K t qu ki m tra các ch ng virus tái t h p v hi u su t nhân gi ng qua các thế ả ể ủ ổ ợ ề ệ ấ ố ế h nhân trong tr ng, tính n đ nh di truy n và ệ ứ ổ ị ề kh năng thích ng nhân lên trong t bàoả ứ ế MDCK đ u ch ra lu n án đã tái t o và sàng l c đề ỉ ậ ạ ọ ược các ch ng virus đáp ng yêu c uủ ứ ầ c a ch ng virus ng viên vaccine phòng ch ng b nh cúm A/H5N1 cho gia c m.ủ ủ ứ ố ệ ầ
3.7. S n xu t vaccine cúm A/H5N1 cho gia c m qui mô phòng thí nghi m và xácả ấ ầ ở ệ đ nh kh năng kích thích sinh đáp ng mi n d ch c a vaccineị ả ứ ễ ị ủ
Hai lo i ch ph m vaccine đạ ế ẩ ượ ảc s n xu t t hai ch ng virus rgA/H5N1 clade 1.1ấ ừ ủ và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1 có màu tr ng đ c, đ ng nh t, không phân l p. ắ ụ ồ ấ ớ
K t qu ki m tra các ch tiêu (hi u giá HA, hi u giá virus c a d ch ni u tr ngế ả ể ỉ ệ ệ ủ ị ệ ứ ch a virus tái t h p trứ ổ ợ ước khi vô ho t và sau khi vô ho t, tính vô trùng đ i v i vi khu nạ ạ ố ớ ẩ hi u khí và k khí, n m men, n m m c) c a hai ch ph m vaccine rgA/H5N1 clade 1.1ế ỵ ấ ấ ố ủ ế ẩ và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c trình bày B ng 3.6.ở ả
B ng 3.6. Ki m tra m t s ch tiêu c a kháng nguyên virus trong vaccine, tính vôả ể ộ ố ỉ ủ ho t và vô trùng c a ch ph m vaccine ạ ủ ế ẩ
N i dung ki m traộ ể Kháng nguyên virus rgA/H5N1 Clade 1.1 Clade 2.3.2.1c Hi u giá HAệ Trước vô ho tạ 1: 1024 1: 1024 Sau vô ho tạ Hi u giá virus ệ (EID50/ml) Trước vô ho tạ 108 108,6 Sau vô ho tạ
Vi khu n hi u khíẩ ế Trước vô ho tạ Sau vô ho tạ Vi khu n y m khíẩ ế Trước vô ho tạ Sau vô ho tạ N mấ Trước vô ho tạ Sau vô ho tạ N m menấ Trước vô ho tạ Sau vô ho tạ
S li u Hình 3.13 trình bày k t qu xác đ nh hi u giá HI c a t ng cá th gà trongố ệ ở ế ả ị ệ ủ ừ ể
các công th c tiêm phòng vaccine s n xu t t virus rgA/H5N1 clade 1.1 và rgA/H5N1ứ ả ấ ừ
Hình 3.13. Hi u giá kháng th (HI logệ ể 2) c a các lô gà tiêm vaccine rgA/H5N1 clade 1.1ủ và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c sau 2 và 4 tu n tiêm phòng ầ
Gà 3 ngày tu i t t c các lô trong thí nghi m trổ ở ấ ả ệ ước tiêm phòng đ u không cóề mi n d ch (huy t thanh không ch a kháng th th đ ng) v i virus cúm A/H5N1, th hi nễ ị ế ứ ể ụ ộ ớ ể ệ
hi u giá kháng th trung bình hình h c (GMT Geometric mean titer)
ở ệ ể ọ < 1/2 log2. Sau 2
và 4 tu n tiêm phòng, hi u giá kháng th c a 100% cá th gà (20/20) các lô tiêm chầ ệ ể ủ ể ở ế
ph m vaccine rgA/H5N1 clade 1.1/ rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c (tiêm 1 li u ho c tiêm 2ẩ ề ặ
li u) và lô ch ng dề ứ ương đ u đ t HI ≥ 4 logề ạ 2, trong khi 20/20 gà lô ch ng âm không cóở ứ đáp ng t o kháng th v i HI <1/2 logứ ạ ể ớ 2. Theo qui đ nh c a C c Thú y, m t lo i vaccineị ủ ụ ộ ạ cúm gia c m đầ ược công nh n có kh năng b o h đàn gia c m n u có t l b o h sauậ ả ả ộ ầ ế ỷ ệ ả ộ tiêm phòng đ t ít nh t 70% s cá th ki m tra có hi u giá kháng th HI ≥ 4 logạ ấ ố ể ể ệ ể 2 (C c Thúụ y, 2009). Nh v y, có th kh ng đ nh hai ch ph m vaccine rgA/H5N1 clade 1.1 và rgư ậ ể ẳ ị ế ẩ
A/H5N1 clade 2.3.2.1c đã s n xu t đ u có kh năng b o h m c đ kích thích sinh đápả ấ ề ả ả ộ ở ứ ộ ng mi n d ch t o kháng th đ c hi u (hi u giá HI ≥ 4 log
ứ ễ ị ạ ể ặ ệ ệ 2) cho 100% gà 3 ngày tu iổ
tiêm phòng 1 li u ho c 2 li u vaccine (HAU 1: 1024) v i b nh do virus cúm HPAI H5N1ề ặ ề ớ ệ
clade 1.1 và HPAI H5N1 clade 2.3.2.1c (tương ng) gây nên. ứ
CHƯƠNG 4. BÀN LU N K T QUẬ Ế Ả
4.1. u đi m c a h th ng plasmid pHW2000 trong k thu t di truy n ngƯ ể ủ ệ ố ỹ ậ ề ượ ạc t o ch ng virus ng viên vaccine cúm A ủ ứ
Theo Engelhardt (2012), có nhi u phề ương pháp phát tri n vaccine cúm A, nh ng diể ư truy n ngề ược (RG Reverse Genetics) luôn đượ ưc u tiên l a ch n cho phát tri n nhanhự ọ ể ch ng virus ng viên vaccine b i nh ng u đi m: Trong th i gian ng n (3 6 tháng) cóủ ứ ở ữ ư ể ờ ắ th tái t o ch ng virus vaccine đ c l c th p b ng lo i b m t s amino acid ki m vể ạ ủ ộ ự ấ ằ ạ ỏ ộ ố ề ở ị trí c t c a protease trên gen HA, có hi u su t nhân gi ng cao (trong tr ng gà có phôi,ắ ủ ệ ấ ố ứ trong t bào). Trong s các k thu t RG cho tái t o virus cúm tái t h p, k thu t RG d aế ố ỹ ậ ạ ổ ợ ỹ ậ ự trên plasmid đượ ức ng d ng ph bi n h n c . Lu n án cũng l a ch n ng d ng k thu tụ ổ ế ơ ả ậ ự ọ ứ ụ ỹ ậ RG d a trên plasmid cho m c tiêu tái t o virus tái t h p l p ráp nhân t o, ph c v s nự ụ ạ ổ ợ ắ ạ ụ ụ ả xu t ch ng virus vaccine cúm A/H5N1 s d ng cho gia c m.ấ ủ ử ụ ầ
Căn c vào nh ng minh ch ng khoa h c kh ng đ nh hi u qu tái t o virus cúm Aứ ữ ứ ọ ẳ ị ệ ả ạ b ng RG c a h th ng g m 8 plasmid pHW2000 c a Hoffmann và đtg (2000), lu n án đãằ ủ ệ ố ồ ủ ậ
l a ch n h th ng plasmid pHW2000 cho tách dòng các phân đo n cDNA c a virus cúm.ự ọ ệ ố ạ ủ K t qu nh n đế ả ậ ược trong lu n án đã th hi n hi u qu chuy n nhi m cho tái t o h tậ ể ệ ệ ả ể ễ ạ ạ virus c a h th ng plasmid pHW2000 v i s l p ráp thành công 2 virus tái t h p rgủ ệ ố ớ ự ắ ổ ợ
A/H5N1 clade 1.1 và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c t h th ng g m 6 + 2 plasmid pHW2000ừ ệ ố ồ
đ n gen: 6 plasmid mang 6 phân đo n gen khung c a virus A/PR/8/34, k t h p v i 2ơ ạ ủ ế ợ ớ
plasmid mang 2 phân đo n gen kháng nguyên H5 HA và N1 NA c a virus HPAI H5N1ạ ủ
clade 1.1 và clade 2.3.2.1c đang l u hành. ư
4.2. Vai trò c a sáu phân đo n gen khung ngu n g c t virus A/PR/8/34 trong vi củ ạ ồ ố ừ ệ nâng cao hi u su t nhân gi ng c a ch ng virus ng viên vaccine cúm A ệ ấ ố ủ ủ ứ
Theo WHO (2018), virus tái t h p t o b ng k thu t di truy n ngổ ợ ạ ằ ỹ ậ ề ược ng viênứ cho s n xu t vaccine cúm s ng nhả ấ ố ược đ c và vaccine cúm vô ho t nên có đ c đi m diộ ạ ặ ể truy n v i 6 phân đo n gen khung (PB2, PB1, PA, NP, M và NS) ngu n g c t các ch ngề ớ ạ ồ ố ừ ủ cho (donor strain) đã được kh ng đ nh v hi u su t sinh s n trong tr ng và t bào. Cácẳ ị ề ệ ấ ả ứ ế virus cúm A thu c lo i virus cho có 6 phân đo n gen khung đ m b o ti m năng nhi mộ ạ ạ ả ả ề ễ sinh s n c a virus đả ủ ược WHO khuy n cáo s d ng g m: Virus A/Puerto Rico/8/34 [PR8],ế ử ụ ồ
virus A/Ann Arbor/6/60 và virus A/Leningrad/134/17/57. Trong s các virus cho, virus PR8ố
đượ ử ục s d ng ph bi n h n c trong nghiên c u s n xu t virus vaccine tái t h p. Đ nổ ế ơ ả ứ ả ấ ổ ợ ế nay, đã có nhi u công trình khoa h c kh ng đ nh tính u vi t c a b gen khung t virusề ọ ẳ ị ư ệ ủ ộ ừ PR8: Là y u t đ m b o hi u su t lây nhi m theo phế ố ả ả ệ ấ ễ ương th c nhi m sinh s n (highứ ễ ả
growth) c a virus tái t h p (Jung ủ ổ ợ et al., 2010; Verity et al., 2011; Engelhardt et al., 2012; Uchida et al., 2014).
Hi u qu c a b gen khung t virus PR8 trong lu n án th hi n k t qu xácệ ả ủ ộ ừ ậ ể ệ ở ế ả đ nh hi u giá HA và hi u giá virus c a các m u virus rgA/H5N1 clade 1.1 và rgA/H5N1ị ệ ệ ủ ẫ
clade 2.3.2.1c khi c y truy n vào tr ng và t bào MDCK: Có 4/9 m u virus rgA/H5N1ấ ề ứ ế ẫ
clade 1.1 và 7/9 m u virus rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c có hi u giá HA th h P0 khi c yẫ ệ ế ệ ấ truy n vào tr ng luôn đ t trên 1: 512, hi u giá virus (logề ứ ạ ệ 10 PFU/ml) đ t 7,91 9,16. Ti pạ ế t c sàng l c đ l a ch n ch ng virus có tính n đ nh di truy n và có hi u giá HA cao khiụ ọ ể ự ọ ủ ổ ị ề ệ c y truy n nhi u l n trong tr ng, lu n án đã l a ch n đấ ề ề ầ ứ ậ ự ọ ược 3 ch ng virus rgA/H5N1ủ clade 1.1 và 2 ch ng virus rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c có hi u giá HA luôn đ t trên 1: 1024ủ ệ ạ t t c các tr ng thu c các th h t P1 đ n P5, và tính n đ nh di truy n gen kháng
ở ấ ả ứ ộ ế ệ ừ ế ổ ị ề
nguyên HA và NA th hi n v i trình t nucleotide đ n th h P5 không thay đ i. ể ệ ớ ự ế ế ệ ổ
4.3. T ng h p nhân t o phân đo n gen HA mã hóa protein không ch a các aminoổ ợ ạ ạ ứ acid ki m đ c ề ộ
Trong qui trình t o ch ng virus vaccine cúm A/H5N1 b ng di truy n ngạ ủ ằ ề ược,
cDNA c a phân đo n gen H5 HA trong plasmid c n đủ ạ ầ ược x lý b ng lo i b các aminoử ằ ạ ỏ acid ki m v trí vùng đ c (WHO, 2018). Đ lo i b các amino acid ki m v trí vùngề ở ị ộ ể ạ ỏ ề ở ị đ c, có m t s phộ ộ ố ương pháp thường đượ ử ục s d ng: (i) PCR đ t bi n đi m đ nh hộ ế ể ị ướng s d ng enzyme gi i h n (sitedirected mutagenesis PCR using restriction enzyme); (ii)ử ụ ớ ạ đ t bi n s n ph m PCR s d ng m i b t c p trộ ế ả ẩ ử ụ ồ ắ ặ ở ước và sau vùng đ c (PCR mutagenesisộ using blunt end primers); (iii) sinh t ng h p gen nhân t o (artificial gene synthesis) có trìnhổ ợ ạ t nucleotide không ch a vùng đ c. ự ứ ộ
Trong s các phố ương pháp thường đượ ức ng d ng đ lo i b các amino acid ki mụ ể ạ ỏ ề
v trí vùng đ c, sinh t ng h p gen nhân t o còn đ c bi t đ n nh ph ng pháp DNA
ở ị ộ ổ ợ ạ ượ ế ế ư ươ
printing gen nhân t o đạ ược sinh t ng h p trong phòng thí nghi m v i kích thổ ợ ệ ớ ước không gi i h n và trình t chính xác mà không c n s i khuôn hay primer nh phớ ạ ự ầ ợ ư ương pháp PCR.
Hi n nay, phệ ương pháp sinh t ng h p gen nhân t o thổ ợ ạ ường được s d ng trong nghiênử ụ c u và s n xu t vaccine, và đ c bi t h u ích trong nghiên c u t o vaccine phòng ch ngứ ả ấ ặ ệ ữ ứ ạ ố vi sinh v t gây b nh b i nh ng u đi m: Trình t gen đậ ệ ở ữ ư ể ự ượ ổc t ng h p nhanh, chính xác vàợ an toàn.
Khai thác thu n l i c a vi c thi t k gen HA là hai trình t gen H5 HA c a haiậ ợ ủ ệ ế ế ự ủ clade virus A/H5N1 clade 1.1 và 2.3.2.1c, đã và đang l u hành Vi t Nam đã đư ở ệ ược xác đ nh và công b trên ngân hàng NCBI, lu n án đã thi t k hai gen H5 HA không ch aị ố ậ ế ế ứ vùng đ c và tránh l i đ c d a trên các trình t đã công b , sau đó đ t sinh t ng h p genộ ạ ộ ự ự ố ặ ổ ợ nhân t o. Vi c s d ng phạ ệ ử ụ ương pháp sinh t ng h p gen nhân t o đã giúp rút ng n th iổ ợ ạ ắ ờ gian và ti t ki m kinh phí th c hi n so v i các phế ệ ự ệ ớ ương pháp truy n th ng khi không ph iề ố ả th c hi n nhi u thao tác và công đo n nh : Thu th p m u virus, tách chi t vRNA, sinhự ệ ề ạ ư ậ ẫ ế
t ng h p cDNA t vRNA b ng phổ ợ ừ ằ ương pháp RTPCR, tách dòng s n ph m RTPCR vàoả ẩ
plasmid, bi n n p plasmid mang gen HA vào ế ạ E. coli, khu ch đ i plasmid tái t h p, táchế ạ ổ ợ chi t và tinh s ch plasmid, th c hi n k thu t PCR gây đ t bi n đi m đ nh hế ạ ự ệ ỹ ậ ộ ế ể ị ướng trên gen HA.
4.4. nh hẢ ưởng c a lo i t bào bi n n p đ n s tái t o virus cúm tái t h p rgủ ạ ế ế ạ ế ự ạ ổ ợ
A/H5N1 clade 1.1 và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c
Các công b khoa h c v ng d ng di truy n ngố ọ ề ứ ụ ề ược đ chuy n nhi m các cDNAể ể ễ c a virus cúm A vào t bào ch y u s d ng 3 công th c t bào: (i) Chuy n nhi m vàoủ ế ủ ế ử ụ ứ ế ể ễ đĩa/gi ng nuôi c y t bào 293T (m t đ 0,2 1 x 10ế ấ ế ậ ộ 6 t bào) (Jung ế et al., 2010; Milian et al. 2017); (ii) chuy n nhi m vào đĩa/gi ng đ ng nuôi c y 2 lo i t bào 293T và MDCKể ễ ế ồ ấ ạ ế theo t l 1 : 1 v i t ng s lỷ ệ ớ ổ ố ượng hai lo i t bào trong môi trạ ế ường nuôi c y đ t 0,2 1 xấ ạ 106 t bào (MartínezSobrido & GarcíaSastre, 2010; Verity ế et al., 2011); (iii) chuy n nhi mể ễ vào t bào Vero (Nicolson ế et al., 2005; Neumann et al., 2005, Song et al., 2013).
D a trên kinh nghi m nghiên c u nhi u năm v vi c l a ch n lo i t bào bi nự ệ ứ ề ề ệ ự ọ ạ ế ế n p phù h p, nhóm nghiên c u c a Hoffmann và Webster (B nh vi n St Jude, M ) đã t iạ ợ ứ ủ ệ ệ ỹ ố u quá trình chuy n nhi m h th ng plasmid đ n gen vào t bào đ ng v t và đã xác đ nh
ư ể ễ ệ ố ơ ế ộ ậ ị
được lo i t bào thích h p nh t cho chuy n nhi m plasmid cho tái t o virus tái t h p làạ ế ợ ấ ể ễ ạ ổ ợ ch s d ng dòng t bào 293T. Do v y, lu n án l a ch n công th c t bào cho chuy nỉ ử ụ ế ậ ậ ự ọ ứ ế ể nhi m là s d ng dòng t bào 293T nuôi c y trong các đĩa 6 gi ng (m t đ 0,5 x 10ễ ử ụ ế ấ ế ậ ộ 6
PFU/đĩa).
K t qu nghiên c u trong thí nghi m chuy n nhi m các plasmid mang các phânế ả ứ ệ ể ễ đo n cDNA vào t bào 293T là m t minh ch ng kh ng đ nh t bào 293T khi có v i m tạ ế ộ ứ ẳ ị ế ớ ậ đ cao trong môi trộ ường chuy n nhi m đã cho hi u qu tái t o h t virus di truy n ngể ễ ệ ả ạ ạ ề ược cao sau 48h bi n n p: 100% m u d ch virus thu nh n trong các gi ng bi n n p sau khiế ạ ẫ ị ậ ế ế ạ tách chi t RNA t ng s và th c hi n ph n ng RTPCR nhân gen HA đ u cho k t quế ổ ố ự ệ ả ứ ề ế ả dương tính v i ph n ng RTPCR. ớ ả ứ
4.5. Kh năng thích ng nhân lên c a virus ả ứ ủ rgA/H5N1 clade 1.1 và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c trong tr ng và tính n đ nh di truy n gen kháng nguyên c a virusứ ổ ị ề ủ
Hi n nay, trên th gi i, công ngh s n xu t vaccine cúm A/H5N1 cho gia c m chệ ế ớ ệ ả ấ ầ ủ y u s d ng phế ử ụ ương pháp nhân gi ng virus trên tr ng gà s ch có phôi b i nh ng uố ứ ạ ở ữ ư đi m: D th c hi n, hi u su t nhân gi ng virus cao, giá thành r , không đòi h i k thu tể ễ ự ệ ệ ấ ố ẻ ỏ ỹ ậ ph c t p... Do v y, tiêu chí đ đánh giá tính phù h p c a ch ng virus ng viên vaccine:ứ ạ ậ ể ợ ủ ủ ứ Là ch ng đ c l c th p (LPAI), n đ nh v di truy n và có hi u su t nhân gi ng cao trongủ ộ ự ấ ổ ị ề ề ệ ấ ố tr ng. ứ
A/H5N1 clade 2.3.2.1c có đ c l c th p, có kh năng thích ng nhân lên và n đ nh v diộ ự ấ ả ứ ổ ị ề truy n gen kháng nguyên khi c y truy n nhi u l n trong tr ng, th hi n đ c đi m: Cóề ấ ề ề ầ ứ ể ệ ở ặ ể hi u giá HA c a các th h virus t P2 P5 đ t ệ ủ ế ệ ừ ạ ≥ 1: 1024, tính n đ nh di truy n th hi nổ ị ề ể ệ
protein kháng nguyên đ c mã hóa b i trình t nucleotide c a gen HA và NA đ n th
ở ượ ở ự ủ ế ế
h P5 không b bi n đ i. ệ ị ế ổ
4.6. Kh năng kích thích sinh đáp ng mi n d ch c a virus rgA/H5N1 clade 1.1 vàả ứ ễ ị ủ rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c gia c mở ầ
Vaccine cúm A/H5N1 vô ho t nhũ d u thu c lo i vaccine an toàn (kháng nguyênạ ầ ộ ạ
vô ho t) nên có th tiêm phòng cho gà các l a tu i khác nhau: 1 3 ngày tu i (Jang ạ ể ở ứ ổ ổ et al.,, 2018), 2 tu n tu i và 3 tu n tu i (Uchida ầ ổ ầ ổ et al., 2014). Trong lu n án, gà th t 3 ngàyậ ị tu i đổ ượ ực l a ch n cho xác đ nh kh năng kích thích sinh đáp ng mi n d ch c a virus rgọ ị ả ứ ễ ị ủ
A/H5N1 clade 1.1 và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c.
K t qu ki m tra tính an toàn c a vaccine s n xu t t ch ng virus ng viên ế ả ể ủ ả ấ ừ ủ ứ rg
A/H5N1 clade 1.1 và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c cho th y: ấ Vaccine đ m b o tính an toàn ả ả
100% gà tiêm 2 li u vaccine ( t t c các lô thí nghi m) đ u s ng sau 4 tu n tiêm phòngề ở ấ ả ệ ề ố ầ và không bi u hi n tr ng thái viêm/s ng vùng da c , không bi u hi n tình tr ng b nhể ệ ạ ư ở ổ ể ệ ạ ệ lý cúm gia c m, tr ng lầ ọ ượng c th không khác bi t so v i công th c đ i ch ng. ơ ể ệ ớ ứ ố ứ
Hi u qu kích thích sinh đáp ng mi n d ch c a vaccine th hi n k t qu : Gàệ ả ứ ễ ị ủ ể ệ ở ế ả s ch 3 ngày tu i ch c n ạ ổ ỉ ầ tiêm 1 li u 0,5 ml vaccine rgA/H5N1 clade 1.1/ rgA/H5N1 cladeề 2.3.2.1c đã đ t hi u qu b o h cao v i 20/20 (100%) gà có hi u giá kháng th HI ≥ 4ạ ệ ả ả ộ ớ ệ ể log2 tu n 2 và tu n 4 sau tiêm phòng.ở ầ ầ
Các k t qu nh n đế ả ậ ược ch ng minh lu n án đã làm ch công ngh di truy nứ ậ ủ ệ ề ngược đ l p ráp nhân t o thành công hai virus tái t h p rgA/H5N1 clade 1.1 và rgể ắ ạ ổ ợ
A/H5N1 clade 2.3.2.1c t h th ng 6 + 2 plasmid đ n gen. S n ph m khoa h c c a lu nừ ệ ố ơ ả ẩ ọ ủ ậ án g m: (i) Qui trình tái t o ch ng plasmid tái t h p t h th ng plasmid đ n gen đãồ ạ ủ ổ ợ ừ ệ ố ơ đượ ố ưc t i u; (ii) 6 plasmid pHW2000 mang 6 phân đo n cDNA mã hóa các protein khungạ c a virus PR8 đã đủ ược chu n b s n sàng cho s ph i h p v i 2 plasmid mang gen khángẩ ị ẵ ự ố ợ ớ nguyên c a subtype virus cúm A (đang l u hành hay s xu t hi n) đ tái t o ch ng virusủ ư ẽ ấ ệ ể ạ ủ ng viên vaccine; (iii) các ch ng virus rgA/H5N1 clade 1.1 và rgA/H5N1 clade 2.3.2.1c
ứ ủ
đáp ng tiêu chí c a ch ng ng viên vaccine (có kh năng thích ng nhân lên trong tr ngứ ủ ủ ứ ả ứ ứ v i hi u su t nhân gi ng cao, có tính n đ nh di truy n gen kháng nguyên và có kh năngớ ệ ấ ố ổ ị ề ả kích thích sinh đáp ng mi n d ch t o kháng th đ c hi u đ t hi u qu b o h cao gàứ ễ ị ạ ể ặ ệ ạ ệ ả ả ộ ở thí nghi m). ệ