E. faecalis: đõy là vi sinh vật thường xuyờn được tỡm thấy trong ruột già của người, chỳng được coi là nhõn tố chỉ thị ụ nhiễm phõn. Thỉnh thoảng tỡm thấy vi sinh vật này trong ruột gà nhưng ớt khi tỡm thấy trong động vật khỏc. Chỳng cú thể phỏt triển được trong mụi trường cú 0.03% potassium tellurite.
S. faecicum: chỳng thường hiện diện trong ruột lợn và cỏc vật khỏc. Đõy là một trong những vi sinh vật gõy hư hỏng cỏc sản phẩm như jambon và thịt nguội. Khụng thể phỏt triển trong mụi trường cú cú 0.03% potassium tellurite. Đõy là loài vi sinh cú khả năng khỏng khỏng sinh cao nhất so với cỏc loài khỏc trong nhúm Enterococcus.
S. durans: thường được tỡm thấy trong sữa và cỏc sản phẩm của sữa, khụng tỡm thấy trong cỏc mẫu bệnh phẩm.
S. avium: hiện diện trong ruột gà và một số động vật khỏc. Vi sinh vật khụng tỡm thấy trong cỏc mẫu bệnh phẩm.
13.2 Nguyờn tắc
Sự hiện diện của Enterococcus được coi như là một nhõn tố chỉ thị chất lượng vệ sinh của thực phẩm. Số lượng Enterococcus được xỏc định bằng cỏch cấy một lượng mẫu biết trước lờn bề mặt mụi trường chọn lọc cho Enterococcus, sau khi ủ đếm cỏc khuẫn lạc đặc trưng, khẳng định cỏc khuẩn lạc đó đếm bằng cỏc thử nghiệm sinh hoỏ. Trong trường hợp nghi ngờ cỏc vi sinh vật bị thương tổn trong quỏ trỡnh chế biến hay bảo quản, cấy mẫu vào trong mụi trường khụng chọn lọc, ủ ở 37oC trong 2 giờ, sau đú phủ một lớp mụi trường chọn lọc lờn trờn. Cac đĩa mụi trường sau khi cấy được ủ ở 44oC trong khoảng 48 giờ.
13.4 Mụi trường và thuốc thử
- Enterococcus agar được chuẫn bị trờn cỏc đĩa petri, làm khụ bề mặt trước khi sử dụng. - Tryptose soy agar
- Brain heart infusion chứa 6.5% NaCl được phõn phối vào trong cỏc ụng nghiệm, mỡi ống 5ml.
- Brain heart infusion cú pH 9.6 được phõn phối vào trong cỏc ụng nghiệm, mỡi ống 5ml - Thuốc thử catalase (H2O2)
- Thuốc thử oxydase: N,N,N’,N’-tetramethyl-p-phenylenediamine
13.5 Thiết bị
- Tủ ấm 37oC - Tủ ấm 44oC
13.6 Phương phỏp thực hiện.
Chuẩn bị mẫu: Mẫu được chuẩn bị và pha loóng thành cỏc nồng độ phự hợp bằng dung dịch pha loóng sao cho sau khi cấy 0.1 ml vào đĩa sẽ xuất hiện 100-150 khuẩn lạc.
Cấy mẫu: cấy 0.1 ml lờn bền mặt mụi trường chọn lọc Enterococcus agar , trang đều khắp bề mặt đĩa bằng que trang tam giỏc.
Trong trường hợp nghi ngờ cỏc vi sinh vật trong mẫu bị yếu hay thương tổn do quỏ trỡnh chế biến và bảo quản, cấy 1ml mẫu vào trong đĩa petri trống, đổ 5-6ml mụi trường tryptose soy agar đó được làm nguội trong bể điều nhiệt đến 45oC, lắc để mẫu phõn tỏn đều vào trong mụi trường, ủ ở 37oC trong khoảng 2 giờ. Đổ 10-12ml mụi trường enterococcus agar lờn trờn mặt.
Lật ngược đĩa petri và ủ ở 44oC trong khoảng thới gian 2 ngày.
Đếm tất cả cỏc khuẩn lạc cú màu hồng đến màu đỏ đậm, cú thể cú một vũng khụng màu xung quanh khuẩn lạc, kớch thước cỏc khuẩn lạc này khoảng 0.5-3mm, khụng đến cỏc khuẩn lạc khụng cú màu.
Khẳng định: Chọn ớt nhất 5 khuẩn đó đếm cấy chuyển vào mụi trường TSA, ủ qua đờm ở 37oC. Sinh khối vi khuẩn trờn mụi trường STA được cấy chuyển vào cỏc mụi trường thử nghiệm sinh hoỏ như BHI chứa 6.5% NaCl, BHI cú pH 9.6, thử nghiệm catalase, oxydase …
Enterococcus cú phản ứng catalase và oxydase õm tớnh, nhưng chỳng phỏt triển được trong cỏc mụi trường BHI chứa 6.5% NaCl và BHI cú pH 9,6.