2.3.4.1. Phƣơng pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao
Phƣơng pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao đƣợc áp dụng để xác định hàm lƣợng đối với pellet lansoprazol trong giai đoạn lão hóa cấp tốc và để xác định hàm lƣợng dƣợc chất còn lại trong pellet sau khi thử kháng acid trong môi trƣờng pH 1,2.
* Điều kiện sắc ký:
- Cột Supelco Discovery C18 (15cm x 4,6mm; 5 m). - Detector PDA: 285nm.
- Tốc độ dòng: 1,0ml/phút. - Thể tích tiêm: 20 l.
- Pha động: hỗn hợp acetonitril - nƣớc - triethylamin (600:400:2,5). Điều chỉnh pH 7,0 bằng acid phosphoric.
* Cách tiến hành:
- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 60mg lansoprazol cho vào bình định mức 50ml, hoà tan và pha loãng vừa đủ đến vạch bằng methanol, lắc đều. Hút chính xác 5ml dung dịch thu đƣợc pha loãng thành 50ml bằng pha động, lắc đều. Lọc qua màng lọc 0,45 m.
- Dung dịch thử: Cân 1g pellet lansoprazol, nghiền thành bột mịn. Cân chính xác khoảng 600mg bột, chuyển vào bình định mức 50ml, thêm 30ml methanol, lắc siêu âm để hoà tan, thêm methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều. Đem ly tâm với tốc độ 3500 vòng/phút trong 15 phút, thu lấy dịch trong. Hút chính xác 5ml dịch trong pha loãng thành 50ml bằng pha động, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 m.
Từ diện tích pic của các dung dịch thử và dung dịch chuẩn, hàm lƣợng của chuẩn, tính ra hàm lƣợng lansoprazol trong mẫu thử. Tính kết quả theo công thức sau:
Hàm lƣợng lansoprazol (%) = 100 x (St/Sc) x (mc/mt)
Trong đó:
St: diện tích pic của mẫu thử. Sc: diện tích pic của mẫu chuẩn.
mt: khối lƣợng bột mịn pellet lansoprazol (mg). mc: khối lƣợng lansoprazol (mg).