Định tính saponin
Phản ứng tạo bọt:
Cho 5 ml nước cất vào 0,1g bột dược liệu vào ống nghiệm, lắc mạnh trong 5 phút, để yên trong 15 phút. Nếu bọt còn bền vững sau 15 phút, thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Kết luận: Mẫu nghiên cứu không có saponin.
24
Ngâm 10g bột dược liệu với 100ml nước, trong 24 giờ. Lọc lấy dịch chiết, loại tạp chất bằng chì acetat 30% vừa đủ (không còn tủa đục). Để lắng, lọc lấy dịch lọc vào bình gạn. Lắc kỹ 3 lần với 25ml chloroform (10ml, 10ml, 5ml), để lắng, gạn lấy dịch chiết, lọc qua bông loại nước. Chia đều dịch chiết vào 4 ống nghiệm đã được sấy khô, đem cô cách thủy đến khô. Cắn thu được để làm phản ứng:
a, Phản ứng Liberman
Cho 1ml anhydrid acetic vào ống nghiệm 1, lắc đều. Nghiêng ống 450, cho từ từ theo thành ống 1ml H2SO4 đặc. Quan sát nếu thấy mặt tiếp xúc giữa 2 lớp xuất hiện vòng màu đỏ tím thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng âm tính. b, Phản ứng Baljet
Cho 0,5ml ethanol 90% vào ống nghiệm 2, lắc đều. Nhỏ từng giọt thuốc thử Baljet (1 phần dung dịch acid picric 1% và 9 phần dung dịch NaOH 10%), xuất hiện màu đỏ cam thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng âm tính (-). c, Phản ứng Legal
Thêm 0,5 ml ethanol 90% vào ống nghiệm 3, lắc đều, cắn tan hết. Nhỏ 1 giọt dung dịch natri nitroprussiat 0,5% và 2 giọt dung dịch NaOH 10%, lắc đều, xuất hiện màu đỏ cam thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng âm tính(-). d, Phản ứng Keller-Kiliani
Hòa tan cắn còn lại bằng 0,5ml ethanol 90%. Thêm vài giọt dung dịch sắt (III) clorid 5% pha trong acid acetic, lắc đều. Nghiêng ống 45o. Cho từ từ theo thành ống 0,5ml acid H2SO4 đặc, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống nghiệm. Phản ứng dương tính khi giữa hai lớp chất lỏng có vòng màu đỏ.
Kết quả: Phản ứng âm tính(-).
25 Định tính anthranoid
Phản ứng Borntraeger:
Đun sôi dược liệu trong 10ml H2SO4 1N. Để nguội, lọc qua giấy lọc, dịch lọc thu được cho vào bình gạn. Chiết bằng 10ml cloroform, gạn lấy lớp chloroform vào ống nghiệm, cô bớt dung môi còn khoảng 1ml, thêm 1ml NaOH 10%, lắc nhẹ, xuất hiện màu đỏ sim thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng âm tính (-).
Kết luận: Mẫu nghiên cứu không có anthranoid.
Định tính flavonoid
Đun cách thủy 0,5g bột dược liệu trong 5ml ethanol 90%, lọc nóng lấy dịch lọc đem làm phản ứng:
a, Phản ứng Cyanidin
Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết, thêm một ít bột Mg (khoảng 10mg). Nhỏ từng giọt HCl đậm đặc (3-5) giọt. Để yên một vài phút, dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu đỏ, phản ứng dương tính.
Kết quả: Phản ứng dương tính. b, Phản ứng với kiềm
Phản ứng với hơi amoniac: Nhỏ một giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, sấy khô, hơ trên miệng lọ chứa amoniac đặc, màu vàng đậm lên so với tờ giấy lọc chỉ nhỏ giọt dịch chiết thì dương tính.
Phản ứng với NaOH 10%: Cho dung dịch NaOH 10% vào ống nghiệm chứa 1ml dịch chiết, xuất hiện tủa vàng. Khi thêm 1ml nước cất, tủa tan, màu vàng của dung dịch tăng thêm thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng dương tính. c, Phản ứng với FeCl3
Thêm vài giọt FeCl3 5% vào ống nghiệm chứa 1ml dịch chiết, dung dịch màu xanh đen - phản ứng dương tính.
26
Kết luận: Mẫu nghiên cứu có flavonoid.
Định tính coumarin
Dịch lọc chuẩn bị như phần định tính flavonoid dùng làm các phản ứng:
a, Phản ứng mở đóng vòng lacton
Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 1ml dịch chiết: - Ống 1: thêm 0,5ml NaOH 10%.
- Ống 2: để nguyên.
Đun cả hai ống nghiệm đến sôi, để nguội rồi quan sát: - Ống 1: không xuất hiện tủa vàng.
- Ống 2: dung dịch vẫn trong. Thêm mỗi ống 1ml nước cất:
- Ống 1: trong hơn. - Ống 2: có tủa đục.
Thêm vài giọt HCl đặc, ống 1 trở về giống ống 2 thì dương tính. Kết quả: Phản ứng âm tính.
b, Phản ứng với thuốc thử diazo:
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm vào 2ml NaOH 10%. Đun cách thủy tới sôi, để nguội, thêm vài giọt thuốc thử diazo, thấy xuất hiện tủa màu đỏ gạch là dương tính.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Kết luận: Mẫu nghiên cứu không có coumarin.
Định tính tanin
Đun sôi 1g bột dược liệu với 10ml nước cất, để nguội, lọc. Cho vào mỗi ống 1ml dịch lọc:
- Ống 1: thêm 1 giọt FeCl3 5%, xuất hiện tủa màu xanh đen. - Ống 2: thêm 2 giọt đồng acetat 10%, xuất hiện tủa.
27
- Ống 4: thêm 5 giọt gelatin 1%, xuất hiện tủa bông trắng. Kết quả: Phản ứng dương tính.
Kết luận: Mẫu nghiên cứu có chứa tanin.
Định tính alcaloid
Ngâm 1g dược liệu trong 15 ml dung dịch H2SO4 1N. Đun đến sôi, để nguội. Lọc dịch lọc vào bình gạn dung tích 100ml.
Kiềm hóa dịch lọc bằng dung dịch amoniac 6N đến pH 9-10. Chiết alcaloid base bằng chloroform (chiết 3 lần, mỗi lần 5ml). Gộp các dịch chiết cloroform, loại nước bằng natrisulfat khan. Dịch chiết đem lắc với H2SO4 1N hai lần, mỗi lần 5ml. Gộp các dịch chiết nước, chia đều mỗi ống 1ml để làm các phản ứng:
- Ống 1: nhỏ 2-3 giọt TT Mayer, tủa màu trắng là dương tính. - Ống 2: nhỏ 2- 3 giọt TT Bouchardat, tủa màu nâu là dương tính. - Ống 3: nhỏ 2- 3 giọt TT Dragendorff, tủa màu da cam là dương
tính.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Kết luận: Mẫu nghiên cứu không có alkaloid.
Định tính đƣờng khử, polysaccharid, acid amin, acid hữu cơ
Đun sôi 2g bột dược liệu với 20ml nước cất, trong 2 phút. Để nguội, lọc. Dịch lọc dùng làm phản ứng sau:
Định tính đường khử: Thêm vào 5 giọt thuốc thử Fehling A và 5 giọt thuốc thử Fehling B vào ống nghiệm chứa 2ml dịch lọc. Đun cách thủy 10 phút, nếu xuất hiện kết tủa đỏ gạch là dương tính.
Kết quả: Phản ứng dương tính. Định tính polysaccharid:
- Ống 1: 4ml dịch chiết và 5 giọt TT Lugol. - Ống 2: 4ml nước cất và 5 giọt TT Lugol.
28 Kết quả: Phản ứng dương tính.
Định tính acid amin: Hòa tan 3 giọt TT Ninhydrin 3% trong 2ml dịch chiết. Đun cách thủy sôi 10 phút, dung dịch có màu xanh tím là dương tính.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
Định tính acid hữu cơ: Thêm một ít bột Na2CO3 vào ống nghiệm chứa 4ml dịch chiết, phản ứng dương tính khi có bọt khí bay lên.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
Kết luận: Mẫu nghiên cứu có đường khử, polysaccharid, acid amin, acid hữu cơ.
Định tính chất béo, sterol, caroten
Ngâm 10g bột dược liệu trong n-hexan để qua đêm. Lọc, thu lấy dịch lọc để làm phản ứng:
Định tính chất béo:nhỏ 2 giọt dịch chiết lên giấy lọc. Hơ nóng bay hơi hết dung môi, nếu còn vết mờ trên giấy lọc thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
Định tính sterol: Cô cách thủy bốc hơi dung môi đến cắn. Thêm vào ống nghiệm 1ml anhydrid acetic, lắc kỹ; nghiêng ống 45 độ, nhỏ từ từ 3 giọt acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm, thấy mặt phân cách có vòng tím đỏ, lớp chất lỏng phía trên có màu xanh lá thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Định tính caroten: Cô cách thủy bốc hơi dung môi đến cắn. Thêm 2 giọt H2SO4 đặc vào cắn. Dung dịch có màu xanh đậm thì dương tính.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
Kết luận: Mẫu nghiên cứu có caroten, chất béo; không có sterol.
Nhận xét:
Kết quả thực nghiệm cho thấy: cây Chua me đất hoa vàng có 8 nhóm chất là flavonoid, tanin, caroten, chất béo, đường khử , acid amin, acid hữu cơ, polysaccharid. Kết quả định tính được trình bày ở bảng 3.1.
29
Bảng 3.1: Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ bằng phương pháp hóa
học của loài Oxalis corniculata L.
TT Nhóm chất Thuốc thử và phản ứng định tính Kết quả Kết luận
1 Saponin Phản ứng tạo bọt - Không có
2 Alcaloid
Phản ứng với thuốc thử Mayer -
Không có Phản ứng với thuốc thử Bouchardat -
Phản ứng với thuốc thử Dragendorff -
3 Anthranoid Phản ứng Borntrager - Không có
4 Polysaccharid Phản ứng với thuốc thử lugol +++ Có
5 Glycosid tim Phản ứng Liebermann- Burchardt - Không có Phản ứng Baljet - Phản ứng Legal - Phản ứng Keller kiliani - 6 Flavonoid Phản ứng với Cyanidin + Có Phản ứng với NH3 +++ Phản ứng với NaOH 10% +++ Phản ứng với FeCl3 +++
7 Coumarin Phản ứng đóng mở vòng lacton - Không có
8 Tanin Phản ứng với FeCl3 5% +++ Có Phản ứng với gelatin 1% +++ Phản ứng với chì acetat 10% +++ Phản ứng với đồng acetat 10% +++ 9 Caroten Phản ứng với H2SO4 +++ Có
10 Đường khử Phản ứng với thuốc thử Fehling + Có
11 Chất béo Để lại vết mờ trên giấy lọc + Có
12 Sterol Phản ứng với H2SO4/ anhydrid acetic - Không có
13 Acid amin Phản ứng với thuốc thử Ninhydrin +++ Có
14 Acid hữu cơ Phản ứng với Na2CO3 +++ Có
30