23,274, K== Ồ: : 71Ồ TỒ
2.3.2. Xác đỉnh tắnh chọn ỉoc cua đung mội chiết
- Tắnh chọn lọo của một dung ĨĨ1Ô1 chỉễt lằ tỷ lệ khối lượng hoạt đìầì ehìềt;
23,287, được trẽn tổng khốỉ lượng chẫt tan. Tỷ lệ nàỵ cảng cao chứng tỏ dung môắ có khả năng chiểt được nhỉềư hoạt chất và ắt tạp chất.
- Phương pháp xác đỉnh: Cân chắnh xác rttôt: lượng bột nghệ vào bỉnh nỏn? thêm dung môi phù họp, Khuấy trên mầy khuấy từ ồ nhỉê-t đô phồng, tốc độ khuấy khoẳtỊg 50 vòng/phút, và thời gian cMêt; thắch hợp YỚỉ mSĩ toại đung mộỉ. Rủi địch dhĩết vả ỉọc dược V ml dịch chỉểt. xác đỉnh nồng độ
23,288, n^cur *C’cur X ^
23,289, Phần dịch lọc đem cô ẳp suất: giảm à 60a 6 đẹn thề cạo đặc, Làm khô cạo trong; bình hủt ẩm trọng 2 ngàỵ đựơc kjiố| Lựơng cao đặe, rtìeao (ờớ)■- Hệ sổ chọn Loe A được tắnh:
23,290, A= HVcur / ỉttcaò
23,291, 2.3,5ữ Phựợng phâp chiết vạ tinh chế cụrcụiắiắnọitỊ
- Phượng pháp chiết; chiết eurcuminoid từ bôt nghệ đặ' đưoắẹ *ử; lỵ từ thận ắẫ cây nghệ vàng bằĩìg phưỡng phấp ngâm. ắạnhi với dung; mồi thắch hợp,
- Phương pháp tĩnh chể: sau khi thu được dịch chiết* tiến, hành Loại tạp chất (hỗn hợp nhựa, dầu bểo ỵà tinh dầu) thu sẳaphầm ẹurcưminọĩd thô* Kết tinh sân phẳm thọ bằng các đựng mô ỉ thắ ch hợp đậ thụ đựợc; sần phầm curẹụminọid tỉnh khiết đạt: hàm iựợng trện 95%,
23,292, Phựọtig pháp định lựựng curcumỉnoỉd
23,293, Đắnh lượng curcumĩnoĩd trong dược liệu, dỉeh chĩết, cắn chĩét, sèni phầm thô, sản phim tinh khiết bầng sac ký lỏng thẹo Dược đila My ƯSP 32, [ J_5_]\
23,296, Cận chắnh xác khoảng 20 mg c.ụrcụmĩnọĩd chụận vạọ bình định mức 50ml? them khoảng 30ml phạ động, ặịêụ. ậm vậ hoạ tan hoàn toàn, pha lbãng bằng pha động cho tớĩ vạch, Hủtchmhi xác 5 ml dung dịch, vào bình đinhmức 50' ral, thêm phai động đến vạch, Lọc qua) mằng 0,45|lm*
23,297, Mẩu thử;
- IVĩẫu thử là chế phẩm (được liệu,, cẳn chiết, cụreumỉnoid thô, curciimỉnoỉd tĩnh khìểt): cân một ỉương; chế phẩm tượng đương với 20 mg
23,298, €ur€umĩnoỉd Gho vào bình đỉnh mửe 50ml: Thêm 30 ml aGêton* đậy kắn* sỉêu âm
23,299, 30 phút, Pha loẩng với aceton cho tớĩ vạch. Ly tâm, lọc lẩy di ch. Lấy 3ml địch lọc cho vào brnh định mức 50ml, pha loãng vơi pha động tớĩ vạch để thu được đung địch Cố nồng độ tượng đượng nồng đô mẫu ctauần.. Lọc qua màng 0,45 pn- " Mau thử Là dịch chiết: hút chinh xác 11 ml dịch chiết, phạ loângbằng pha động với tỷ lệ thắch hơp để thu đươc dung đich cọ nồng đô ẹurcựminoid tượng đương nồng độ Gurcurninoid ỉrong mlu chuần (khoảng Q‘,,04 mg/ml). Lọc qua màng 0,45Jim.
Ễ Điều kiên sẳe. kỷ;
- Côt phẹ-nọmẹ-nẹx Ol g (4,6 mm, 25. cm),
- Phâ âồngi hẫfắ họp dung dĩêhi âeid eiắrỉe ttoag TOỚe (flg iFOĐg 1000 mỉ)
- tetfahydroĐiran (6 4). Too độ dổng II ml/phút
Ễ Định lượng; mẫu ẹhụẩn và. mẫu thử đệ-ụ đựợẹ tỉến hành sẳC: ký trọng cúttg điêu kiện. Số' sánh tổng đĩệtt tắch 3 pắc curcumắn, đesmethoxycurcumĩn5 bắ sdẽsmethô xỵc urcum i Ỉ1 của tnlu thử với diện tắch cảc pic mẫu chuẩn đề tắnh nồng độ cureummoLct trong mẫu thử Là dich chiết và hàm tượng Gurçuminoid trọng mẫu thử là ẹhệ phẩm.
23,300, Tịnh nọrig độ curcumứỊOễd Ịrọng ựiẵu thừỉà đich chiết:
23,301, Ca X Áị X f 23,302,_______________________& = ■ Ồ
23,303, Trong đó:
23,304, cự: là nồng độ ciireuminoid trọng; dịchi ehiểt (fủg/ml).
23,305, là tổng điện tiçh pic củạ çurçuminoid tren ậằc k$ đồ mậụi thử,
23,306, Aß. là tềng diện tắch pic ẽửâ Gurcumirlöid trên úô ký đồ mẫu chuẩn, cựẳ là nồng độ dung dich chuln eurcumỉnoiđ (mg/mằ). f : là hệ sỗ pha loãng của mẫu thử,
23,307, Tắnh hàm lượng cwcumiriQM trọng mầu thử'lạ chề phàm ì
23,308, At x_ct- xJ>.Q Xi5:0
pỉc của cureummoỉd trên sâc kỷ đề mlu. chuẩn, Q f l à nồng độ dung dich chuẩn curcumỉnoỉđ (mg/ml), m: Ịặ khốỉ lương chấ phẩm (mg).Cỉnrơng 1 KÉT QƯA NGHĨÊỊN củ u
23,311, !,L Kbẳo sát phương phấp X Ề iv đu;(K iỉệĩi
23,312, Các quỵ trình chìểt curcuminoỉd từ nghệ trong các tài: liệu thưòịhg, chiết từ nguyên liệu là bột thô của củ nghệ vàng, Nhận thẩy thành phầa củ nghệ ngoài curcumỉnọid (chỉ chiếm khoảng trên
3% khối lương khò) còn cố những thành phần khảọ như tinh bột? chất bé-ọ? tỉnh dầUị nhựạ,... trọng đọ tịnh bột chiếm ủ lệ khá cạọ (60-70%) [2.5]. Vì vậy ? aềụ loại đựơc tịnh bột khỏi ỊỊgụỵện Ịiệu trướC; khi chĩét có thể giúp tiết kĩệm dung môi và quả trình tinh chế sễ thuận lgi ầơn. Chúng tôi tiến hành so sánh bột nguyên liệu chể bằng hai phương pháp, một phương pháp không qua loại tĩnh bột (phương pháp thông thường) và một: phựợng pháp cỗ ]ọạỉ tinh bột: (phựcmg phảp c-ảỉ tiến). Cảc chỉ tiêu đánh giá gồm; đặc điềm bột nghê, hậm lựơng cụrcụmỉnọỉd vậ phần tràm ẹụrcụmĩnọỉd hự hạọ trọng qụậ, trinh xử lý,
23,313, Phươngpháp Ả (không loại. tinh bột):
23,314, Thân rễ nghệ tươi được rửa sạch, thái lát mông 2-4mm? sầy ở óGft c đến khi hàm ầm < 10% (trong khoảng ĨS gỉờ), xay thành bột: thô và rây q(ua rây 2x0mm.
23,315, Phưcmgphấp B (co giaỉ đoạn lọạỉ tỉnh bột);
23,316, Thân rễ nghệ tươi được rửa sạehị nghiền tươi bằng mấỵ nghiền thành
23,317, dạng bột nhẵo. Ngâm bột nhẫo vào nước, khuấy mạnh đế tĩnh bộttảch ra. Vớt l ấy bã, vẩy lỵ tâm cho ráo nưởc? sấy ỏắ 60ổ 0 đến khô (khoang 6 giờ, độ ẳnn dưỏỉ 10%)* Phần nưỗc rửa đề Lẳng, gan đề thu láy tinh bột, Sau đổ thu hồi tinh dầu từ nựỞQ rửa bằng phương phấp cất: kéọ h_ợỉ nước.
thu đươc có các đặc điểm như trình bày trong bảng 3. Ị ì
23,320, Bẳng 3.1: Sặc đỉểm bột nghệ chề bằng 1 phương pháp
23,324, phimiig pháp A
23,326, phưorng
23,328, Hàm ỉuơng curcumìnoid trọng
23,338,23,342, Tỷ lẽ curẹuminoid hư hao trong 23,341, 7,65
23,343, Ngoài ra? quắ trình xử lý nghệ theo phương pháp B còn thu được; 83,2 g tỉnh bột nghệ. Phần nước rửạ bã nghệ được cất lầy tĩnh dầu theo phương pháp cất kéo hơỉ nước, thu được 2,1 mỉ tỉnh dầu.
23,344, Nhẫn xét :
- Đặc điểm: bột nghệ ché thea phương pháp ầ thu đươc cổ màu vầng nâu sẫm, bột nghệ chể theo phương pháp B thu được cỏ màu vàng; sắng do bột nghệ chế đẵ được Loại tình bột cùng một 30 nhựa, chất nhầy/.,., trọn ẳ qụạ trình xử;
23,345, lỊ
23,346, Hàm lựợng curcuminoiđ: bột; nghệ chế: theo phượng; pháp B CO' bàmi lượng curcumirìoỉđ (7,23%) cãỡ hờn hẳiĩ sỡ vơỉ bọt nghệ chểthẽõ phương phắp A (4,11%).Tỷ lệ cưrGUinmoid hưihạp tong.qụá mụh:xựJý_bôt-ingỊiệ;-'t:ùa.bột n g h ệ ; 1 : Ị ché theo phượng pháp A là 2,59% ỵà củạ bệt nghệ chế thẹo phương pháp g {ị 7,65%, Như vậy
3,2, Khảo sát ỵà tựa chon đung môi chiết
23,347, Sử dụng phựợng pháp chỉật; dùng đồ tách curcụmỉmoịd cạ khỏi bọt nghệ bằng đụng môi hoặc hỗn hơp đụng mội thắch họp-
23,348, Qua thực nghiệm, đung mồi lựa chọn chiểt xuất phải ttLỞa màn các yêu eầu sau;
23,349, + Hiểu suất chiết xuất cao?
23,350, + Cố tinh chọn Lọc : c-họn dung môi eỏi hệ- số chọn lọc cạo. Dịch ehiểt ắt; tap, đẫ tỉnh chế,
23,351, 4= Thờỉ điểm cân bằng: Quá trình ehắểt xuất Cụreurnỉnoắđ vợĩ dung môi nhanh đạt tới thời điểm cẫn bằng nhằm rút: ngắn thờĩ gĩan chĩết: xuất,
23,352, Ethanol và aceton được cho Là haỉ dung môi thắch hợp để chiết curcuniLtìoid từ nghệ [36]. Hơn nữa hai dung môi nạy khá an toàn [38]. VI vậy chủng tôi đĩnh hướng phát triển quỵ trinh chiết xuất sử dụng bai dung môi này. 3.2.1. Xác định độ tạo của curcumìnoìd trong dụng môi
23,353, Bể đánh, giá hiệu quầ ẹhỉết xuất eụreumiĩiQỉd từ nghệ tóâ dung môi? traỏể
23,354, hểt cần xác đắnh sơ bộ độ' tan cửa curcurmnoắid trong mỗi đung mồi.
23,360,
23,361, 3,2,2* Xác định thòi gian cân bằng chiết:
23,362, Vời đụng mội khấc. Ịihau khỉ chiết cùng một ĩọại dựơc liệụ cỏ thợỉ điểm
23,363, cân bẵng kỉiảc nhau (tạỉ đỏ nồng độ chảt tan trong dịch chiễt ìầ eần bẵng, khồng tăng lên). Đẻ xác định thời gian chiết xuẩt phù hơp sao CỈLO hiệu suất chiết cao, kỉnh tể nhẩt cần xét đển yếu tố này.
23,364, Thi nghiêm được tiền hành nhự; saụ:
23,365, Cân khoảng 5,00 g bôt nghệ yàọ, bình nón, thêm chắnh xác 200 mi dung một Khuấy trên mầỵ khuẩv tù ộ; nhiệt độ phòng, tộc độ khụậỵ khọậng 50: vòng/ phút.
23,366, Sau từng khoảng thời gian (;1 g,Ỉ0 vớỉ dung môiỉ aceton và 2 giờ vớỉ ethanol 96% )ạ Ịấỵ chắnh xác 1 mỉ dịch chiết, pha loẵng và đinh lượng curcumắnọỉd bằng t IPLC. Từ đổ từứà được hiệu suất chiết ửr từng thòi diêm,
23,367, Kết quầ được trình bày Ợr bảng 33, 3.4 vả hình 3, ụ 3.2, 3-3, 3.4,
52
23,12, Bâng 3.2 : Độ tan của curcuminoid trong ethanol 96% vàaceton tnỒ3)
23,13, Nhật! xết: độ tan của eurcumỉnoỉdỉ trong đung mồỉ aceton tốỉ hơn nhỉễu SO' với trong dung môi ethanol 96% (gắp- hơn 7 lần).
23,392,
23,393, Nhện xét: cùng một loại dung môi chiềt lã aceton:
23,394, ■t= Thời gian chiết đạt cân bằng đối vói. bột nghệ ầ (5 giờ) là chậm hơn so: với bột nghệ B (4 giò).
23,395, +■ ẻĩiệtt suầt chiết: với bột nghệ B (94,6%) cao hơa SO; vợi: bột nghệ- A. ^92,5%) tại thời điềm cân bằng.Bàng; 1,4; Hiệu suất chiết thẹo thòi gắạn ẹụạ dung môi eihanol 96f/o
23,396, (đợn vị %, n=3)
23,397, i Thời gian
23,426,
23,427,
23,428, Hình 3,2: Đồ thị biểu dĩễn hịệu suất ch|ết thẹo thời gian của dung môi ethanol 96%
23,429, Nhận xét: c.ùng một Ịoại dung môi. ẹhỉểt Ịà ẹthanoì 96%: t- Thời giaĩỊ ehiất đạt eân bằng đối vộị bột; nghệ ầ (12, giọt) l_à ehậm Ịi_ơn so vởỉ bột nghệ B iìo giờ).
23,431,
23,432, Hình 33: Đồ thị biểu diễn hỉớu suất chỉểt theo thời gian của bột nghệ Atrong các loai dưng môi.
23,433, Nhẩn xét : cùng chiềt một ỉơạỉ bột nghệ A:
23,434, + Thơi gian chiểt đạt cân bằng khỉ sử dụng dung môắ acetOĩi (5 giở) nhạnh hơn nhiều khi sử dụng dung môi ethanol 96% (12 già).
23,435, T- Hìệụ suất chiềt: chiểt bằng dụng mội ạẹẹtọn cho hiệu sụẩt chiết ẹụrcụmìnọỉd (92,5%) cao họn Qhỉất bạng; dụng mội ẹửỉạnọl 96% (59,2%) tại thợỉ điềm cận bàng.
23,436,
23,437, Hình 3,4; Đầ thị biềụ diễn hĩệụ ốuất chiết thẹo thời gian của bột nghệ B trong các Ịoạì dung môi.
23,438, Nhân xét : củng chiết một loại bột nghệ B:
23,439, + Thời gian chiết đạt cản bằng khi sử đụng dung; môi aceton, (4 giợ) nhanh hơn nhiều khỉ sử đụng dung mồi ethanol 96%. (LO giờ),
23,440, + Hiệu sụất chiết; chĩết bằng dưng mội ạcẹ-tọn chọ hiệụ sụạt chiết: curoụminọỉd ^Q4?6%) cao hơn chiết bằng dụng raộì ethanol 9ộổ/õ (¡78,6%) tại. thời.
23,441, điểm gân bằng.
3,2.3. Xác định tinh chọn lọc cua dung môỉ chiết
mẳy khuấy từ ở nhiệt: độ phỏng, tốc độ khuấy khoảng 50 vọng/phút. Thời gian khuấỵ 5 giờ với dung mỏị aeeton y:ả 1,2 giờ với dung môi ethanoì 96ổ/p. Lọc ỉấy dịch cỉiỉit được v(mi). Hút chỉnh xảc ĩmỉ dfck [ọc, pha ioằng và. xảc
23,444, định nồng độ cụrcụminọid trọng địch chỉệt Ceur.Ọnig/ml)* Tắ* ^ xắc định) <jựợc lựợng c.ụrẹumịnoỉd tắi^r (!*%} chỉật đựơẹ?
23,445, Phấn dịch lọc đem cồ ảp suẩt gỉảtn ơ 60^ c đền thể cao dặc. Lầm kho cao trong bình hút ẳm trong 2 ngày được khối lượng cao đặc m^õộng),
23,446, Klt qui được trinh bày ỏ bảng 3.5.
23,490, Với 2 loại dung môỉ chỉết khảo sát ỉầ aceton vầ ethaaol 96% dùng để khảo sát tắnh chọn lọc khắ chiết: Lần lượt với 2 loại bột nghệ A y ầ B cho kểt quả như sau;
23,491, = Lương ọưrọumĩnọỉd. chiết đựợọ trọng bột nghệ B' bằng, dung; mộ iắ ạcetợn lạ, cạo nhất (3 ĩ 5,6 mg) vậ chìẩt đựcrẹ trọng bột; nghệ A bậng dụng mộ ỉ ẹthạnoỉ 96% là thấp nhất: (134,5 mg).
-Khi chiết bằng đung môi aceton với bột nghệ B cho hệ sồ chọm ĩọc cao nhốt (0,36), thấp nhất là chiềt bằng đung môi ethanol 96% YỚĨ bột nghệ ầ (0,12),
23,492, Như vây, sau khi khảo, sảt 2 loai đung môi ac.etọn và eihanơl 9&Ỵù dùng đế chiết: cưrcưmỉnọịđ từ hạị loại bột nghệ ầ và B, nhận thấỵ đung; một aceton có ắứĩỉằư ưu đỉẳtti hơn dung mồỉ etiianoỉ 96% về:
-Khả năng hòa tan curcuữnnoiđ tốt hơn,
-Tốc độ chiết; nhanh hơn, -Hiệu suất chiết cao hos,
bảo quản, dễ sấy khổ, loại bơt được một số tạp chất, CễLO hiệu suấtchỉểt: cao hơn,.. Chúng tôi. đa lựa chọn phựợng pháp xử lỷ nguyên liệu là phượng pháp loại tinh bột (cho Bột nghệ B) và đung môi đựợe sử dụng để chiết: là, dung môi: ạcẹtọrụ