Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.Phương phỏp nghiờn cứu
2.2.1. Cỏch bố trớ thớ nghiệ.
Làm đất: Nhỏ, kỹ, tơi, luống cao 0,2 - 0,25 m, rộng khoảng 1m, dài 5m. Mật độ trồng cõy cỏch cõy 35 - 40cm.
- Thớ nghiệm được chia làm 2 lụ.
Lụ 1: Tưới nước sạch, chế độ chăm bún theo quy trỡnh trồng rau bắp cải. Trong lụ 1 chia làm 06 luống, luống thớ nghiệm xen kẽ với luống đối chứng (ĐC).
Cỏch ngày thu hoạch 20 ngày thỡ bún đạm lần cuối, đồng thời phun hợp chất khử lờn bắp cải, phun đều dạng phun sương. Trờn 3 luống thớ nghiệm phun trờn 9 cõy bắp cải cỏch đều nhau gọi là cụng thức 1 (CT1). Sau đú cỏch thu hoạch 15 ngày phun hợp khử lờn 9 cõy bắp cải khỏc cũng cỏch đều nhau trờn 3 luống thớ nghiệm, gọi là cụng thức 2 (CT2). Cỏch ngày thu hoạch 10 ngày phun hợp chất khử lờn 9 cõy bắp cải khỏc cũng cỏch đều nhau trờn 3 luống thớ nghiệm gọi là cụng thức 3 (CT3).
Lụ 2: Tưới nước ao, cú chế độ chăm súc giống như lụ 1 và cú 6 luống. Thu mẫu vào buổi chiều, nhỳng nước để rỏo và sỏng hụm sau xếp vào thựng xốp mang xuống phũng thớ nghiệm tổ Sinh lớ - Hoỏ sinh khoa Sinh học, Trường Đại học sư phạm Hà nội. Đồng thời mang 1/2 số mẫu thu sang Viện Cụng nghiệp thực phẩm, Trung tõm phõn tớch và giỏm định thực phẩm Quốc gia để phõn tớch một số chỉ tiờu như Hàm lượng nitrat, kim loại nặng (chỡ và
Cỏc mẫu được bảo quản trong tủ bảo quản.
2.2.2. Phương phỏp phõn tớch mẫu
2.2.2.1. Cỏc chỉ tiờu sinh lớ
2.2.2.1.1. Khối lượng khụ của cõy (g): Theo Peterburxki (1968)
Lấy mẫu lỏ bắp cải bỏnh tẻ, rửa sạch thấm khụ nước cõn khối lượng tươi bằng cõn điện. Sau đú để xỏc định khối lượng khụ sấy mẫu ở 1050C cho đến khối lượng khụng đổi, cõn khối lượng khụ bằng cõn điện.
Tớnh % chất khụ theo cụng thức: Khối lượng lỏ khụ
Khối lượng khụ (%) = x 100 Khối lượng lỏ tươi
2.2.2.1.2. Hàm lượng diệp lục.
Nguyờn tắc: Dựa vào tớnh chất của diệp lục bị hoà tan trong dung mụi hữu cơ.
Cõn 0.5 g mẫu lỏ bỏnh tẻ, nghiền và chiết rỳt trong axeton 100%, pha loóng tiếp trong axeton 100% đến thể tớch 50ml. Sau đú đem so màu trờn mỏy Speckol ở cỏc bước súng 644nm và 662nm.
Hàm lượng diệp lục tổng số được tớnh theo cụng thức của Wettstein (1957).
Ca (mg/l) = 9,784 . E622 - 0,99 . E644 Ca (mg/l) = 21,426 . E644 - 4,650 . E622 Ca + Cb (mg/l) = 5,134 . E622 + 20,436 . E644
Sau đú tớnh hàm lượng sắc tố ra mg/g lỏ tươi theo cụng thức.
A = . .1000 C V p (mg/g) Trong đú : A: Hàm lượng sắc tố tớnh ra mg/g lỏ tươi.
C: Hàm lượng diệp lục tổng số trong dịch chiết (mg/l). V: Thể tớch dịch chiết tớnh ra ml (10ml).
P: Khối lượng mẫu tớnh ra gam (0,5). 2.2.2.2. Chỉ tiờu sinh hoỏ
2.2.2.2.1. Hoạt độ enzym Catalase: Theo phương phỏp của A.N. Bah
và A.I.Oparin
Nguyờn tắc: Trong quỏ trỡnh ụxi hoỏ cỏc chất hữu cơ trong mụ thực vật dưới tỏc động của oxidase tạo nờn peroxyt hydro. Peroxyt hidro ở nồng độ cao sẽ gõy độc cho tế bào chất. Nhờ enzym catalase, H2O2 bị phõn giải thành nước và oxy:
2 H2O2 Catalase
2H2O + O2
Dựa vào việc chuẩn độ lượng H2O2 cũn lại khụng bi catalase phõn giải bởi dung dịch KMnO4 0,1N để tớnh lượng H2O2 dựa vào sơ đồ:
5H2O2 + 2KMnO4 + H2SO4 = 5O2 + 2 KHSO4 + 8 H2O + 2MnSO4 Hoạt tớnh enzym catalase được tớnh bằng cụng thức:
2 1 1 c V -V .1,7.V X = V .g = 1,7.(V2-V1) (mgH2O2/g) Trong đú:
X1: Số mg H2O2 bị catalase cú trong 1g nguyờn liệu phõn giải. V2: Số ml KMnO4 0,1N chuẩn độ H2O2 ở bỡnh ĐC (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
V1: Số ml KMnO4 0,1N chuẩn độ H2O2 ở bỡnh TN V: Thể tớch dịch chiết enzym (50ml)
Vc: Số ml dung dịch enzym dựng để phõn tớch (10ml) g: Số gam nguyờn liệu (5g).
12 2
XX = X =
t.0,034 ( μM H2O2 /g/phỳt)
t: Thời gian phõn giải H2O2 (30 phỳt) 0,034: micro đương lượng H2O2 (mg)
X2. Hoạt tớnh của enzym catalase ( μM H2O2 /g/phỳt)
2.2.2.2.2. Xỏc định hoạt độ của enyim peroxidase: Theo A. N. Boiakin
(1976).
Peroxidase đúng vai trũ quan trọng trong quỏ trỡnh xỳc tỏc sự oxi hoỏ cỏc poliphenol khỏc nhau cú trong mụ thực vật ở dạng liờn kết hoặc ở dạng tự do và cỏc amin thơm.
Nguyờn tắc: Dựa vào tốc độ phản ứng oxi hoỏ benzidin dưới tỏc dụng của enzym cú chứa trong mụ thực vật đến sự hỡnh thành nờn sản phẩm của quỏ trỡnh oxi húa cú màu xanh với nồng độ khỏc nhau được xỏc lập trờn mỏy so màu quang điện (Erma).
E(a.b) A =
t.p.c = (E.100.4)/(30s.1g.1cm) = (40/3).E (UI/g/s)
Trong đú :
A: Hoạt tớnh của peroxidase trờn 1 g mẫu
E: OD (mật độ quang tại bước súng 480 nm) = E480 tại 30s – E480 tại 0s
a: Thể tớch dịch chiết (100ml)
b: Mức độ pha loóng của dịch chiết trong ống nghiệm (4)
p: Khối lượng mẫu (1g)
t: Thời gian (30s)
c: Chiều dầy cuvet (mỏy đo OD…..) 1 cm.
2.2.2.2.3. Hàm lượng vitamin C
Nguyờn tắc: Dựa vào tớnh chất khử của axit ascorbic đối với chất màu để định lượng vitamin C trong nguyờn liệu.
Cụng thức tớnh: c f V .V.0,00088.100 X= V .g =(Vcml*100ml*0.088)/(25ml*5g)=(8.8/125)*Vc Trong đú:
X: Lượng vitamin C cú trong nguyờn liệu (%) Vc: Số ml dung dịch I2 0,01N chuẩn độ
Vf: Số ml dung dịch mẫu đem phõn tớch (25ml) V: Thể tớch dung dịch mẫu pha loóng (100ml) g: Trọng lượng nguyờn liệu đem phõn tớch (5g)
0,00088 số gam vitamin C tương đương với 1ml I 0,01 N
2.2.2.3. Vi sinh vật gõy hại: E.coli
Nguyờn tắc: Căn cứ vào đặc tớnh sinh hoỏ để xỏc định vi khuẩn. Pha loẵng mẫu thử cú độ đậm đặc khỏc nhau cấy lờn mụi trường chọn lọc để đếm và tớnh số vi khuẩn.
Sử dụng phương phỏp thử: TCVN 6846:2001(Tiờu chuẩn Việt Nam). 2.2.2.4. Trứng giun: Sử dụng phương phỏp thử TQ BYT (Thường quy Bộ Y tế). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.2.2.5. Hàm lượng nitrat trong rau: Sử dụng phương phỏp thử TCPTN - HIC ( Tiờu chuẩn phũng thử nghiệm: Sắc kớ ion (HIC).
2.2.2.6. Hàm lượng kim loại nặng: Sử dụng phương phỏp thử
Đối với kim loại nặng là asen (As): Sử dụng phương phỏp thử: TCVN 6193 - 96 (ASS). Tiờu chuẩn Việt Nam, quang phổ hấp thụ nguyờn tử.
Đối với chỡ (Pb): Sử dụng phương phỏp thử TCVN 6626 - 2000 (ASS). Tiờu chuẩn Việt Nam, quang phổ hấp thụ nguyờn tử.
2.2.3. Phương phỏp xử lớ số liệu.
Cỏc số liệu nghiờn cứu được sử lớ theo phương phỏp thống kờ toỏn học
Trung bỡnh số học (X ): 1 n i Xi X n Trong đú: X - trung bỡnh số học
Xi - giỏ trị của kết quả đo đếm được ở mỗi lần nhắc lại
n - số lần nhắc lại Độ lệch chuẩn( ) : 2 (X Xi ) n nếu n ≥ 30 2 ( ) 1 i X X n nếu n < 30 Sai số trung bỡnh số học (m): m n Hệ số biến động (CV): .100 CV X