5. Phương phỏp nghiờn cứu
2.2.3.Kỹ thuật chiết
- Tỏch chất phõn tớch từ mẫu bằng chất rắn - Rửa giải bằng dung mụi thớch hợp
- Tinh chế dịch chiết trong cõn bằng chiết lỏng- lỏng
2.2.3.1. Chiết bằng cột chứa pha đảo
Tương tỏc giữa chất phõn tớch và pha liờn kết là lực Van der Waals
Chất phõn tớch càng sợ nước càng cú khuynh hướng nằm lại trờn pha liờn kết.
Rửa giải: chọn dung mụi phõn cực đủ để phỏ vỡ liờn kết do lực Van der Waals. Vớ dụ: MeOH, MeCN, ethyl acetat
Chất phõn tớch rất sợ nước: rửa giải bằng hỗn hợp ethyl acetat : methylen clorid (1:1).
2.2.3.2. Chiết bằng cột chứa pha thuận
Lưu giữ chất phõn tớch trờn pha thuận bắt nguồn từ tương tỏc phõn cực. Liờn kết hydro, liờn kết π - π hoặc tương tỏc lưỡng cực - lưỡng cực
Pha khụng liờn kết:
- Chất phõn tớch cú tớnh bazơ được lưu giữ mạnh trờn bề mặt cú tớnh axit và ngược lại.
- Cỏc ancol, andehit, dẫn xuất halogen hũa tan trong dung mụi khụng phõn cực bị hấp thụ mạnh trờn silica gel.
Rửa giải: methanol được dựng cho nhiều trường hợp.
2.2.3.3. Chiết bằng cột chứa nhựa trao đổi ion
Lưu giữ: lực hỳt tĩnh điện giữa hai ion tớch điện trỏi dấu Rửa giải:
- Cột anionit: NaOH 0,1 M - Cột cationit: HCl 0,1 M
Pha liờn kết silica gel:
- Rửa giải anion hữu cơ: hỗn hợp NaOH 0,1 M – MeCN (1:1) - Rửa giải axit hữu cơ: đệm photphat – MeOH (1:1)
2.2.3.4. Quy trỡnh chiết
Xử lý cột bằng dung mụi hoặc dung dịch đệm thớch hợp để chuyển pha rắn sang trạng thỏi cú thể lưu giữ chất phõn tớch trong mẫu.
Tỏch chất phõn tớch: mẫu được hũa tan trong dung mụi và cho qua cột. Pha rắn sẽ lưu giữ chất phõn tớch và một số tạp chất.
Loại tạp: dựng dung mụi hoặc dung dịch đệm cho qua cột để loại tạp đó được giữ lại trờn pha rắn và làm giàu mẫu phõn tớch. Hoặc cú thể rửa giải chất cần phõn tớch ra trước và giữ lại tạp trờn cột.
Rửa giải: dựng dung mụi thớch hợp đẩy chất phõn tớch khỏi pha rắn. Dịch chiết thu được sẽ được tiếp tục phõn tớch bằng cỏc phương phỏp thớch hợp.