Mẫu tôm đã được kiểm tra và xác định dương tính với MBV được sử dụng để xây dựng quy trình PCR phát hiện vi-rút. Áp dụng quy trình ly trích đã nghiên cứu và quy trình PCR của Win và ctv (2005) để phát hiện MBV với cặp mồi 261F và 261R và DNA của mẫu tôm này được sử dụng làm đối chứng dương.
Hình 4.2 Kiểm tra quy trình PCR với mẫu tôm dương tính MBV theo quy trình ly trích DNA đã được cải tiến.
Giếng 1 thang DNA 1000 bp, giếng 2 mẫu tôm bệnh, giếng 3 đối chứng âm. Điện di với gel agarose 1,5% dưới hiệu điện thế 80 V trong 30 phút.
Kết quả phản ứng PCR với mẫu tôm bệnh cho thấy cặp mồi và chu trình nhiệt mà Win thiết kế có khả năng phát hiện được MBV gây bệnh trên tôm sú tại Việt Nam. Kích thước sản phẩm được khuếch đại bởi cặp mồi 261F và 261R ở khoảng 261 bp phù hợp với kích thước sản phẩm PCR trong nghiên cứu của Win . Điều này cho thấy cặp mồi đang sử dụng gắn đặc hiệu với DNA của vi-rút MBV được ly trích từ mẫu tôm bệnh tại Việt Nam, do vậy việc sử dụng cặp mồi 261F và 261R và chu trình nhiệt của Win trong chẩn đoán và phát hiện bệnh MBV bằng kỹ thuật PCR trên tôm sú tại Việt Nam là có tính khả thi. Mẫu DNA dương tính với MBV cũng được giải trình tựở công ty Nam Khoa và kết quả giải trình tự MBV sau khi được xử lý bằng phần mềm BioEdit và được BLAST trên NCBI có sự tương đồng cao (93%) so với công bố về trình tự gen của MBV có GenBank AY819785.2.
261 bp