thể tích dd enzyme urease đê đun sôi (mL) 0 5
Ủ câc ống nghiệm trín trong nước ấm ở 40oC trong 20 phút. Cho văo mỗi ống 5 mL formol đê được trung hòa, lắc đều trong văi phút. Lần lượt cho câc dung dịch trong ống ra bình tam giâc 100 mL, trâng ống với một ít nước cất. Định phđn H2CO3 được giải phóng ra bằng dung dịch NaOH N/20 với phenolphtalein lăm chỉ thị mău.
Kết quả
Hoạt tính enzyme urease được biểu thị bằng số mol urea bị thủy giải bởi lượng enzyme có trong 1 gam bột đậu nănh trong thời gian 1 phút ở 40oC, hoạt tính được tính theo công thức sau:
20 x 103 x 2 x t x a x m (V1 - V2) x A mol/ g/ phút Trong đó: - V1: Số mL NaOH N/20 dùng định phđn ống 1 - V2: Số mL NaOH N/20 dùng định phđn ống 2 - a: Thể tích enzyme cho văo mỗi ống (mL)
- A: Tổng thể tích enzyme thu được từ m gam bột đậu nănh (mL) - t: Thời gian thủy phđn (phút)