Định tính glycosid tim
Lấy 3 g lá dược liệu, chiết soxhlet với n-hexan 1 giờ. Bã dược liệu sấy khô, cho vào bình cầu, đun hồi lưu với ethanol 40% trong 1 giờ. Gạn dịch chiết vào cốc có mỏ, thêm khoảng 3ml chì acetat 30%, khuấy đều. Lọc loại tủa, thử dịch lọc vẫn còn tủa với chì acetat, cho thêm 1ml chì acetat nữa vào dịch chiết, khuấy và lọc lại. Tiếp tục thử đến khi dịch chiết không còn tủa với chì acetat. Cho toàn bộ dịch lọc vào bình gạn và lắc kỹ với hỗn hợp chloroform : ethanol tỷ lệ 4:1 (3 lần, mỗi lần 5 ml), gạn lấy lớp chloroform vào cốc có mỏ khô sạch, loại nước bằng natri sulfat khan. Chia dịch chiết vào các ống nghiệm nhỏ, bốc hơi dung môi trên nồi cách thuỷ cho đến khô. Cắn còn lại để làm các phản ứng định tính sau:
- Phản ứng Liebermann - Phản ứng Baljet
- Phản ứng Legal
21
Lấy 2 g dược liệu đã làm nhỏ, cho vào bình nón dung tích 50 ml. Thêm 15 ml dung dịch thấm ẩm H2SO4 1 N. Đun đến sôi, để nguội. Lọc dịch lọc vào bình gạn dung tích 100ml.
Kiềm hóa dịch lọc bằng dung dịch amoniac 6 N đến pH 9-10. Chiết alcaloid base bằng chloroform (chiết 3 lần, mỗi lần 5ml). Gộp các dịch chiết chloroform, loại nước bằng natrisulfat khan. Dịch chiết đem lắc với H2SO4
1N hai lần, mỗi lần 5 ml. Gộp các dịch chiết nước chia đều vào ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 1 ml để làm các phản ứng sau:
- Phản ứng với thuốc thử Mayer - Phản ứng với thuốc thử Bouchardat - Phản ứng với thuốc thử Dragendorff
Chuẩn bị:
Lấy dược liệu đã làm nhỏ, cho nước ngập dược liệu (cách bề mặt dược liệu khoảng 2 cm), đun sôi trong 30 phút. Sau 30 phút, lấy dịch chiết ra, lọc nóng được dịch lọc. Dịch lọc lại, đem cô đến cắn (cắn toàn phần).
Định tính saponin
- Quan sát hiện tượng tạo bọt:
Hòa tan một ít cắn vào khoảng 5 ml nước cất. Đun cách thủy 10 phút, lọc qua bông lấy dịch chiết vào ống nghiệm to. Thêm nước cất đến khoảng 10 ml, bịt ống nghiệm bằng ngón tay cái, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc 5 phút, để yên và quan sát cột bọt thấy cột bọt bền sau 15 phút thì dương tính.
Định tính flavonoid
Hòa tan cắn vào ethanol 90%, lọc qua giấy lọc gấp nếp lấy dịch lọc đem làm các phản ứng:
- Phản ứng với hơi amoniac (NH3) - Phản ứng với dung dịch kiềm loãng - Phản ứng Cyanidin
- Phản ứng với dung dịch sắt (III) chlorid
22
Chuẩn bị dịch lọc như phần định tính flavonoid để làm các phản ứng: - Phản ứng mở đóng vòng lacton
- Phản ứng với thuốc thử diazo
Định tính anthranoid
- Phản ứng Borntraeger
Hòa tan một ít cắn vào 10 ml H2SO4 1 N. Để nguội, lọc qua giấy lọc gấp nếp lấy dịch lọc cho vào bình gạn. Chiết bằng 10ml chloroform, gạn lấy lớp chloroform vào ống nghiệm, cô bớt dung môi còn khoảng 1 ml, thêm 1 ml NaOH 10% vào, lắc nhẹ, nếu xuất hiện màu đỏ sim thì phản ứng dương tính.
Định tính acid hữu cơ
Hòa tan cắn trong nước nóng, để nguội rồi lọc qua giấy lọc gấp nếp. Cho vào ống nghiệm nhỏ khoảng 2 ml dịch lọc, thêm một ít tinh thể Na2CO3 nếu thấy có bọt khí bay lên thì dương tính.
Định tính tanin
Hòa tan cắn trong nước nóng. Để nguội, lọc qua giấy lọc gấp nếp lấy dịch lọc. Cho vào 3 ống nghiệm nhỏ mỗi ống 2ml dịch lọc.
+ Ống 1: Thêm vài giọt sắt (III) chlorid 5% nếu thấy xuất hiện tủa màu xanh đen thì dương tính.
+ Ống 2: Thêm vài giọt chì acetat 10% nếu thấy xuất hiện tủa bông thì dương tính.
+ Ống 3: Thêm vài giọt gelatin 1% nếu thấy xuất hiện tủa bông trắng thì dương tính.
Định tính đường khử
Hòa tan cắn vào 1ml nước nóng, đem lọc thu được dịch lọc. Thêm vào đó 1ml dung dịch thuốc thử Felling A và 1ml dung dịch thuốc thử Felling B.
Đun cách thủy sôi vài phút nếu thấy xuất hiện tủa đỏ gạch thì dương tính.
23
Hòa tan cắn vào 2ml nước nóng. Lọc nóng, lấy dịch lọc vào ống nghiệm nhỏ, thêm 5 giọt thuốc thử Ninhydrin 3%, đun cách thủy 2 phút nếu thấy xuất hiện màu tím thì dương tính.
Định tính chất béo
Hòa tan cắn vào 2 ml nước nóng, lọc nóng. Nhỏ 1 giọt dịch chiết trên lên miếng giấy lọc, hơ nóng cho bay hết hơi dung môi, nếu để lại vết mờ trên giấy lọc thì phản ứng dương tính.
Định tính caroten
Cho vào ống nghiệm nhỏ một ít cắn khô, nhỏ vài giọt H2SO4 đặc vào cắn nếu thấy xuất hiện màu xanh lá thì dương tính.
Định tính sterol
Cho vào ống nghiệm một ít cắn khô, hòa tan trong 2ml chloroform và 1ml anhydrid acetic. Để ống nghiệm nghiêng 45o, thêm từ từ H2SO4 đậm đặc theo thành ống nghiệm thấy mặt phân cách có vòng tím đỏ, lớp chất lỏng phía trên có màu xanh lá thì dương tính.
* Nhận xét:
Kết quả phân tích sơ bộ thành phần hóa học của lá cây Xăng sê cho thấy sự có mặt của các nhóm chất flavonoid, glycosid tim, tanin, acid hữu cơ, đường khử, sterol và caroten.
Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong lá cây Xăng sê được trình bày tóm tắt lại ở bảng 3.1:
24
Bảng 3.1. Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong lá Xăng sê bằng phản ứng hóa học
TT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả Nhận xét
1 Saponin Hiện tượng tạo bọt - Không có
2 Alcaloid
TT. Mayer -
Không có
TT. Dragendorff -
TT. Bouchardat -
3 Anthranoid Pư Borntrager - Không có
4 Glycosid tim
Pư Liebermann- Burchardt +
Có
Pư Baljet +
Pư Legal +
5 Flavonoid
Pư với Cyanidin +
Có
Pư với kiềm ++
Pư với FeCl3 +++
6 Coumarin Pư đóng mở vòng lacton -
Không có
Pư với TT diazo -
7 Tanin
Pư với FeCl3 5% +++
Có
Pư với gelatin 1% +++
Pư với chì acetat 10% +++
8 Acid hữu cơ Pư với Na2CO3 + Có
9 Acid amin Pư với thuốc thử Ninhydrin - Không có
10 Đường khử Pư với TT. Fehling +++ Có
11 Chất béo Vết mờ trên giấy lọc - Không có 12 Sterol Pư với H2SO4/ anhydrid
acetic + Có
13 Caroten Pư với H2SO4 + Có
25