Bâng 3 Két quâ SKLM mot chiêu vâi hê dung mơi 3.
2.2.2.3. Chiét xuât và phân lâp flavonoid.
a. Chiét xuât
Cân chfnh xâc 100g duoc lieu dâ xâc dinh dơ âm, tien hành chiét bâng bơ chiét Soxhlet. Loai tap bâng ether dàu hô cho dén khi dung mơi khơng màu. Lây duoc lieu ra dé ngồi khơng khi cho bay hét dung mơi. Cho bâ duoc lieu vào bỵnh câu dun hơi luu câch thuÿ vơi 200ml ethanol trong 30 phüt. Loc lây dich. Thêm dung mơi và chiét tiép hai lân nûa. Gơp câc dich chiét, cât thu hơi dung mơi dén cơn không 50ml. Dé nguơi, thêm timg giot gelatin 2%, khuâ'y dêu cho dén khi hét tüa bơng trâng. Loc loai tùa, chuyën dich loc vào binh gan và chiét flavonoid bâng hơn hop ethylacetat: butanol (9:1) cho dén khi dich chiét hét màu vàng, bơc hoi dich chiét thu duoc cân.
b. Phân lâp
Chât hâ'p phu: Sephadex LH-20. Dung mơi phân hâ'p phu: ethanol 90°.
Lây không 0,1g cân flavonoid tồn phàn hồ tan trong ơng nghiêm bâng mot luong nhơ vira dû ethanol tuyêt dơ'i. Dua mâu lên cơt và tiê'n hành rira giâi bàng ethanol 90°. Két quâ sâc kÿ cơt làn mot thu duoc 4 phân doan (tü I—> IV). Câc phân doan duoc kiëm tra bàng SKLM vơi hê dung mơi toluen: ethylacetat: acid formic (5: 4: 1), hiên màu bàng thuơc thur H2S0410%.
Phân doan III duoc bơc hoi dung mơi duơi âp suât giâm và thu duoc cân. Hồ tan cân bàng mơt luong nhơ vira dû ethanol 50° và dua lên cơt sâc kÿ. Phân hâ'p phu bàng ethanol 50° dén 90°, toc dơ rira giâi 30 giot/ phüt, hüng mơi phân doan 4ml.
Câc phân doan duoc kiëm tra bàng SKLM vơi hê dung mơi: Toluen: ethylacetat: acid formic (5:4:1), hiên màu bàng thuơ'c thü H2S0410%. Két quâ cho thây tü ơng sơ 18 dê'n 25 thâ'y xuâ't hiên mot vêt trên SKLM vơi Rf = 0,9. Câc ơng duoc don lai và bơc hoi dung mơi duơi âp suâ't giâm thu duoc mot
chat goi là TAlvà tien hành kiëm tra lai dơ tinh khiét bàng SKLM, nhân thâ'y TA1 dêu cho xuâ't hiên mot vêt trên câ 4 hê dung mơi.
Hỵnh 6. SKLM cüa TA1 (hê 3)
TA1 duoc dem do pho tu ngoai và phé hơng ngoai. Kê't quâ:
Ph6 tu ngoai (UV): À,max = 272,2nm; 223,3nm.
Pho hơng ngoai (IR) duơi dang viên nén KBr cơ câc dâi hâ'p thu: 2927,2 cm'1 dâc trung cho nhơm aliphatic (C-H)
1728,5 cm'1 dâc trung cho nhơm carbonyl (-C=0) 1462,1 cm 1 dâc trung cho nhơm aromatic (Ci_C) 1274,0 cm^dâc tn/ng cho nhơm phénol (-OH)
Tù câc dù lieu phé UV và IR so bơ du dôn TA1 phân lâp duoc thuơd nhơm flavonol.