Nghiên cứu nhận biết

ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.2. Nghiên cứu nhận biết

- Bước 1: Cảm quan

Quan sát và mô tả đặc điểm vật lý, tính chất bên ngoài như:

+ Dạng mẫu: Dạng cao mềm nâu đen, màu đen, thảo mộc, bột hay tinh thể, dạng viên nén, viên con nhộng, dạng tiêm, dạng dung dịch lỏng…

+ Màu sắc, kích thước, mùi, vị, trọng lượng, số lượng, qui cách đóng gói, logo, đồ bao gói, ký hiệu trên đồ bao gói, trên viên ma túy…

+ Tùy thuộc vào loại mẫu, dạng mẫu đã được mô tả ở bước 1 để tiến hành các phản ứng hóa học định tính sơ bộ.

+ Mẫu thảo mộc: Soi kính hiển vi, sau đó thử phản ứng Fast blue B salt để xác định sơ bộ.

+ Mẫu cao, nhựa thử phản ứng tìm cần sa, thuốc phiện trước.

+ Các mẫu khác thử lần lượt các nhóm phản ứng xác định định hướng ban đầu.

+ Trong trường hợp các phản ứng không thể hiện rõ, thì chiết xuất theo quy trình để tìm định hướng chất phân tích.

- Bước 3: Giám định định tính, định lượng

+ Các phương pháp định tính: Tùy theo mức độ được trang bị của các phòng thí nghiệm mà tiến hành sử dụng các phương pháp định tính bằng: Phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến, hồng ngoại, sắc ký khí, sắc ký khí ghép khối phổ, sắc ký lỏng, sắc ký lỏng ghép khối phổ.

+ Các phương pháp định lượng: Sử dụng phương pháp sắc ký khí, sắc ký lỏng.

+ Sơ bộ giám định truy nguyên IP theo qui trình chiết, điều kiện phân tích, phần mềm xử lý số liệu riêng.

- Bước 4: Đánh giá kết quả

+ Tổng hợp các dữ liệu phân tích, kết luận chất ma túy, hàm lượng (theo yêu cầu của điều tra, truy tố, xét xử).

+ Tổng hợp các dữ liệu phân tích vật lý, IP về thành phần các tạp chất, các sản phẩm trung gian trong mẫu, so sánh sự giống nhau giữa các mẫu theo phân tích IP và các đặc điểm vật lý để kết luận sự giống nhau giữa các mẫu với nhau và truy nguyên nguồn gốc.

Sơ đồ 2.1: 4 bước phân tích nhận biết các chất ma túy thường gặp

2.2.2.1. Phương pháp chiết mẫu

Một số mẫu như sái thuốc phiện, các sản phẩm cần sa cần phải chiết trước khi tiến hành các phương pháp phân tích [19], [34], [101].

- Chiết cần sa thảo mộc: Mẫu cắt nhỏ ngâm ngập bằng petrolium ether hoặc chloroform trong vòng từ 24-48 giờ. Lọc lấy dịch chiết. Bốc hơi dung môi hoặc để nguyên tiến hành phản ứng hóa học, chấm sắc ký lớp mỏng.

- Chiết cocain từ lá coca: 1gam lá coca + 40 ml ethanol 95% ngâm nóng 15 phút, để nguội, lọc. Dịch lọc bốc hơi- thêm 20ml chloroform và 10 ml dung dịch acid citric 1,5% (làm 2 lần). Lấy lớp nước chỉnh pH đến 8,2 bằng NaHCO3 và chiết bằng 20 ml CHCl3 (hai lần). Lấy lớp CHCl3 loại nước,

Bước 1: Cảm quan

Nhận biết đặc điểm vật lý mẫu.

Bước 2: Thử phản ứng hóa học

Định tính sơ bộ chất hoặc nhóm chất ma túy.

Bước 3: Định tính, định lượng

- Các phương pháp phân tích định tính: TLC, UV-vis, FTIR, GC, GC-MS, LC.

- Định lượng: UV, GC, GC-MS, LC.

- Truy nguyên nguồn gốc IP: Chiết theo qui trình riêng, GC, GC-MS và phần mềm xác định ma túy.

Bước 4: Đánh giá kết quả

- Kết luận chất ma túy, hàm lượng, truy nguyên nguồn gốc mẫu ma túy, sự giống nhau của các mẫu?

loại Na2SO4 khan. Bốc hơi dung môi đến khô  Cắn. Hòa tan cắn vào 2ml methanol dùng để bơm sắc ký khí, chấm sắc ký lớp mỏng.

- Chiết xuất 9 -THC từ cần sa thảo mộc: Lắc 1 gam cần sa thảo mộc đã nghiền nhỏ với 20 ml petrolieum ether trong 1 giờ. Lọc-rửa cắn 2 lần với lượng nhỏ của petrolium ether. Chuyển dịch lọc vào trong bình định mức 25ml. Thêm petrolium ether đủ đến 25ml. Lấy mẫu dung dịch để phân tích sắc ký khí, và sắc ký lớp mỏng.

- Chiết morphin từ sái thuốc phiện, thuốc phiện hoặc các thành phẩm khác có thuốc phiện: Mẫu hòa tan trong môi trường HCl loãng (pH=2), lọc lấy dịch lọc, kiềm hóa dịch lọc bằng NaOH 0,1N đến pH=9,5. Chiết bằng dichloromethan. Bốc hơi dung môi, cắn được dùng để định tính.

- Chiết heroin từ mẫu hỗn hợp gửi giám định: Tiến hành tương tự như chiết morphin. Dung môi sử dụng để chiết có thể thay thế bằng ether ethylic.

- Chiết amphetamin.Tương tự như trên, dung môi thường sử dụng để chiết là ethylacetat.

2.2.2.2. Nhận biết bằng phương pháp hóa học

a) Thuốc phiện

Nhận biết thuốc phiện bằng một số thuốc thử sau [19], [92]: - Thuốc thử Marquis

+ Quan sát ở đáy đĩa lõm ngay sau khi tiến hành phản ứng. + Kết quả: Màu tím đỏ đến tím: opium dương tính.

- Thuốc thử Sắt sulfat

Kết quả: Màu đỏ nâu nhạt opium dương tính. - Thuốc thử Dragendorff

Kết quả: màu đỏ cam, đỏ gạch: opium dương tính.

b) Đối với morphin, heroin, codein

Nhận biết bằng một số thuốc thử sau [19], [92] - Thuốc thử Marquis

Kết quả:

+ Màu chuyển từ đỏ tím đến tím đậm: Phản ứng dương tính với morphin.

+ Màu chuyển từ tím đến tím đậm: Phản ứng dương tính với codein. + Màu chuyển từ tím hồng đến tím: Phản ứng dương tính với heroin Trong thực tế, sự phân biệt màu giữa 3 phản ứng trên đây rất khó. Khi phản ứng dương tính thì kết luận có thể có các chất opiat.

- Thuốc thử acid nitric Kết quả:

+ Màu vàng chuyển chậm dần sang xanh lá nhạt: heroin dương tính. + Màu cam chuyển nhanh tới đỏ và sau đó chuyển chậm tới vàng: morphin dương tính.

+ Màu cam chuyển chậm sang vàng: codein dương tính. - Thuốc thử Sắt sulfat.

Kết quả: Màu đỏ chỉ định morphin dương tính. - Thuốc thử Dragendorff.

Kết quả: Các chất nhóm opiat đều cho màu từ vàng cam đến đỏ cam.

c) Đối với amphethamin, methamphetamin, MDMA, MDEA, MDA, ephedrin, pseudoephedrin, mescalin

Nhận biết bằng một số thuốc thử sau [19], [93] - Thuốc thử Marquis.

Kết quả:

+ Màu từ cam chuyển sang nâu đậm: Phản ứng dương tính với amphetamin, methamphetamin.

+ Màu từ đỏ cam chuyển sang đỏ: Phản ứng dương tính với mescalin. + Màu xanh đen : Phản ứng dương tính với MDMA, MDEA, MDA. + Màu xanh rêu: DOB, 2C-B, 2C-E…

+ Không màu chuyển dần sang nâu (phản ứng âm tính): ephedrin, pseudoephedrin, cathin.

- Thuốc thử Simon. Kết quả:

+ Chuyển màu từ xanh da trời sang xanh dương: Phản ứng dương tính với methamphetamin, MDMA, MDEA.

+ Màu chuyển từ xanh lá cây nhạt đến xanh dương: Phản ứng dương tính với methylphenidat.

+ Màu không thay đổi (phản ứng âm tính): amphetamin, ephedrin, pseudoephedrin, MDA,DOB…

- Thuốc thử Dragendorff. Kết quả:

+ MDMA, methamphetamin, MDEA cho màu vàng cam.

+ Các chất amphetamin, ephedrin, pseudoephedrin, MDA,…âm tính

d) Cần sa (cannabis)

Nhận biết bằng một số thuốc thử sau [19], [88]

- Thuốc thử Fast blue B salt, aceton, dung dịch NaOH 0,1N.

Kết quả: Màu lớp dưới từ đỏ đến đỏ tía: Phản ứng dương tính với cần sa và sản phẩm cây cần sa.

- Thuốc thử Duquenois-Levin.

Kết quả: Màu tím trong lớp chloroform chỉ định cannabis dương tính.

e) Cocain

Nhận biết bằng một số thuốc thử sau [19], [89] - Thuốc thử Cobalt thiocyanat.

Kết quả: Màu xanh ngọc: Phản ứng với cocain dương tính. Chú ý: Có nhiều hợp chất khác cũng cho phản ứng này. - Thuốc thử Dragendorff.

f) Barbiturat

Nhận biết bằng một số thuốc thử sau [19], [34], [91] - Thuốc thử Dille Koppanyi.

Kết quả: Màu tím hồng cánh sen: Phản ứng dương tính với barbiturates. - Thuốc thử Z’wikker chuyển đổi.

Kết quả: Màu tím hồng cánh sen, phản ứng dương tính với nhóm các chất barbiturat.

g) Benzodiazepin

Nhận biết bằng một số thuốc thử sau [19], [34], [91] - Thuốc thử Zimmermann.

Kết quả: Màu tím xanh, phản ứng dương tính với benzodiazepin.

Ghi chú: lorazepam, oxazepam, oxazolam, clorazepat, midazolam clordiazepoxid, không cho phản ứng này.

- Thuốc thử Hydroclorid acid.

Kết quả: Màu vàng chỉ định phản ứng dương tính nhóm benzodiazepin. 2.2.2.3. Sắc ký lớp mỏng

- Nguyên lý: Sắc ký lớp mỏng là phương pháp phân tích thông dụng, chất phân tích di chuyển trên 1 lớp mỏng chất hấp phụ mịn, vô cơ hay hữu cơ, theo một chiều nhất định trong dung môi hay hệ dung môi. Trong quá trình di chuyển mỗi thành phần chuyển dịch với tốc độ khác nhau tuỳ theo bản chất của chúng và cuối cùng dừng lại những vị trí khác nhau.

- Phát hiện bằng tia UV (bước sóng 254nm và 366 nm) hoặc phun thuốc thử. Xác định vị trí các vết trên bản mỏng.

- Ghi kết quả (Rf): Kết quả của TLC được xác định bằng trị số Rf - Bình triển khai sắc ký bao giờ cũng phải được bão hòa dung môi. - Tùy theo chất cần phân tích nhận biết mà chọn dung môi hay hệ dung môi thích hợp do tính phân cực (phản hấp phụ) của các hệ dung môi được sử dụng.

- Các hệ dung môi thường được sử dụng trong phân tích các chất ma túy thường gặp ở Việt nam [101]:

+ Thuốc phiện, opiat: Thuốc phát hiện Dragendorff.

Hệ DM số 3: Ethyl acetat:Methanol:Amoniac đậm đặc (85:10:5) Hệ DM số 4: Toluen:Aceton:Ethanol:Amoniac đậm đặc (45:45:7:3) + Heroin và một số chất khác: Thuốc phát hiện Dragendorff.

Hệ DM số 3

Hệ dung môi số 8: Chloroform:Methanol (90:10) + Cần sa: Thuốc phát hiện Fast Blue B salt 1%. Hệ DM số 1: Petrolium ether:Diethylamin (80:20)

Hệ DM số 2: Cyclohexane:Diisoproylether:Diethylamin (52:40:8) Các mẫu chiết nhựa cần sa, cần sa thảo mộc có 3 vết của CBD, 9 - THC, CNB. 9 - THC luôn luôn ở giữa trong hệ DM số 1 và hệ DM số 2.

+ Cocain: Thuốc phát hiện Dragendorff, đèn tử ngoại. Hệ DM số 5: Cyclohexan:Toluen:Diethylamin (75:15:10) Hệ DM số 6: Methanol:Amoniac đđ (100:1,5)

+ Amphetamin: Thuốc phát hiện Ninhydrin hoặc Fast Black K 1%. Hệ DM số 3, Hệ DM số 6

+ Barbiturat: Thuốc phát hiện là Z’wikker. Hệ DM số 3 .

Hệ DM số 7: Chloroform:Aceton (80:20)

Hệ DM số 9: Chloroform:Isopropanol:Amoniac đậm đặc (50:50:10) + Benzodiazepines: Thuốc phát hiện là Dragendorff.

Hệ DM số 8: Chloroform: methanol (90:10) 2.3.2.4. Sắc ký khí (GC)

- Khảo sát các loại cột: Cột mao quản (capillary column). Dài 10-100m. ID 0,1-0,53mm. Độ dày lớp film 0,1-5m.

- Ứng dụng trong phân tích: [34], [93] * Định tính:

Trị số Rt được sử dụng như một thông số trong định tính ma túy. Đặc biệt khi xây dựng chỉ số Kovats hoặc dùng tỷ số Rt của chất phân tích chia cho chất nội chuẩn làm bảng atlas so sánh định tính. Chính xác nhất là sử dụng chất đối chiếu hay chất chuẩn chạy trong cùng điều kiện.

* Định lượng.

Dựa vào diện tích đỉnh: Ax x Cs

- Phương pháp ngoại chuẩn: Cx% = x 100 As

Trong đó:

AX: Diện tích đỉnh của mẫu thử. CX: Nồng độ mẫu thử.

AS: Diện tích đỉnh của mẫu chuẩn. CS: Nồng độ mẫu chuẩn.

- Khảo sát dung dịch chất chuẩn:

+ Cột mao quản: pha 1mg trong 1ml methanol. Bơm mỗi dung dịch hai lần ở cùng một điều kiện, mỗi lần 1l.

* Khảo sát trên cột mao quản dung dịch nhựa thuốc phiện, các opiat: với các điều kiện sau:

- Cột mao quản: OV1 = HP1: 30m; 0,32mm ID. Trên máy GC 5890 Series II HP Integrator.

- Đẳng nhiệt. Nhiệt độ cột: 2600C - Nhiệt độ buồng tiêm: 2800 C. - Nhiệt độ Detector FID: 2800 C. - Khí mang: N2 : 35 Kpa. - Tỷ lệ chia dòng: 20:1

* Khảo sát trên cột mao quản cocain và các chất gây tê với các điều kiện: - Cột mao quản: SE30: 30m; 0,32mm ID. Trên máy GC 5890 Series II HP Integrator.

- Chương trình nhiệt độ: Nhiệt độ cột ban đầu ở 1800 C giữ 13 phút, tăng 50C /phút, nhiệt độ cuối 2600 C giữ 3 phút.

- Nhiệt độ buồng tiêm: 2800 C. - Nhiệt độ Detector FID: 2800 C.

- Khí mang: N2 : 50 Kpa. - Tỷ lệ chia dòng: 20:1 - Air: 50 Kpa H2: 65Kpa

* Khảo sát trên cột mao quản đối với mẫu cần sa và các cannabinoids với các điều kiện sau:

- Cột mao quản: OV1 = HP1: 30m; 0,32mm ID. Trên máy GC 5890 Series II HP Integrator.

- Đẳng nhiệt: Nhiệt độ cột: 2400 C

- Nhiệt độ buồng tiêm: 2800 C. Detector FID: 2800 C. - Khí mang: N2: 50 Kpa. - Tỷ lệ chia dòng: 20:1

- Air: 50 Kpa H2: 65Kpa

* Nhóm amphetamin:

Khảo sát trên cột mao quản amphetamin với các điều kiện sau

- Cột mao quản pha 1mg/ml methanol. Bơm mỗi dung dịch hai lần ở một điều kiện, mỗi lần 1l.

- Cột mao quản: OV-1 : 30m; 0,32mm ID. Trên máy GC 5890 Series II HP Integrator.

- Chương trình nhiệt độ 1

Nhiệt độ cột ban đầu 1100 C giữ 5 phút, tăng 1600 C /phút. Nhiệt độ cuối 2600 C giữ 10 phút.

Nhiệt độ buồng tiêm: 2800 C. Nhiệt độ detector FID: 2800 C.

Khí mang: N2: 50 Kpa. Tỷ lệ chia dòng: 20:1 Air: 50 Kpa H2: 65Kpa

- Chương trình nhiệt độ 2

Nhiệt độ cột ban đầu 1300C giữ 5 phút, tăng 1600 C /phút . Nhiệt độ cuối 2700 C giữ 10 phút.

Nhiệt độ buồng tiêm: 2800 C. Nhiệt độ detector FID: 2800 C.

Khí mang: N2 : 50 Kpa. - Tỷ lệ chia dòng: 20:1 Air: 50 Kpa H2: 65Kpa

* Nhóm Barbiturat:

Điều kiện đo trên cột mao quản.

- Điều kiện 1: Cột mao quản: OV1 = HP1 : 30m; 0,32mm ID. Trên máy GC 5890 Series II HP Integrator.

Đẳng nhiệt: Nhiệt độ cột: 2000 C Nhiệt độ buồng tiêm: 2750 C. Nhiệt độ detector FID: 2750 C.

Khí mang: N2: 50 Kpa. Air: 50 Kpa H2: 65Kpa Tỷ lệ chia dòng: 20:1

- Điều kiện 2: Cột, máy GC tương tự điều kiện 1 Chương trình nhiệt độ. Nhiệt độ cột: 1500 C - 2600 C tốc độ 40 C/Phút.

Nhiệt độ buồng tiêm: 2750 C. Nhiệt độ detector FID: 2750 C.

Khí mang: N2: 40 Kpa. Air: 50 Kpa , H2: 65Kpa. Tỷ lệ chia dòng: 20:1

* Benzodiazepin:

- Điều kiện 3. Cột mao quản: OV1 = HP1: 30m; 0,32mm ID. Trên máy GC 5890 Series II HP Integrator: Chương trình nhiệt độ.

Nhiệt độ buồng tiêm: 2800 C. Nhiệt độ detector FID: 2800 C.

Khí mang: N2 : 35 Kpa. Tỷ lệ chia dòng: 20:1 Air: 50 Kpa, H2: 65Kpa

* Các chất khác:

Đo trên máy GC 6890N Agilent với các điều kiện sau:

- Cột mao quản Ultra II: 25m; 0,20mm ID. Chương trình nhiệt độ. - Nhiệt độ cột: 500 C /1phút – 3000 C/ 9 phút, tốc độ 100 C/Phút. - Nhiệt độ buồng tiêm: 2800 C.

- Nhiệt độ detector FID: 2800 C. Khí mang: N2 , 1,2 ml/phút đẳng áp.

Tỷ lệ chia dòng: 20:1 Air: 400 PSI, H2: 40 PSI Các mẫu đo lập lại 3 lần và lấy giá trị trung bình. 2.2.2.5. Quang phổ hấp thụ tử ngoại-khả kiến (UV-Vis)

- Định tính: Sử dụng bước sóng cực đại của chất phân tích. So sánh với bước sóng hấp thụ cực đại của chất chuẩn hay trong tài liệu, chất chuẩn đo trực tiếp trên máy, định hướng xác định chất phân tích. Ví dụ diazepam trong môi trường acid có 3 trị số max là: 358, 285 và 241nm. Heroin có max là 278nm [17], [34].