trong huyết tương bằng phương pháp HPLC
Về phương pháp xử lý mẫu: Qua tham khảo các tài liệu chúng tôi nhận thấy acid perclorid được sử dụng phổ biến trong các nghiên cứu để chiết tách ACV ra khỏi huyết tương với phương pháp tiến hành rất đơn giản. Hơn nữa, ACV là một chất có độ ổn định hóa học tương đối tốt. Sau khi tiến hành khảo sát, chúng tôi quyết định lựa chọn acid perclorid 20% làm dung môi tủa protein để tách ACV ra khỏi các mẫu huyết tương nghiên cứu, với ưu điểm nhanh (chỉ qua các bước lắc xoáy, ly tâm), phần trăm tìm lại cao (từ 103,1% đến 104,3% với RSD giữa các mẫu khác nhau ≤ 3,4%), đơn giản hơn nhiều so với phương pháp sử dụng acetonitril.
Về phương pháp định lượng acyclovir trong huyết tương:
Phương pháp HPLC với ưu điểm nhanh, đơn giản, có độ nhạy cao được hầu hết các nghiên cứu lựa chọn. Qua tham khảo các tài liệu, chúng tôi tiến hành thăm dò một số hệ pha động: methanol - đệm phosphat với các tỷ lệ khác nhau trên cột sắc ký C18. Kết quả cho thấy hệ pha động: methanol: đệm pH 3,0 (tỉ lệ 8:92) (đệm pH 3,0 pha như sau: 0,43 g Natri octansulfonat + 1000 mL nước, chỉnh về pH 3,0 bằng acid phosphoric) có khả năng tách tốt nhất, pic của ACV không bị lẫn vào các pic tạp, tỉ lệ đáp ứng pic tại nồng độ LLOQ là 12,1% < 20% theo quy định. Giới hạn định lượng dưới của phương pháp là 0,1 µg/mL, thấp hơn các nghiên cứu trước là 0,5 µg/mL. Đảm bảo định lượng được các thời điểm đầu và cuối của quá trình lấy mẫu. Do đó, hệ này được chọn làm pha động trong phân tích các mẫu huyết tương.
Thẩm định phương pháp định lượng: các chỉ tiêu của phương pháp định lượng ACV trong huyết tương chó đã được thẩm định theo qui định của FDA và hướng dẫn của ASEAN bao gồm các chỉ tiêu tính chọn lọc, đặc hiệu; giới hạn định lượng dưới; xác định khoảng tuyến tính, xây dựng đường chuẩn trong huyết tương chó và
hàm đáp ứng; xác định độ đúng, chính xác; phần trăm tìm lại của phương pháp và độ ổn định.