quanh vùng rễ lúa sau khi chủng vào hạt lúa của hai dòng vi khuẩn B. megaterium – TV2B7 và S. maltophilia – AM3
Chuẩn bị dịch vi khuẩn: Nuôi tăng sinh hai dòng vi khuẩn trong bình tam giác với 75ml môi trường Burk’s lỏng. Ủ lắc cho vi khuẩn phát triển trong 3 ngày và chuẩn
về mật số 107CFU/ml. Dịch vi khuẩn này được sử dụng để chủng hạt lúa. Chuẩn bị mạ non:
Hạt lúa OM 9921 (đã được bóc vỏ) được lắc đều trong Javel + vài giọt Tween
20 trong 20 phút, sau đó rửa sạch hạt bằng nước cất vô trùng 3-5 lần để loại bỏ Javen.
Đặt hạt lúa vào đĩa petri có chứa agar nước 0,8%, ủ trong tối trong 3 ngày ở 32ºC để hạt nảy mầm.
Chuyển các hạt lúa đã nảy mầm vào dịch vi khuẩn đã chuẩn bị, ngâm trong 2
giờ. Mẫu đối chứng chỉ xử lý với nước cất khử trùng.
Cấy lúa vào các chai thủy tinh có chứa agar làm giá thể (agar + nước cất khử
trùng); mỗi chai thủy tinh cấy 9 cây lúa. Mỗi dòng vi khuẩn có 3 chai và 3 chai đối
chứng.
Sau 3 ngày, lấy 2 cây lúa của mỗi chai thủy tinh để xử lý (ngâm lúa trong cồn
700 trong 30 giây, sau đó đổ bỏ, cho nước Javel 50% + vài giọt Tween 20 ngâm 10
phút, rửa lại với nước cất đã khử trùng 2-3 lần). Sau khi đã xử lý lấy 100µl nước của 1
mẫu ngẫu nhiên để cấy trải trên môi trường Burk’s không đạm. Tiếp theo, dùng kéo đã
khử trùng cắt mẫu thành những đoạn ngắn cho vào eppendorf 2ml, nghiền bằng đũa
thủy tinh đã khử trùng với 1000 µl nước cất đã khử trùng. Hút 100µl dịch mẫu đã để
lắng cho vào đĩa petri chứa môi trường Burk’s không đạm và tiến hành cấy trải mẫu.Ở
hút 100 µl dịch mẫu đã để lắng cấy trải trên môi trường Burk’s không đạm. Quan sát
và ghi nhận kết quả khuẩn lạc sau 3 ngày.
Thực hiện tương tự với mẫu lúa sau 5 ngày và 7 ngày.