3. ẹOÂI TệễẽNG VAỉ PHệễNG PHAÙP NGHIEĐN CệÙU
3.4.8.Khaỷo saựt sapogenin thuyỷ phaõn tửứ saponin tp trong laự, thaõn vaứ reó
3.4.8.1. Thuỷy phãn saponin vaứ chieỏt sapogenin tp
Laỏy moọt lửụùng saponin tp chieỏt tửứ caực maĩu nguyẽn lieọu theo sụ ủoă 1 vaứ cho vaứo bỡnh tam giaực, thẽm vaứo 250 ml EtOH 50% (coự chửựa 7% HCl) vụựi tyỷ leọ 1/50, ủun hoăi lửu thuỷy phãn trong 4 giụứ. ẹeồ nguoọi, thẽm khoaỷng 1/3 theồ tớch nửụực vaứo dũch thuỷy phãn, cõ giaỷm aựp cho ủeỏn heỏt EtOH. Dũch nửụực acid laộc vụựi CHCl3 (50 ml ì 6 laăn). Lụựp CHCl3 ủửụùc rửỷa nửụực (50 ml ì 3 laăn) (ủeỏn khi nửụực rửỷa trung tớnh). Laứm khan dũch CHCl3 baống Na2SO4 khan, cõ giaỷm aựp thu hoăi dung mõi, thu ủửụùc sapogenin tp[20].
3.4.8.2. ẹũnh tớnh sapogenin tp baống SKLM
Sau khi thu ủửụùc sapogenin tp, ủũnh tớnh sapogenin tp caực maĩu baống SKLM, so vụựi chaỏt chuaồn: acid oleanolic.
Tieỏn haứnh vụựi heọ dung mõi khai trieồn :[20] - CHCl3–MeOH (9 : 1).
- C6H6–CHCl3–MeOH (2 : 3 : 0,5).
Sụ ủoă 1. Sụ ủoă chieỏt xuaỏt saponin tp
Cõ giaỷm aựp ụỷ 500C
Thẽm nửụực Nguyẽn lieọu
Baừ dửụùc lieọu Dũch chieỏt MeOH
Chieỏt noựng vụựi MeOH, lóc
Caộn MeOH
Rửỷa qua DiaionHP-20 laăn lửụùt baống nửụực caỏt vaứ MeOH Laộc vụựi Et2O ủeỏn khi nhát maứu
Cõ giaỷm aựp ụỷ 500C Dũch ether Dũch nửụực
Dũch MeOH
Saponin tp
3.4.8.3. Phãn laọp vaứ tinh khieỏt hoựa caực sapogenin chớnh trong caực boọ phaọn cuỷa ba loaứi
Sapogenin tp thu ủửụùc tửứ múc 3.4.8.1. ủửụùc duứng ủeồ phãn laọp caực sapogenin baống phửụng phaựp saộc kyự coọt. ẹieău kieọn tieỏn haứnh nhử sau:
Chaỏt haỏp phú: Silicagel 60 F254 (0,063 – 0,200 mm) (Merck).
Heọ dung mõi rửỷa coọt: Laăn lửụùt rửỷa vụựi caực heọ dung mõi phãn cửùc daăn theo tổ leọ sau:
CHCl3:MeOH = (9:0); (9:0,1); (9:0,2)…....(9:1). Hoaởc Benzen:EtOAc = (1:0,2); (1:0,4);....(1:1).
Heọ dung mõi kieồm tra trẽn SKLM: CHCl3:MeOH (9:1) Phaựt hieọn: H2SO4 10%, 110oC/5 phuựt.
3.4.8.4. Xaực ủũnh caỏu truực caực sapogenin
ẹo caực chổ tiẽu phoồ IR, 1H NMR, 13C NMR, DEPT, HMQC, HMBC trẽn caực thieỏt bũ phãn tớch múc 3.4.2.2.
Dửùa trẽn caực chổ tiẽu trẽn vaứ ủoỏi chieỏu vụựi caực thõng soỏ phoồ cuỷa caực hụùp chaỏt ủaừ bieỏt ủeồ xaực ủũnh caỏu truực.