4. Ý nghĩa của đề tài
3.2.dày màng CVK trong các điều kện nuôi cấy
Màng CVK khi nuôi cấy tĩnh trong môi trường nước dừa già có màu trắng ngà, bề mặt phẳng, trơn, chứa nhiều nước, dẻo dai. Thu màng CVK ở thời điểm khác nhau sẽ có độ dày mỏng khác nhau. Khi thu màng nuôi cấy ở ngày thứ 4 thì màng sẽ có độ dày khoảng 0,3cm. Khi thu màng nuôi cấy đến ngày thứ 6, màng sẽ có độ dày khoảng 0,5cm. Vi khuẩn A. xylinum trong môi trường nuôi cấy sẽ sử dụng chất dinh dưỡng có trong môi trường để sinh trưởng và phát triển liên tục, chúng sản sinh ra CVK tích lũy dần trên bề mặt môi trường tạo thành một lớp màng CVK, do vậy thời gian nuôi cấy càng lâu thì lớp màng CVK sẽ càng dày lên cho tới khi môi trường hết chất dinh dưỡng, vi khuẩn A. xylinum không sinh trưởng nữa thì độ dày màng mới ngừng tăng.
Hình ảnh màng CVK thu được ở ngày cấy thứ 4 và ngày thứ 6 được minh họa như trong hình 3.2.
(a) (b)
Hình 3.2. Màng CVK với thời gian nuôi cấy khác nhau (a): Màng CVK thu ở ngày nuôi cấy thứ 4 (dày 0,3cm) (b): Màng CVK thu ở ngày nuôi cấy thứ 6 (dày 0,5cm 3.3. Tinh chế màng CVK
Tinh chế màng CVK để loại bỏ các tạp chất có trong môi trường nuôi cấy, đồng thời phá hủy và trung hòa độc tố của vi khuẩn. Đây là một quá trình
quan trọng trước khi màng được sử dụng để nạp thuốc nó giúp màng có thể sử dụng được lượng thuốc tối đa. Màng CVK sau khi tách ra từ môi trường nuôi cấy được rửa với nước rồi ngâm vào dung dịch NaOH 3%, sau 48 giờ ngâm dung dịch có màu nâu, màng CVK được lấy ra rửa với nước sau đó ngâm HCl 3%, sau 48 giờ lấy màng ra rửa với nước, thu được màng CVK tinh chế có màu trắng sáng
Hình ảnh quy trình tinh chế màng CVK được thể hiện trong hình 3.3.
Hình 3.3a: Màng CVK ngâm với NaOH 3%
Hình 3.3.3: Màng CVK sau khi tinh chế 3.4. Khả năng hấp thụ thuốc Cur của màng CVK
Màng tinh khiết sau khi tinh chế được sấy ở nhiệt độ 900C trong 4 giờ để loại nước sau đó cho màng vào bình chứa 100ml dung dịch Cur 20% đặt bình vào bể rung siêu âm, nhiệt độ 370C. Màng CVK đang hấp thụ thuốc được thể hiện như trong hình 3.4.
Hình 3.4. Màng CVK đang hấp thụ thuốc Cur
Sau khi ngâm màng CVK trong dung dịch Cur trong các khoảng thời gian lần lượt là 1giờ, 1giờ 30 phút, 2giờ lấy dung dịch ra đo quang phổ UV - 2450 để xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng. Kết quả đo quang phổ CVK được trình bày như trong bảng 3.1.
Bảng 3.1. Giá trị OD hấp thụ thuốc Cur của màng CVK( n = 3) Độ dày của màng CVK (cm) 0,3 0,5 OD 1,695 ± 0,021 1,732 ± 0,018
Từ kết quả tính được trong bảng 3.1 ta có thể thấy sau 2 giờ ngâm màng thì giá trị OD đo được gần như không giảm chứng tỏ lượng thuốc hấp thụ vào màng đã đạt cực đại.
Lấy giá trị OD thu được trong bảng 3.1. thay vào phương trình đường chuẩn của Cur ta tìm được nồng độ Cur (C%) trong dung dịch, lấy C% thay vào công thức (1) ta được khối lượng Cur có trong dung dịch (m1), lấy khối lượng Cur có trong dung dịch thay vào công thức (2) ta được khối lượng Cur hấp thụ vào màng CVK (mHT), tiếp tục lấy khối lượng Cur được hấp thụ vào màng CVK thay vào công thức (3) ta thu được tỷ lệ thuốc Cur được hấp thụ vào màng CVK.
Khối lượng thuốc được hấp thụ vào màng CVK, tỷ lệ hấp thụ và cường độ hấp thụ thuốc của màng CVK được trình bày như trong bảng 3.2.
Bảng 3.2. Khối lượng Cur được hấp thụ, tỷ lệ hấp thụ và cường độ hấp thụ Cur của màng CVK (n =3) Độ dày màng CVK (cm) Qt (mg) (Cur 20%) Thể tích màng (cm3) Qd (mg) mHt (mg) Cường độ hấp thụ (mg/cm3) EE (%) 0,3 20 15,072 12,156 ± 0,0018 7,844 ± 0,0023 0,520 ± 0,0018 39,22% ± 0,0012 0,5 20 25,12 12,485 ± 0,0021 7,515 ± 0,0016 0,299 ± 0,0015 37,575% ± 0,0014
Nhận xét: Từ kết quả tính được trong bảng 3.2 ta thấy, lượng thuốc Cur
được hấp thụ vào màng CVK khá lớn chiếm tới 39,22% và 37,575% tổng khối lượng thuốc có trong 100ml dung dịch ban đầu.
Màng CVK có độ dày 0,3cm có cường độ hấp thụ thuốc là 0,520 mg/cm3, màng CVK có độ dày 0,5cm có cường độ hấp thụ thuốc là 0,299 mg/cm3. Qua kiểm định giả thuyết bằng công cụ Data analysis thu được p = 8,42.10-9 có nghĩa là sự sai khác giữa cường độ hấp thụ của 2 màng có ý nghĩa thống kê. Như vậy màng CVK dày 0,3cm có khả năng hấp thụ thuốc tốt hơn màng CVK dày 0,5cm.
3.5. Màng CVK sau khi nạp Cur
Màng CVK sau khi được hấp thụ Cur thì được rửa sạch để loại bỏ thuốc tự do và được sấy ở nhiệt độ 120ᴼC trong 20 phút.
Hình ảnh màng CVK sau khi hấp thụ thuốc được thể hiện trong hình 3.5.
a) b)
Hình 3.5: Màng CVK sau khi lhấp thụ thuốc Cur
a) Màng CVK – Cur 0,3cm b) Màng CVK – Cur 0,5cm
HGHGHGH UIUYUIY
Nhận xét: Màng CVK – Cur thu được có màu vàng tươi của thuốc Cur, có thể chất dẻo dai, không bị giòn.
30
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1. Kết luận (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Qua nghiên cứu đề tài, chúng tôi đã thu được một số kết quả như sau: - Tạo được màng CVK từ vi khuẩn A. xylinum trong môi trường nước dừa già.
- Thu được màng CVK có độ dày 0,3cm và 0,5cm để hấp thụ. Màng CVK có độ
tinh khiết cao, dai và không biến dạng khi sấy khô ở nhiệt độ cao thích hợp với nhu cầu làm thí nghiệm.
- Màng CVK 0,3cm có khả năng hấp thụ thuốc Curcumin tốt hơn màng CVK 0,5cm. Như vậy, màng càng mỏng thì độ hấp thụ thuốc Cur càng cao
4.2. Kiến nghị
Tiếp tục nghiên cứu khả năng vận tải và phân phối thuốc Curcumin của màng CVK từ chủng A. xylinum, có thể thay thế môi trường nước dừa già bằng các môi trường khác như nước vo gạo, nước hoa quả, rỉ đường,…
31
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Dương Thị Hồng Ánh, Phạm Văn Giang, Nguyễn Trần Linh, “Nghiên cứu
bào chế tiểu phân nano curcumin bằng phương pháp nghiền bi kết hợp
với đồng nhất hóa tốc độ cao”,Trường Đại học Dược Hà Nội, số 1/2014,
nghiên cứu dược thông tin thuốc.
2. Trịnh Hoàng Dương, Hà Diệu Ly, “Chiết xuất curcumin từ củ nghệ vàng và xây dựng bộ dữ liệu chuẩn của curcumin để thiết lập chất chuẩn chiết
từ dược liệu”, Viện Kiểm nghiệm Thuốc TP. Hồ Chí Minh, tạp chí Dược
học– 8/2011 số 424 năm 51.
3. Đỗ Tất Lợi (2004), “Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam”, Nxb Y học, 227 – 230.
4. TS. Dương Minh Tâm, ThS Đỗ Thanh Sinh, “Một số kết quả nghiên cứu
triển khai công nghệ vật liệu nano tại Khu công nghệ cao TP. Hồ Chí
Minh và Định hướng phát triển tiếp theo 2013 -2015”, hội thảo khao học
“Định hướng phát triển khoa học và công nghệ vật liệu tiên tiến tại Đại học Quốc gia Hồ Chí Minh”.
5. Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu chế tạo màng cellulose trị bỏng
từ acetobactor xylinum”, đề tài cấp bộ, Bộ Y tế - Đại học Y dược thành
phố Hồ Chí Minh.
Tiếng Anh
6. Almeida I.F. et al. (2014), “Bacterial cellulose membranes as drug
delivery systems: An in vivo skin compatibility study”, European Journal
of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 86 (3), 332-336.
7. Altaf S. Darvesh et al, “Curcumin and liver cancer : a review”, Curr Pharm Biotech., 2012, 13, 218-228.
32
Promises”, Molecular Pharmaceutics, Vol. 4, No. 6, 807–818. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
9. Armando JD. et al. (2014), “Do bacterial cellulose membranes have
potential in drug-delivery systems”, Expert Opin.
10. Bambang Kuswandi. et al. (2011), “Real-Time Monitoring of Shrimp Spoilage Using On-Package Sticker Sensor Based on Natural Dye of
Curcumin”, Springer Science + Business Media, 5:881–889.
11. Hai-Peng Cheng, Pie-Ming Wang, Jech-Wei Chen and Wen-Teng Wu (2002), “Cultivation of Acetobacter xylinum for Bacterial cellulose
production in a modified airlift reactor”, Biotechnol, Appl, Biochem,
35, 125-132.
12. Hatcher H., Planalp R., Cho J., Torti F. M., Torti S. V. (tháng 6 năm 2008). “Curcumin: from ancient medicine to current clinical trials”.
Cell. Mol. Life Sci.65 (11): 1631–52.
13. Klemm D. et al. (2001), “Bacterial synthesized cellulose – artificial
blood vessels for microsurgery”, Prog. Polym. Sci, 26, 1561–1603.
14. Nguyen TX. et al. (2014), “Chitosan-coated nano-liposomes for the oral
delivery of berberine hydrochloride”, J. Mater. Chem. B, 2, 7149–7159.
15. P.A Harris, IM. Leigh and HA Navsaria (1998), “The future for cultured
Skin Replacements Buns”, 24(7), 453 – 457.
16. Silva NHCS. et al. (2014), “Topical caffeine delivery using biocellulose
membranes: a potential innovative system for cellulite treatment”,
Cellulose, 21, 665- 674.
17. Silva NHCS. et al. (2014), “Bacterial cellulose membranes as transdermal delivery systems for diclofenac: in vitro dissolution and
PHỤ LỤC
Bảng so sánh cường độ hấp thụ thuốc Cur trung bình của màng CVK 0.3cm và 0.5cm
T - Test: Two - Sample Assuming Unequal Variances
0.3cm 0.5cm Mean 0.52 0.299 Variance 3.24E-06 0.00000225 Observations 3 3 Hypothesized Mean Difference 0 df 4 t Stat 163.3679 P(T<=t) one-tail 4.21E-09 t Critical one-tail 2.131847 P(T<=t) two-tail 8.42E-09 t Critical two-tail 2.776445
Giả thuyết Ho là 2 số trung bình cộng của 2 mẫu giống nhau α = 0.05. Vì t Stat > t Critical nên bác bỏ giả thuyết Ho.