Theo một số kết quả đã công bố của chuyên gia Việt Nam, trong thành
phẩn cụ ĩlglĩậ vàng cố hỗn hợp chất mầu 3,5-4% vầ CurcLimin tỉnh khiết đi được phân lập với hàm lượng 1,5 đến 2% với mục đích khảo sất, xác định quy trình Curcumin từ bột nghệ vàng với độ tinh khiết và hiệu suất cao có hiệu quả kĩnh tế, chúng tôi tiến hành lựa chọn phương pháp chiết và dung môi chiết
thíeh hợp nhất:
Curcumin là một hỗn hợp gom 3 chất : Curcumin 1, Curcumỉn 2, Curcumin 3 — chúng đều ỉà các polyphenoỉ là các hợp chất phân cực nhưng có phân tử lượng
1ỚĨ1, nhiệt độ sôi cao nên không thể thu được chung bằng phương pháp cất, lôi cuốn hơi nước. Các dung môi có độ phân cực lớn như Ethanol, Methanol thì không những hoà tan được Curcumin một cách dễ dàng mằ con hoằ tan nhỉểu chất khấc nễn khố cố thể thu được Curcumin cố độ tinh khiết cao. Sau khi phân tích cấu trúc phân tử của các Curcumin dựa vào kinh nghiệm và qua nhiều thủ nghiệm chúng tôi đã tìm được một dung mói thích hợp để chiết Curcumin từ bột nghệ vàng theo phương pháp chiết Soxhlet. Quá trình kết thức thì dịch chiết có màu vàng nhạt - Cất loại dung môi để kết tinh chậm sau đổ lọc thu sản phẩm bằng phương pháp này với 200g bột nghệ vàng chúng tói thu được khoảng 32g Curcumin có màu vàng nâu .
Tiến hành tinh chế Curcumin thu được bằng Ethanol theo 2 cách vói liều lượng và phương pháp và khác nhau chúng tôi đã thu được 2 mẫu Curcumin đã tinh
chế được gọi là BM I và BM ni : Mẫu BM I được tinh thế với lượng ethanol gấp 5
lẫn lưạng eĩhanol để tinh chế mẫu BM m,
2.2,2. ĩ)o độ nóng chảy của các mẫu Curcumin 33
2.2.2.1. Chuẩn bị dụng cụ và nguyên liêu
*Dụng cụ:
- Kính hiển vi đo độ nóng chảy (Ga!len kamp - Hãng Sanyo) - Kapila có đường kính là 0,0lmm.
*Nguyên liệu
- Curcumin của Viện Dược liệu .
- Curcumin của Viện Hoá học Cống nghiệp - Curcumin của Âi Độ
- Cure umin của Bộ mòn Hóa ĐC-VC 1 (BM .1) - Curcumin của Bộ môn Hóa ĐC-VC m (BM III)
2.2.2.2. Tiến hành: thực hiện trên 5 mẫu
- Máy sau khi đã cắm điện để ngay ngắn không bị kênh bật đèn sáng kiểm tra hệ thống máy và đèn qua kính hiển vi, nhồi thứ tự từng nguyên liệu vào kapila (có độ nén càng chặt). Mỗi lần nhồi 6 cái. Mỗi Kapỉỉa chứa 0,01mg và do íàm 2 lần, mỗi lần 3 cái.
Ta bát đầu đo: Bật máy lên đèn sáng ta đặt từng Kapila có chứa nguyên liệu vào 3 cột trong máy.
Bất công tắc đổng hồ đo nhiệt, Khi nhiệt độ lên đến 170üc, ta chinh cho nhiệt độ để đồng hồ chạy từ từ. Đông thời theo dõi 3 cột trong kính
hiển vi.
Khi nguyên liệu bắt đầu chảy ở nhiệt độ bao nhiêu ta ghi ngay nhiệt độ đó. Khi
nguyên liệu ehẳỹ hoằn fôằfì ở nhiệt độ bae nhiễu tã lại ghi tiếp nhiệt đệ thứ hai* VD: Nguyên liệu bắt đầu chảy ở nhiệt độ Ỉ80°c Nguyên Liệu chảy hoàn toàn ở nhiệt ở 1S6°C Thì ta ghi
180-186°c.
Các mẫu đo có nhiệt độ nóng chảy ghi ở bảng
1Số
TT
Ký hiệ
Tên mẫu bột Curcumin
Nhiệt độ nóng chẫy do được
1 A Bộ môn Hóa ĐC-VC I (BMI) °w 186()c
2 B Viện Dược liệu 179°c- 187°c
3 c Viện hoá học công nghệ °C- 186°c
4 D Curcumin Ấn Độ °c-186°c
5 Đ Bộ môn Hóa ĐOVC III (BM III) °C- 186°c
Nhân xét: Từ Bang 1 ta thấy nhiệt đọ nóng chảy do dược của các mẫu curcumin A- Bô môn Hóa ĐC-VC I, C- Viện Hóa cóng nghiệp, D-Ân độ, Đ- Bộ mởn Hóa ĐC-VC ỈII đúng bằng nhiệt độ nóng chảy của ciircumin
ghi trong Buợe điển Thái lan (1SƠ’C- 1§6°Q, Riêng mẫu B=VÍỘIÌ Dược liệu,
nhiệt độ bắt đầu nóng chảy là 179(,c và nóng chảy hoàn toàn là 187(1c
2.2.3 Định tính Curcuniin bằng sắc ký lớp mỏng (TLC) theo Dược đỉến Việt
3535 35
Nam III và bàng quang phổ ƯV-VIS
2.2.3.1Định tính Curcumin bằng sắc ký lớp mỏng (TLC) theo Dược điển Việt Nam HI
-Cấc bước tiến hanh:
* Chuẩn bị dụng cụ:
- Cân phân tích có độ chính xác 0, lmg
- Bình định mức ỈOOml
- Bình sắc ký bằng thuỷ tinh có lắp đậy kín phù hợp với bản mỏng Mao quản, giấy íọcCốc có mỏ
- Đũa thuỷ tinh, pipet, burct - Dụng cụ phun thuốc hiện màu
- Máy sấy
- Bản mỏng Silicagel GF 254 (MERCK)
- Đèn tử ngoại ở bước sóng 254nm CAMAG - TLC - SCANNER 3
- Cloroform
- Acid acetic
- Acid boric 3%
- Acid Oxalic 10%
- Acid Sulfuric (H2SO4) đặc
- Dung dich FeCl3 (1%) - Nước cất
+ Chuẩn bị bản mòng: sử dụng bản tráng sẩn, bán trên thị trường. Trước khi dùng bản mỏng đã được hoạt hoá ở tu 120ũc trong 1 giờ để nguội trong bình hút ẩm.
+ Dịch chấm sốc ký: hoà tan 10mg chế phẩm Curcumin với 30ml Methanöl ta thu được dung dich thử để chấm sắc ký.
+ Hệ dung môi triển khai:
Cloroform/Acid acetic: 9/1
+ Bình sắc ký; bão hoà dung môi triển khai. Bản mỏng đã được hoạt hoá sau khi chấm dịch thu được 5 mẫu triển khai với hệ dung môi theo chiều
từ dưới di lên trên. Sắc ký đồ dược quan sát dưới ánh sáng thường, dưốỉ đèn tử ngoại và
thuốc hiện màu. *Thuốc hiện mầli gồm cối
3737 37
- Acid boric 3%: acidoxalic 10% (15:5) - Acid Sulfurric đặc (H2S04)
- Dung dịch FeClj 1%
*Đèn lử ngoại (ở bước sóng 254 nm)
Thực hiện trên 5 mẫu nguyên liệu
A. Bột nghệ của bộ môn hoá ĐC-VC I (BM I)
B.Bột nghê viện Dược liệu
c. Bột nghệ viên hoá học Công nghiệp
D. Bột nghệ của An Độ
Đ. Bộ môn Hóa ĐC-VC m (BM III)
- Theo Dược điển Viột Nam III chúng tồi sử dụng hộ dung mỏi để định tính bằng sắc ký lớp mỏng các mẫu Curcumin song khả năng tách tốt nhất là hệ dung môi Clorpform: Acid acetic (9:1) thu được kết quả ở hình 3
A - Crcumin của bộ Hóa ĐC-VC I (BM I),
B - Curuumin của Viện dưọu liệu.
C- Curcumin của Viện hóa công nghiệp,
D- Curcumin của Ấn độ
Đ-Curcu min của Bộ môn Hóa ĐC-VC III (BM III)
Nhận xét:
Quan sẩt dưới ánh sáng thường cả 5 nguyên liệu đều có đặc điểm chung giống nhau là đã tách và phân thành 2-3 vêt màu vàng rít rõ nét.
- Các vết tách đểu gọn rõ không có đuôi ngoài 2-3 vết chính thì trên bản mỏng hầu như không có vết nào khác
Khi ta quan sát các bản sắc ký lớp mỏng này dưới đèn tử ngoại thì ở bước sóng 254
3939 39
Bảng 2 : Các dữ liệu thực nghiệm trên sấc ký lớp mỏng của các mâu
,Curcumin (BM I), Viện Dược liệu, Viện hóa cồng nghiệp, An Độ, BM EH
SỐT
T RrĐộ đậm Màu sắc 'Thuốc phun màu
ÀS thường ƯV 254nm a.boric 30% a.Gxalic H2so4 FeCl3 © ì 0,79+++ vàng sẫm TÍIĨ1 Đỏ gach Tím vàng U 3 0,3 + vàng nâu nhạt vàng nhạt nâu vàng 1 0,79+ + + vàng sẫm Tím Đủ gạch Tím vàng o 7 1 0,79+ + + vàng sẫm Tím đỏ Đỏ gạch Tím vàng 3 i 0,78+ + + vàng sẫm Tím hơi đỏ Đỏ gạch Tím vàng dò I t 1 0,79+ + + vàng sẫm Tím sẫm Đỏ gạch Tím vàng
o 2 0,48 + vang nâu Vàng Sẫm nâu vàng
<
Nhận xét: Trong bột nghệ ở trong nước cũng như nước ngoài đẻu có chứa Curcumin
Bảng 2 : Các dữ liệu thực nghiệm trên sấc ký lớp mỏng của các mâu
- Các vệt khi xụất hiện đềụ nhỏ dẩn từ trện xuọng dựộị và cũng nhật dển t£r
trên xuống dưới.
- Trong năm mầu đem phân tích định tính bằng sắc ký lớp mỏng có 4 mẫu có
thành phần giống nhau: thành phẩn chính chủ yếu gồm 3 chất thể hiện trên sắc ký dổ là 3 vệt 1, 2, 3. Mảu B của Viện Dược liệu chỉ xuất hiên 2 vết,
2.2.3.2 Định tính Curcumin bằng quang phổ ƯV-VIS
*Chuẩn bị đụng cụ nguyên liệu vầ hoấ eMt - Dựng cụ, bình định mức ỈOOml - Cốc có mỏ, đũa thuỷ tinh, pipet, bures
- Cần phân tích có độ chính xác 0,0 lmg PRECỈSA
- Máy đo quang phổ ở phòng {kiểm nghiệm trung tâm) CARY (1E) UV-