- Thí nghiệm được thực hiện với 1 hay 2 nồng độ pha loãng cuối cùng Mỗi nồng độ được làm 2 3 đĩa thử để lấy giá trị trung bình Sau thời gian
Chủng chỉ thị là chủng vi sinh vật thuần khiết, nhạy cảm đối với một chất kháng sinh, chủng chỉ thị thường được phân lập từ các
một chất kháng sinh, chủng chỉ thị thường được phân lập từ các bảo tàng giống Quốc gia, được bảo quản trong ống đông khô hoặc trong môi trường thích hợp ở 4 - 10oC. Tuỳ theo dược điển của mỗi nước, mỗi chất kháng sinh có thể có một vài chủng chỉ thị khác nhau.
Chất chuẩn:
Chất chuẩn là những chất có độ tinh khiết cao, có thể dùng chất chuẩn gốc hoặc chất chuẩn thứ cấp có hoạt lực được xác định theo mẫu chuẩn quốc tế tương ứng. Chất chuẩn được đóng trong ống thủy tinh hàn kín bảo quản khô, tránh ánh sáng, dưới 0oC.
Đơn vị hoạt lực:
Hoạt lực của một chất kháng sinh được tính bằng đơn vị hoạt lực quốc tế (viết tắt là U hoặc UI, IU).
Một đơn vị hoạt lực là hoạt lực đặc trưng của một lượng nhất định chất kháng sinh chuẩn sinh học quốc tế hoặc chế phẩm đối chiếu sinh học với chuẩn quốc tế. Ví dụ 1U gentamicin là hoạt lực của 0,0056mg gentamicin.
Đơn vị hoạt lực của các chất kháng sinh được xác định bởi các viện nghiên cứu lớn của tổ chức y tế thế giới về chất chuẩn sinh học.
Hoạt lực của các chất kháng sinh có thể được thể hiện bằng mcg hoạt lực. Đối với chất kháng sinh hoàn toàn tinh khiết, trong đa số các trường hợp mcg hoạt lực tương đương với mcg khối lượng của chất kháng sinh. Khi chất kháng sinh chưa hoàn toàn tinh khiết, hoặc là hỗn hợp của nhiều thành phần tương tự nhau về hoá học nhưng khác nhau về hoạt tính sinh học thì mcg hoạt lực
Môi trường và dung môi
Tùy theo chất kháng sinh và vi sinh vật chỉ thị để chọn các môi trường thích hợp cho thí nghiệm.
Dung môi và các chất pha loãng không được ảnh hưởng đến sự phát triển
của vi sinh vật. Các chất pha loãng như: nước cất, dung dịch HCl, ethanol,
methanol, dung dịch đệm có pH khác nhau… được sử dụng tuỳ thuộc vào độ tan của các chất kháng sinh. Các vấn đề này cần tham khảo dược điển.
Định lượng chất kháng sinh bằng phương pháp khuếch tán
Có hai phương pháp vi sinh vật để định lượng chất kháng sinh là:
Phương pháp đo độ đục: (Turbidimetric method)
Phương pháp khuyếch tán: (Diffusion method)
Phương pháp khuyếch tán thường được sử dụng nhiều trong định lượng kháng sinh.