doxorubicin in vitro:
2.4.3.1.Hiệu suất mang thuốc của hệ
Hiệu suất mang thuốc của hệ được đánh giá bằng phương pháp thẩm tích. Lấy 2 ml mỗi mẫu thuốc đem đặt trong túi thẩm tích có kích thước lỗ lọc trong khoảng 12000 – 14000 Da thẩm tích trong 50 ml môi trường. Sau 24 giờ lấy dịch thẩm tích đem đo quang ở bước sóng 497 nm trên máy UV – 2600 tại phòng 504 tòa nhà Y1, Khoa Y dược, Đại học Quốc gia Hà Nội để định lượng doxorubicin tự do. Từ đó, tính được khả năng mang DOX của từng hệ theo công thức:
% Load = 20–c1 . 100
20
Trong đó:
- % Load: Hiệu suất mang doxorubicin của hệ dẫn.
- c1: Nồng độ doxorubicin tự do dung dịch bên ngoài thẩm tách sau 24 giờ.
Nếu hệ không mang thuốc, có 100% doxorubicin tồn tại ở dạng tự do thì dịch
thẩm tích có nồng độ doxorubicin là 500 . 2 = 20 µg/ml.
50
2.4.3.2.Mức độ giải phóng in vitro của doxorubicin
Mức độ giải phóng in vitro của doxorubicin khỏi các hệ dẫn thuốc được đánh
giá bằng phương pháp thẩm tích trên 2 môi trường pH khác nhau:
- pH 7,4: Môi trường sinh lý trong các tế bào thường.
- pH 5,5: Môi trường trong tế bào ung thư.
Lấy 2 ml mỗi mẫu thuốc đem đặt trong túi thẩm tích có kích thước lỗ lọc trong khoảng 12000 – 14000 Da thẩm tích trong 50 ml môi trường, ủ ở 37ºC trong 48 giờ. Tại các thời điểm khác nhau, lấy ra 5ml dịch thử, và bổ sung lại bằng 5ml môi trường. Sau đó, định lượng doxorubicin trong dịch thử bằng phương pháp đo quang ở bước sóng 497 nm trên máy UV – 2600 và tính được lượng dược chất giải phóng theo công thức: ∑ 𝐶𝑗. 5 + 𝐶𝑖. 50 = 𝑚𝑖 𝑖−1 𝑗−1 %GP= mi .100
Trong đó:
- mj, mo: khối lượng doxorubicin giải phóng ở lần lấy mẫu thứ i và khối lượng
doxorubicin đem thử.
- Ci, Cj: nồng độ doxorubicin của dung dịch bên ngoài túi thẩm tích tại thời
điểm i,j.
- % GP: Phần trăm doxorubicin giải phóng.
Mỗi mẫu tiến hành 3 lần.
Ở mục 1.2.4 trong chương I –Tổng quan, có nêu bước sóng dùng để định lượng doxorubicin là 480 nm. Tuy nhiên, trong quá trình quét phổ mẫu trên máy UV- 2600, chúng tôi thấy rằng DOX có cường độ hấp thụ ánh sáng cực đại tại bước sóng 497 nm. Do vậy, chúng tôi tiến hành đo quang định lượng DOX ở bước sóng 497 nm.