3.2.1. Thành phần hóa học từ thân rễ và lá của loài Hoa tiên
Kết quả từ bảng 3.5 cho thấy bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS), từ loài Hoa tiên, 24 hợp chất được xác định. Thành phần hóa học chính của tinh dầu là safrol (63,20%), 4-axial –n-pronyl- trans -3 –oxabicyclo[4,4,0] decane (20,73%).
Bảng 3.5: Thành phần hóa học của tinh dầu từ thân rễ và lá loài Hoa tiên (Asarum glabrum Merr.)
STT Thành phần hóa học Thời gian lƣu Tỉ lệ (%)
1 -pinen 5,59 0,52
3 -pinen 6,65 0,54 4 -3-caren 7,54 0,10 5 cis -ocimen 8,32 0,50 6 trans -ocimen 8,63 0,41 7 linalool 10,28 2,63 8 borneol 12,43 0,35 9 safrol 16,59 63,20 10 methyl eugenol 18.70 1,06 11 - caryophyllen 20,62 0,21 12 - bergamoten 21,11 0,24 13 -fanesen 21,33 0,18 14 -humulen 21,68 0,10 15 γ -elemen 22,99 0,44 16 --fanesen 23,34 0,21
17 4-axial –n-pronyl- trans -3 –
oxabicyclo[4,4,0] decane 23,55 20,73 18 -sesquiphellandren 23,79 0.84 19 zingiberen 23,40 0,17 20 - cucurmen 24,69 0,11 21 neolidol 24,97 0,31 22 euasaron 25,30 0,37 23 Trans asaron 28,33 1,24 24 levomenol 28,41 2,99
3.2.2. Đa dạng về thành phần hóa học của tinh dầu loài Hoa tiên (Asarum glabrum Merr.) ở các vùng sinh thái khác nhau
Bảng 3.6: Thành phần hóa học của tinh dầu loài Hoa tiên (Asarum glabrum Merr.) ở các vùng sinh thái khác nhau
TT
Thành phần hóa học
Asarum glabrum Merr. (%)
Tam Đảo Ba Vì Hà Giang
1 α-pinene 0,25 0,31 0,70 2 camphene - 0,15 0,16 3 β-pinene 0,12 0,12 2,56 4 myrcen - 0,14 5 α-phelandren - 0,73 0,10 6 δ-3-caren 0,14 0,37 0,10 7 linanol - 0,17 0,55 8 citronenal - 0,15 9 limonen - 0,33 10 1,8 cineol - 0,27 11 Trans -β-ocimen - 0,69 12 Cis-ocimen - 0,88 13 4- terpineol 0,15 14 Borneol 0,12 0,18 15 α-terpineol 0,14 0,13 0,39 16 safrol - 42,24 17 Bornyl acetat 0,11 18 geraniol - 0,47 19 δ-elemene - 0,35 20 2-caren - 0,12 2,1 21 β-elemen 0,68 0,14 22 Methyl eugenol 0,71 0,88
23 Eugenol - 0,35 24 α-copaene - 0,17 25 Gurjumene - 0,12 26 β-Caryophyllen 0,65 27 α-trans-bergamolen 0,30 28 Trans panesene 0,74 29 α -cadinen 0,21 30 β-farnesene - 0,18 31 α –aminomethylen glutaconic anhydric - 13,70 - 32 γ -curcumen 0,18 1,30 33 Germacren D 0,23 34 β- selinene 0,16 1,22 35 Myristicine 96,04 1,61 8,27 36 elemol - 0,16 37 elemicine 1,72 1,29 38 Cis asarone - 2,49 39 α -cedrol 0,11 40 Trans asarol 0,55 41 nerolidol - 0,16 42 Euassarone 0,41 2,34 43 Thurjosene 0,30 44 spathunenol - 0,27 45 Patchouli alcohol - 0,15 0,16 46 asarone - 0,37 47 apiole - 73,73 27,11 total 98,70 96,40 92,65
Như vậy, 10 hợp chất trong tinh dầu loài Hoa tiên thu tại Tam Đảo đã được xác định, trong đó thành phần chính của tinh dầu là hợp chất Myristicine (96,04%).
30 hợp chất trong tinh dầu loài Hoa tiên thu tại Ba Vì đã được xác định, trong đó thành phần chính của tinh dầu là hợp chất apiole (73,73%). Hợp chất có tỉ lệ nhỏ là bornyl acetat (0,11%).
30 hợp chất trong tinh dầu loài Hoa tiên thu tại Hà Giang đã được xác định, Thành phần hóa học chính của tinh dầu là safrol (42,24%), apiole (27,11%), myristicine (8,27%). Các hợp chất khác có tỷ lệ nhỏ là α-phelandren (0,10%) và δ- 3-caren (0,10%).
Như vậy có sự đa dạng về thành phần hóa học của tinh dầu loài Hoa tiên ở các vùng sinh thái khác nhau. Có thể vấn đề về khí hậu, địa hình và thời vụ thu hoạch có thể liên quan đến những vấn đề sai khác nói trên.
3.3. Thử nghiệm kháng vi sinh vật kiểm định
Những kết quả về hoạt tính sinh học từ tinh dầu của loài Hoa tiên (bảng 3.7) cho thấy, tinh dầu Hoa tiên có hoạt tính kháng yếu với vi khuẩn Gr (+) ở nồng độ 200 g/ml. Còn đối với các chủng vi sinh vật khác thì không có tác dụng.
Bảng 3.7: Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định từ tinh dầu của loài Hoa tiên
Ký hiệu
mẫu
Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC: g/ml)
Vi khuẩn Gr (-) Vi khuẩn Gr (+) Nấm mốc Nấm men E. coli P. aeruginosa B. subtillis S. aureus A. niger F. oxysporum S. cerevisiae C. albicans A. glabrum (-) (-) 200 (-) (-) (-) (-) (-)
3.4. Nghiên cứu về thực trạng quần thể và đề xuất giải pháp bảo tồn
3.4.1. Quy trình nhân giống bằng hom của các loài Hoa tiên (Assarum glabrum Merr.) Merr.)
- Chuẩn bị hom giống:
+ Cắt lấy các cành bánh tẻ (là các cành không quá già và không quá non). + Vị trí cắt nằm ở giữa 2 đốt của cành, độ dài của hom khoảng 10-15 cm, cắt bớt lá trên hom (thường chỉ giữ lại 2 hoặc 3 lá), cành hom phải mập, khỏe, không sâu bệnh.
- Chuẩn bị đất ươm.
- Thời gian cắt hom tốt nhất là vào buổi sáng, mùa cắt hom thường là tháng 11 - 12 hàng năm. Sau khi cắt để cành vào túi nilon buộc lại ngay để tránh mất nước.
- Xử lý hom: Ngâm các hom trong dung dịch thuốc chống nấm (benlat nồng độ 200 mg/1 lít nước) khoảng 15-20 phút.
- Tỷ lệ sống bằng cành hom ở các lô thí nghiệm tại Tam Đảo, Bát Đại Sơn đạt khoảng 65%.
- Vấn đề quan trọng là thời vụ nhân giống. Nếu nhân giống vào mùa xuân tỷ lệ sống của hom sẽ cao, nếu nhân giống muộn hơn thì tỷ lệ sống của hom chỉ đạt khoảng 40–50% mà thôi.
3.4.2. Thử nghiệm nhân giống bằng hạt của các loài Hoa tiên
Xử lý hạt giống:
- Quả sau khi thu hái về cần phải đem ra phơi ở nơi khô ráo trong bóng râm, tránh phơi ở nơi quá nắng.
- Tách hạt ra khỏi quả phải đảm bảo hạt không bị xây xát, dập nát. Loại bỏ những hạt nép, mảnh vỏ quả, mảnh hạt vỡ, xác sâu bọ, … mục đích của việc làm sạch hạt là để nâng cao độ tinh khiết (độ sạch) của hạt, loại trừ mầm mống sâu bệnh, nấm mốc thường ký sinh trên tạp vật.
Gieo ươm hạt trên luống ươm có giá thể là cát mịn đã được vô trùng
- Trộn các hạt giống vào cát mịn để gieo lên luống ươm, sau khi gieo hạt thì lấy cát mịn phủ lên trên bề mặt hạt một lớp mỏng.
- Tưới nước bằng vòi phun dạng sương. Phủ nilon lên luống ươm để giữ độ ẩm cho hạt.
Chú ý sau khi gieo hạt vào luống ươm cần phải tưới nước 2 lần/một ngày, tưới nước dạng phun sương, sau khi tưới xong phải đậy nilon lại.
Kết quả tỷ lệ hạt nảy mầm:
Sau khi gieo hạt khoảng 10 ngày thì hạt bắt đầu có hiện tượng nứt nanh. Tuy nhiên chưa thấy sự nảy mầm thành cây non. Vấn đề nhân giống bằng hạt còn phải tiếp tục nghiên cứu.
3.4.3. Bảo tồn nguyên vị
Bảo tồn nguyên vị là duy trì các loài cây động vật, thực vật trong điều kiện tự nhiên xuất hiện tiến hóa của loài đó, hay nói cách khác là bảo vệ trong tự nhiên hoang dại của chúng.
Để bảo tồn nguyên vị các loài thực vật người ta thường thành lập các VQG, khu BTTN. Đây là việc làm khó và phức tạp, nhất là xử lý mối quan hệ đã trở thành truyền thống của người dân địa phương với các sản phẩm từ rừng đã góp phần nuôi sống họ. Song đây là hình thức bảo tồn toàn diện nhất bởi các loài thực vật có giá trị ở đó sẽ được tồn tại vĩnh viễn, trong mối quan hệ tổng hòa với hệ sinh thái tự nhiên của chúng. Đối với loài Hoa tiên do việc khai thác sử dụng và buôn bán sang Trung Quốc làm thuốc của người dân địa phương làm cho số lượng cá thể của loài bị suy giảm nhanh chóng. Độ bắt gặp trong điều kiện tự nhiên không cao. Việc bảo tồn tại chỗ loài Hoa tiên tại khu vực phụ cận Bát Đại Sơn, VQG Tam Đảo và VQG Ba Vì là rất cần thiết.
3.4.4. Bảo tồn chuyển vị
Bảo tồn chuyển vị là đưa nguồn gen ra khỏi điều kiện tự nhiên sinh sống của chúng hoặc ra khỏi hệ thống sản xuất đến lưu giữ tại các trung tâm với các điều kiện và kĩ thuật bảo đảm sức sống của nguồn gen lâu dài, giữ nguyên được biến dị, di truyền hiện có của nguồn gen phục vụ sử dụng cho nghiên cứu và tái tạo quần thể nguồn gen.
Bảo tồn chuyển vị thường bằng phương thức trồng trong các vườn thực vật hay các vườn cây thuốc: Thu thập một số cá thể hay hạt giống của một hay nhiều loài cây thuốc cần bảo vệ về trồng tại vườn thực vật hay vườn cây thuốc. Tùy theo đặc điểm sinh thái của loài mà lựa chọn vùng trồng thế nào cho phù hợp.
Vấn đề quan trọng nhất trong việc bảo tồn cây thuốc ở vườn là cố gắng tạo cho cây thuốc có được môi trường sống thích hợp gắn liền với điều kiện sống tự nhiên của chúng. Bảo tồn cây thuốc bị đe dọa trong vườn thực vật có các ưu điểm là cùng một địa điểm có thể lưu giữ một hay nhiều loài, có điều kiện theo dõi nghiên cứu về sinh trưởng, phát triển và nhân giống để trồng thêm. Tuy nhiên đây cũng là hình thức sống không phải tự nhiên của chúng, có thể thay đổi về nguồn gen hoặc hàm lượng hoạt chất được sử dụng làm thuốc.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
Kết luận: Qua quá trình nghiên cứu, bước đầu chúng tôi rút ra một số kết luận như sau:
- Đã xác định được một số đặc điểm hình thái của quả, hạt, hoa cũng như đặc điểm sinh học của loài Hoa tiên.
- Đã xác định một số đặc điểm về sinh thái, nơi phân bố, chất lượng đất, lượng mưa, nhiệt độ và một số loài thực vật mọc cùng với loài Hoa tiên.
- Bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS), từ loài Hoa tiên (Asarum glabrum Merr.), 24 hợp chất đã được xác định. Thành phần hóa học chính của tinh dầu là safrol (63,20%), 4-axial –n-pronyl- trans -3 –oxabicyclo[4,4,0] decane (20,73%).
Có sự biến động về thành phần hóa học của tinh dầu ở một số vùng sinh thái khác nhau: Myristicine (96,04%) là thành phần chính của tinh dầu Hoa tiên ở Tam Đảo; hợp chất apiole (73,73%) là thành phần chính của tinh dầu Hoa tiên ở Ba Vì và safrol (42,24%), apiole (27,11%), myristicine (8,27%) là thành phần chính của tinh dầu Hoa tiên thu tại Hà Giang.
- Kết quả bước đầu cho thấy tinh dầu từ loài Hoa tiên có hoạt tính kháng vi khuẩn Gr (+) với nồng độ 200 g/ml.
- Đã đề xuất giải pháp bảo tồn Hoa tiên bằng phương pháp nguyên vị và chuyển vị.
Đề nghị
- Tiếp tục nghiên cứu sinh sản hữu tính của loài Hoa tiên nói trên làm cơ sở cho việc bảo tồn bền vững chúng.
TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT
1. Nguyễn Tiến Bân (2003), “Asarum – L.”, Danh lục các loài thực vật Việt Nam, 2, tr. 125-126, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội.
2. Bộ khoa học và Công nghệ, Viện Khoa học và công nghệ Việt Nam (2007),
Sách Đỏ Việt Nam, Phần 2. Thực vật, tr. 94-86, Nxb KHTN & CN, Hà Nội. 3. Võ Văn Chi (2002), Từ điển thực vật thông dụng, 1, Nxb KH & KT, Hà Nội. 4. Phạm Hoàng Hộ (1999), “Asarum glabrum”, Cây cỏ Việt Nam, 1, tr. 305 – 306,
Nxb Trẻ, Tp Hồ Chí Minh.
5. Quĩ quốc tế về bảo vệ tự nhiên WWF (2003), Sổ tay hướng dẫn điều tra và giám sát đa dạng sinh học, Nxb. Giao thông vận tải, Hà Nội.
6. Nguyễn Tập (2007), Cẩm nang cây thuốc cần bảo vệ ở Việt Nam,Mạng lưới lâm sản ngoài gỗ Viêt Nam, Công ty thiết kế và in công nghệ cao.
7. Trần Đức Khoản (1999), Dự án khu bảo tồn thiên nhiên Bát Đại Sơn huyện Quản Bạ tỉnh Hà Giang, tr. 1-22, Viện điều tra quy hoạch rừng.
8. Trần Huy Thái, Nguyễn Thị Hiền, Đỗ Thị Minh, Nguyễn Anh Tuấn (2010), “Thành phần hóa học của tinh dầu Hoa tiên (Asarum glabrum Merr.) ở Hà Giang, Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, 32(1), tr. 94-96, Viện Khoa học và công nghệ Việt Nam.
9. Viện Địa lý (1999), Một số đặc điểm của hệ thực vật Việt Nam, Nxb KH & KT, Hà Nội.
10. Richard B. Primack (1999), Cơ sở sinh học bảo tồn, Nxb KH & KT, Hà Nội.
TIẾNG TRUNG
11. Zhang SX, Tani T, Yamaji, Ma CM, Wang MC, zhao YY (2003), Glycosyl flavonoid from the roots and rhiromes of Asarum longerhizomatosum, Peking University, Beijing 100083, China.
TIẾNG NHẬT
12.Tsukasa Iwashina, Junichi Kitajima (2000), Chacone and flavon glucosides from
Asarum canadense. Tsukuba botanical garden, National science museum, Japan.
TÀI LIỆU TRÊN INTERNET
13. http://vi.wikipedia.org (2009) (Để tìm hiểu chi Tế tân (Asarum L.)).
14. http://vuonquocgiabavi.com.vn/?p=6&id=107&.html (Để tìm hiểu điều kiện tự nhiên của vườn quốc gia Ba Vì).
15. http://www.tamdaonp.com.vn/index.php/dieu-kien-tu-nhien.html (Để tìm hiểu điều kiện tự nhiên của vườn quốc gia Tam Đảo).