Chúng tôi đã tiến hành lấy mẫu đất tại một số nơi trong nội thành Hà nội như: trường ĐH Dươc Hà nội, Cửa nam, Thái Thịnh, Viện Công nghiệp Thực phẩm.., tại 3 xã Vân Nội, Kim Nỗ, Kim Chung thuộc huyện Đông Anh, 3 xã Cộng Hoà, Hoàng Tân, Yên Giang thuộc huyện Yên Hưng - Quảng Ninh Các mẫu đất được lấy trên bề mặt, đựng trong bình thuỷ tinh vô trùng tại các nơi như: cống rãnh, đất ruộng, đất vườn, đất các bồn hoa, vườn thực vật... Một
số mẫu hoa quả cũng được sử dụng nhằm làm phong phú thêm nguồn cung cấp nấm men. Chúng tôi sử dụng các mẫu hoa quả đã thối rữa vì những mẫu này rất nhiều nấm men có thể phân lập được. Các mẫu đất và hoa quả được tiến hành phân lập như phần 2.2.2. Sau 2-4 ngày nấm men mọc thành các khuẩn lạc, sơ bộ chọn các chủng nấm men dựa vào màu sắc, đặc điểm của khuẩn lạc và hình dạng tế bào. Các khuẩn lạc được thuần khiết trên môi trường số 1 theo phương pháp cấy zic-zăc, để thu được chủng thuần. Giữ các chủng thu được trong môi trương số 1 ở 5°c.
Theo những phương pháp thông thường khi phân lập nấm men trong thiên nhiên, người ta sử dụng môi trương Malt-Glucose để phân lập. Với môi trường này ta có thể phân lập tuyển chọn được rất nhiều chủng nấm men. Song với mục đích là phân lập các chủng nấm men có khả năng chuyển hoá xylose thành xylitol, chúng tôi không sử dụng môi trường này để tránh phân lập các chủng nấm men không cần thiết và có thể tiết kiệm được thời gian cũng như kinh tế. Nếu sử dụng môi trường chứa xylose kết quả phân lập sẽ có tính chọn lọc hơn nhưng lại gặp phải khó khăn trong vấn đề giá thành. Chúng tôi đã sử dụng môi trường dịch thuỷ rơm để phân lập vì trong dịch thuỷ phân rơm có nồng độ xylose cao nên đảm bảo được tính chọn lọc trong phân lập, tuyển chọn. Hơn thế nữa, nguồn nguyên liệu lại rất sẵn, rẻ và phương pháp làm đơn giản. Một số chủng nấm men có thể mọc trên môi trường dich thuỷ phân rơm mặc dù không có khả năng đồng hoá xylose. Chúng đã đồng hoá các đường khác trong dịch thuỷ phân. Nhưng nồng độ các đường này thấp hơn rất nhiều so với nồng độ xylose nên các chủng này mọc rất yếu, khuẩn lạc rất nhỏ, khác hẳn so với nhưng chủng đồng hoá được xylose khi phân lập trên đĩa petri. Do vậy ta dễ dàng loại bỏ được những chủng này. Tuy nhiên trong dịch thuỷ phân rơm ngoài xylose và các đường khác còn có một số chất gây độc và kìm hãm sự phát triển của tế bào nấm men sinh ra trong quá trình thuỷ phân
những chủng mọc tốt trên môi trường dịch thuỷ phân là những chủng không chỉ đồng hoá được xylose mà còn có khả năng đề kháng đối với các chất độc có trong môi trường. Điều này rất có ý nghĩa trong quá trình sản xuất khi lên men ở nồng độ dịch thuỷ phân cao.
Khi sử dụng môi trường dịch thuỷ phân rơm, từ 39 mẫu (33 mẫu đất và 6 mẫu hoa quả) chúng tôi đã phân lập được 94 chủng nấm được kí hiệu từ Xyl-1 đến Xyl-94. Trong đó từ đất phân lập được 77 chủng, từ hoa quả phân lập được 17 chủng. Kết quả phân lập được trình bày trong bảng 7 và 8.
Bảng 7. Kết quả phân lập men phân lập từ hoa quả.
TT Loại hoa quả Chủng phân lập
1 Chuối Xyl-67, Xyl-68, Xyl-84.
2 Quất hồng bì Xyl-80, Xyl-81, Xyl-85.
3 Nho Xyl-77, Xyl-78, Xyl-79.
4 Táo tàu Xyl-70, Xyl-76.
5 Dứa Xyl-69, Xyl-86.
Bảng 8. Kết quả phân lập nấm men từ đất.
TT Nơi lấy mẫu Chủng phân lập
1 Dốc Thọ Lão
Đất cống Xyl-1, Xyl-3, Xyl-4, Xyl-5, Xyl- 6, Xyl-8, Xyl-9, Xyl-10, Xyl-11. Đất vườn Xyl-2, Xyl-7.
2 ĐH Dược
Hà nội Đất vườn
Xyl-13, Xyl-15, Xyl-16, Xyl-17, Xyl-18, Xyl-21, Xyl-22, Xyl-65.
3 Đường
Lê Duẩn Đất cống
Xyl-12, Xyl-14, Xyl-19, Xyl-26, Xyl-55, Xyl-56, Xyl-57.
4 Vườn hoa
Paster Đất vườn Xyl-20, Xyl-59. 5 Đền Ngọc Sơn Đất vườn Xyl-30.
6 Thái Thịnh Đất cống Xyl-23, Xyl-24, Xyl-25, Xyl-27, Xyl-28, Xyl-29, Xyl-51.
7 Xã
Kim Chung
Đất cống X yl-35,, Xyl-38, Xyl-45, Xyl-46, Xyl-66.
Đất vườn Xyl-36 , Xyl-37, Xyl-41, Xyl-47, Xyl-48, Xyl-58, Xyl-60.
8 Xã Kim Nỗ
Đất cống (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Xyl-31, Xyl-32, Xyl-33, Xyl-34, Xyl-39, Xyl-40, Xyl-43, Xyl-44, Xyl-49, Xyl-50, Xyl-53, Xyl-54. Đất vườn Xyl-42, Xyl-61, Xyl-62, Xyl-64.
9 Xã Vân Nội Đất vườn Xyl-52, Xyl-63.
10 Xã Yên Giang Đất vườn Xyl-83, Xyl-88, Xyl-92, Xyl-93, Xyl-94. 11 Xã Hoàng Tân Đất đồi Xyl-89.
Qua bảng 7 và bảng 8 chúng tôi nhận thấy các mẫu đất và hoa quả đều có tế bào nấm men. Trong đó các mẫu đất cống và đất vườn màu mỡ cho nhiều chủng hơn các mẫu đất khác. Mẫu đất đồi lấy tại xã Hoàng Tân-Yên Hưng- Quảng Ninh chúng tôi chỉ phân lập được một chủng là Xyl-89. Với các mẫu đất lấy tại xã Kim Nỗ-Đông Anh, chúng tôi phân lập được nhiều chủng nấm men nhất (16 chủng). Với các mẫu hoa quả, mỗi mẫu chúng tôi đã phân lập được từ 2 đến 3 chủng nấm men. Bình thường khi phân lập trên môi trường Malt-Glucose, mỗi mẫu có thể phân lập được từ 10 đến 20 chủng. Với môi trường dịch thuỷ phân rơm chúng tôi chỉ phân lập được trung bình từ 2 đến 5 chủng/mẫu. Điều đó chứng tỏ khả năng chọn lọc của môi trường này rất cao, chỉ những chủng nào có khả năng đồng hoá được xylose và có khả năng đề kháng với các chất độc mới có thể mọc được trên môi trường này.