♦ Mẫu chuẩn:
Cân chính xác khoảng 10 mg dầu vitamin D (1000.000 Ul/g) cho vào bình định mức 50 ml. Hoà tan bằng methanol vừa đến vạch. Hút chính xác 5 ml cho vào bình định mức 10 ml rồi pha loãng bằng methanol vừa đến vạch ta được dung dịch chuẩn nồng độ 100 U.I/ml
♦ Mẫu thử:
- Hút chính xác 2 ml syro, pha loãng vói 3 ml methanol và 2 ml nước. Cho tất cả qua cột SPE C18 (200 mg X 2 ml) dưới áp suất hút chân không.
- Thổi khí nitơ để bốc hơi dung môi ở nhiệt độ 40-60 °c. Vì trong dịch rửa giải vẫn còn một it nước nên khi gần cạn thì thêm 1 ml aceton rồi tiếp tục bốc hơi hoàn toàn.
- Hoà tan cắn trong 0,5 ml methanol ta được mẫu thử đã được làm sạch và làm giàu 4 lần so với ban đầu.
Chuẩn bị và cho hệ thống sắc ký chạy ổn định với pha động trong khoảng 30 phút. Tiêm mẫu thử và mẫu chuẩn vào hệ thống sắc ký và tiến hành sắc ký trong điều kiện đã chọn . Hàm lượng vitamin D trong syro đựơc tính toán dựa vào diện tích pic của mẫu chuẩn và mẫu thử theo công thức:
^ _ St.Cc t i = ---
ScA
Trong đó:
H : Hàm lượng vitamin D (Ul/ml) Sc : Diện tích pic dung dịch chuẩn S t: Diện tích pic dung dịch thử
Cc : Nồng độ dung dịch chuẩn (Ul/ml) Làm 3 lần để lấy giá trị trung bình
Bảng 2.8. Kết quả định lượng syro Patarvit.
Mẫu chuẩn Mẫu thử Hàm lượng vitamin D trong syro Patarvit (Ul/ml)
Diện tích píc: Lần spic
135,126 1 197,117 36,50
2 193,224 35,78
3 197,612 36,96
VW1 «;v%velength=265 nm (HUNGXE^03003$i( tĩìAU - 1 2 - 10 - 8 - 6 - 4 - 1 2 - J L _ . ^ 0 - ■ ' 1 • ' • 1 ’ ’ ■ I 6 8 10 ... 1 ... 1 . ■. 1 .., 1 .,. ... 12 14 16 18 tnln
Hình 2 J. Sắc ký đồ mẫu chuẩn vitamin D (100 UI.ml), Cột C18
(250 mm X 4 mm, 5 ụm), tốc độ 1,5 ml/phút
Hình 2.8. Sắc ký đồ mẫu thử- Cột C18 (250 mm X 4 mm, 5 ụm),
tốc độ 1,5 ml/phút