Do thời gian có hạn, trong nghiên cứu này, chúng tôi chọn phương phương pháp sắc ký lớp mỏng.
Bản mỏng sắc ký có kích thước 8 X 1,5 cm đã được hoạt hoá ở 110°c, thời gian 30 phút, dung môi chạy sắc ký đã được pha theo đúng tỷ lệ và cho vào bình sắc ký vói một lượng vừa đủ, để một thời gian cho bão hoà hơi dung môi.
Chấm dịch chiết chứa hoạt chất kháng sinh lên bản mỏng sắc ký. (cách mép dưới 1,5 cm), tuỳ theo mức độ đậm đặc của mẫu thử mà số lần chấm có thể thay đổi, sấy nhẹ bản mỏng cho khô.
Đặt bản mỏng đã chấm vào bình sắc ký, để dung môi chạy hết 3/4 chiều dài bản mỏng, lấy ra đánh dấu vết dung môi chạy ta được Ddm. Sấy nhẹ bản mỏng đến khô đem xác định vết.
*. Có 3 phương pháp xác định vết:
+ Xác định bằng đèn tử ngoại: bản sắc ký đã được trộn vói một chất có huỳnh quang dưới ánh sáng tử ngoại (Ằ,=254nm). Vì vậy khi soi đèn tử ngoại vết chất thử có mầu thẫm trên nền huỳnh quang sáng.
+ Xác định vết bằng phương pháp hiện hình vi sinh vật: Bản mỏng sắc ký đã chạy và sấy khô được đặt trong đĩa petri vô trùng, đổ môi trường thạch thường đã trộn vi sinh vật kiểm định phủ lên bản mỏng để ở tủ 37°c, trong 24h. Nếu vết chất thử là kháng sinh sẽ xuất hiện vòng vô khuẩn. Đo khoảng cách từ điểm xuất phát đến vòng vô khuẩn (Dv).
Xác định Rf theo công thức:
Rf= ậ =
A/m
Kết quả sắc ký lớp mỏng cho ta biết mẫu thử có bao nhiêu thành phần, trong đó có bao nhiêu thành phần kháng sinh và đồng thời sẽ lựa chọn được hệ dung môi để tiến hành tách các thành phần trong sắc ký cột.