2. Chẩn đoán phân tử 1 PCR
2.3. Phương pháp ELISA
Dựa trên kết hợp đặc hiệu của kháng nguyên và kháng thể , người ta sử dụng kháng nguyên của vi khuẩn lao (MTP64) nhằm phát hiện kháng thể lao có trong huyết thanh hoặc dịch não tủy của bệnh nhân.
Phương pháp này có độ hạy và độ đặc hiệu tương đối cao nhưng có khả năng xảy ra phản ứng chéo với Mycobacteria không điển hình.
Gồm 3 phương pháp chính :
ELISA gián tiếp
Sandwich ELISA
ELISA cạnh tranh
Trong các phương pháp trên, phương pháp sandwich ELISA hay được sử dụng trong chẩn đoán bệnh lao.
- Phương pháp: Người ta có được kháng thể với MPT64 bằng sự kết hợp của công nghệ di truyền và gây miễn dịch bằng hệ thống tiến hóa của các
dấu nối kết (ligands) bằng cách làm giàu bằng số mũ. Một aptamer của kháng thể ái lực cao với MPT64 được chọn lựa từ một thư viện DNA xoắn đơn ngẫu nhiên, và một phương pháp ELISA bánh kẹp dựa lên aptamer này được phát triển. Phương pháp ELISA này được dùng để phát hiện lao trong 328 mẫu huyết thanh, 160 mẫu từ các bệnh nhân lao phổi (PTB) và 168 là mẫu kiểm soát không mắc lao.
- Kết quả: Giới hạn tối thiểu của sự phát hiện của phương pháp ELISA là 2,5 mg/L, và phạm vi tuyến tính của nó thay đổi từ 10 mg/L đến 800 mg/L. Độ nhạy, độ đặc hiệu, tỷ suất xác xuất (+), tỷ suất xác xuất âm tính và khu vực dưới đường biểu diễn, với 95% CI tương ứng là 64,4 % (56,7 % – 71,4 %); 99,4 % (96,7 % – 99,9 %); 108,2 (15,3 – 765,9); 0,350 (0,291 – 0,442) và 0,819 (0,770 – 0,868). Không có sự khác biệt ý nghĩa về độ nhạy được quan sát giữa mẫu đờm của những cá nhân dương tính (73/112, 65,2 %) và âm tính (30/48, 62,5%).