a. Phân lập nấm.
Xử lí mẫu: trái hoặc lá ớt bị bệnh được rửa với vòi nước đang chảy sau đó lau khô. Tiếp theo thực hiện trong tủ vô trùng và được tiến hành như sau:
Hình 6. Sơ đồ quy trình phân lập nấm
Cấy mẫu: dùng kẹp kẹp mẫu cho vào đĩa petri có sẵn môi trường PDA. Mỗi đĩa 2 miếng mẫu bệnh đã được cắt trước đó. Sau đó, đậy nắp đĩa lại và ủ. Quan sát mẫu các ngày sau đó nếu xuất hiện khuẩn ty thì đem cấy chuyển và quan sát dưới kính hiển vi nếu xuất hiện bào tử giống Colletotrichum sp. thì tiếp tục tiến hành làm ròng mẫu.
Lau cồn 70%
Ngâm trong Javel 25%
Rửa với nước cất vô trùng Làm khô trên giấy thấm
Cắt mẫu trái (lá) với kích thước khoảng 1 cm2
b. Khảo sát hình thái và tốc độ phát triển của khuẩn lạc
Quan sát và mô tả các đặc điểm của khuẩn lạc: Khi cấy chuyển phân lập nấm trên đĩa môi trường đặc, ta tiến hành quan sát và mô tả đặc điểm của khuẩn lạc và khuẩn ty bao gồm các chỉ tiêu sau: hình dạng, kích thước và màu sắc.
Kích thước của khuẩn lạc được đo bằng thước.
Kích thước của khuẩn ty được đo bằng trắc vi thị kính ở độ phóng đại 400 lần. Quan sát hình dạng bào tử: Bào tử được quan sát dưới kính hiển vi quang học bằng cách làm tiêu bản giọt ép ở độ phóng đại 400 lần. Sau đó mô tả hình dạng, kích thước của bào tử.
Cách làm tiêu bản giọt ép:
Nhỏ khoảng 20 µl nước cất vô trùng lên miếng lam sạch.
Khử trùng kim mũi giáo bằng cách đốt cho nóng đỏ trên ngọn lửa đèn cồn.
Dùng que cấy đã khử trùng lấy một ít khuẩn ty nấm từ khuẩn lạc rồi trải vào trong giọt nước trên lame.
Đậy lamelle lên giọt huyền phù nấm.
CHƢƠNG IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN