Các dòng vi khuẩn TGT013L, BTT006L, TGH006L, VLH013L và TGT025L được nhân sinh khối trong môi trường có hàm lượng thấp phosphat và hàm lượng acetat cao (môi trường nhân sinh khối có hàm lượng KH2PO4 17,55 mg/l, tương đương lượng phospho khoảng 4 mg/l). Mục đích là để vi khuẩn phân giải poly-P nội bào cung cấp nguồn phospho cần thiết cho chúng phát triển trong quá trình tăng sinh (Lin-lin et al., 2007). Thông qua quá trình này sẽ làm cho vi khuẩn cạn kiệt về hàm lượng poly-P nội bào và
khi được chuyển sang môi trường có hàm lượng phosphat hòa tan cao, sẽ kích thích chúng dễ dàng hấp thu phosphat trở lại. Các chủng vi khuẩn được nhặt từ ống trữ vi khuẩn trong tủ lạnh (10oC) và nuôi trong ống nghiệm 12 ml chứa 7 ml môi trường, ủ 30oC trong 24 giờ trên máy lắc 120 vòng/phút. Sau 24 giờ nuôi cấy, dịch huyền phù vi khuẩn có đạt chỉ số OD.600 nm: 0,6 được ly tâm (10000 vòng/phút, 15oC, 5 phút) thu sinh khối. Thí nghiệm được bố trí thành 5 nghiệm thức, 3 lần lặp lại (15 đơn vị thí nghiệm). Các đơn vị thí nghiệm được bố trí trong chai erlen 250 ml chứa 150 ml môi trường nuôi vi khuẩn kiểm tra hiệu suất loại bỏ phosphat đã vô trùng (Filipe et al., 2001). Dịch huyền phù (3 ml) từng dòng vi khuẩn được ly tâm thu sinh khối, sau đó chủng vào các đơn vị thí nghiệm trong điều kiện vô trùng. Các đơn vị thí nghiệm được bố trí trên máy lắc [máy lắc GFL 3005, (Đức); 120 vòng/phút, 300C]. Định kỳ 5 giờ lấy mẫu để kiểm tra các chỉ số pH, OD.600 nm và hàm lượng PO43-. Mẫu được lấy trong tủ cấy vô trùng, thể tích mẫu 4 ml/lần lấy.