Tùy mức độ nghiêm ngặt trong kiểm sốt tạp nhiễm của qui trình lên men mà phương pháp và điều kiện khử trùng nồi cĩ khác nhau. Ví dụđối với các trường hợp mức độ kiểm sốt khơng cao như trong lên men rượu, lên men dấm thì khơng cần phải dùng hơi nước để khử trùng mà cĩ thể dùng alkohol để tiệt trùng trước khi sử dụng. Trong trường lên men amino acids, lên men kháng sinh thì cần phải dùng hơi nước nĩng để thanh trùng với áp suất cao (thường ≥1,5 kgf/cm2 để đạt nhiệt độ thanh trùng ~125oC) trong thời gian dài (≥2 giờ). Trong quá trình thanh trùng cần phải bảo đảm là hơi nước nĩng phải được luân chuyển trong bất kỳ khơng gian nào của thiết bị, nước ngưng tụ lại ở đáy nồi phải được liên tục xả ra nhằm tránh một số vị trí của nồi khơng bảo đảm nhiệt độ thanh trùng. Điều cần lưu ý là sau khi khử trùng xong phải luơn luơn giữ nồi lên men ở
áp suất dương bằng khơng khí đã được lọc sạch, tránh khơng khí từ bên ngồi xâm nhập vào nồi một khi áp âm. Qui trình thao tác thanh trùng nồi lên men (Hình 5. 6) như sau:
Hình 5. 6. Sơđồ bồn lên men và các đường ống liên quan.
1. Các van xả, van thốt khí phải ở trạng thái mở trước khi bắt đầu thanh trùng (V1, V2, V4, V9, V12).
2. Đĩng van khí nén (V5), van cấp mơi trường (V7), van nạp giống (V11) và mở các van V3, V8, V10.
3. Cấp hơi nước nĩng vào nồi, mở V6.
4. Khi nhiệt độđạt 100oC, mở nhỏ các van xả (V1, V2, V4, V9, V12). 5. Khi nhiệt độđạt yêu cầu (125oC) bắt đầu tính thời gian thanh trùng
6. Khi thời gian thanh trùng đạt yêu cầu, dừng quá trình thanh trùng bằng cách đĩng van cấp hơi nước nĩng (V6) và ngay lập tức mở van cấp khơng khí nén (V5).
7. Khi tồn bộ nước ngưng (condensate) trong nồi lên men, trong đường ống đều được thốt ra ngồi, đĩng các van xả (V1, V2, V9, V12).
8. Duy trì áp suất khơng khí trong bồn và sẵn sàng để nhận mơi trường chuẩn bị cho nuơi cấy.