a. Đặc tính hình thái
Mục đích
Xác định đặc tính hình thái của các chủng nấm men đã phân lập, bao gồm hình dạng, kích thước của khuẩn lạc và tế bào nấm men.
Phương pháp tiến hành
Phân lập các chủng nấm men trên môi trường YPG agar
Ủ ở 30oC trong 24 – 48 giờ, ghi nhận đặc điểm khuẩn lạc của các chủng nấm men.
Làm tiêu bản của các chủng nấm men và quan sát dưới kính hiển vi quang học ở vật kính E100, ghi nhận hình dạng và kích thước của tế bào nấm men.
b. Xác định hoạt tính urease Mục đích
Xác định khả năng sinh enzyme urease của các chủng nấm men.
Phương pháp
− Chủng trực tiếp khuẩn lạc nấm men vào môi trường Chistensen Urea Broth (màu vàng cam) và ủ ở nhiệt độ 30oC trong 24 – 48 giờ.
− Nấm men có khả năng sinh enzyme urease sẽ phân hủy urea tạo thành NH3 khiến môi trường chuyển sang màu đỏ thẩm.
Cách tiến hành
Chuẩn bị môi trường Chistensen Urea Broth, chuyển 5 mL môi trường Chisten- sen Urea Broth vào ống nghiệm, khử trùng ở 115oC trong 10 phút, để nguội.
Chủng các chủng nấm men phân lập được vào ống nghiệm chứa 5 mL môi trường Chistensen Urea Broth, ủ các ống nghiệm ở 30oC trong 24 – 48 giờ. Ghi nhận kết quả.
Kết quả dương tính khi môi trường chuyển sang màu đỏ thẫm.
Chuyên ngành Vi sinh vật học 16 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học
c. Xác định hoạt tính gelatinase Mục đích
Xác định khả năng sinh enzyme gelatinase của các chủng nấm men.
Phương pháp
− Chủng trực tiếp khuẩn lạc nấm men vào môi trường có chứa gelatine (dạng lỏng) và ủ ở nhiệt độ 30C trong 48 giờ.
− Làm lạnh ở 4 – 8C trong 6 – 8 giờ.
− Nấm men có khả năng sinh enzyme gelatinase sẽ khiến môi trường không đông đặc lại được (do gelatin bị phân hủy).
Cách tiến hành
Chuẩn bị môi trường chứa gelatine
Công thức môi trường chứa gelatine cho 1000 mL môi trường: Gelatine 120 g
Peptone 5 g Yeast extract 3 g pH 6,7 ± 0,2
Hút 3 mL môi trường chứa gelatine cho vào mỗi ống nghiệm.
Khử trùng các ống môi trường chứa gelatine ở 121oC trong 20 phút.
Chủng trực tiếp khuẩn lạc nấm men vào ống nghiệm chứa 5 mL môi trường gel- atine đã được khử trùng, ủ các ống nghiệm ở 30oC trong 48 giờ.
Sau đó cho vào tủ trữ lạnh ở 4 – 8°C trong 6 – 8 giờ.
Kết quả dương tính khi môi trường trong ống nghiệm không bị đông đặc lại.
Thí nghiệm được tiến hành lặp lại 3 lần.
d. Xác định khả năng lên men saccharose Mục đích
Chuyên ngành Vi sinh vật học 17 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học
Cách tiến hành
− Nuôi tăng sinh các chủng nấm men trong môi trường YPG. Ủ lắc ở điều kiện hiếu khí ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ.
− Chuẩn bị môi trường saccharose 2% (w/v), hút 9 mL môi trường saccharose cho vào ống nghiệm có chứa chuông Durham. Khủ trùng ống môi trường ở 121C trong 20 phút.
− Chủng 1 mL dung dịch tăng sinh vào ống nghiệm chứa 9 mL môi trường saccha- rose 2% có chứa sẵn chuông Durham đã khử trùng.
− Ủ ở nhiệt độ phòng trong 48 giờ. Xác định chiều cao cột khí sinh ra trong chuông Durham.
− Chỉ tiêu đánh giá khả năng lên men của nấm men: chiều cao cột khí CO2 sinh ra trong chuông Durham trong 48 giờ, mỗi lần đo cách nhau 6 giờ, bắt đầu đo sau 12 giờ từ lúc bắt đầu thí nghiệm.
− Thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
e. Khả năng lên men maltose Mục đích
Xác định khả năng lên men matlose của các chủng nấm men.
Cách tiến hành
− Nuôi tăng sinh các chủng nấm men trong môi trường YPG. Ủ lắc ở điều kiện hiếu khí ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ.
− Chuẩn bị môi trường maltose 2% (w/v), hút 9 mL môi trường maltose cho vào ống nghiệm có chứa chuông Durham. Khử trùng ống môi trường ở 121C trong 20 phút.
− Chủng 1 mL dung dịch tăng sinh vào ống nghiệm chứa 9 mL môi trường maltose 2% có chứa sẵn chuông Durham đã khử trùng.
− Ủ ở nhiệt độ phòng trong 48 giờ. Xác định chiều cao cột khí sinh ra trong chuông Durham sau mỗi 12 giờ.
− Chỉ tiêu đánh giá khả năng lên men của nấm men: chiều cao cột khí CO2 sinh ra trong chuông Durham trong 48 giờ, mỗi lần đo cách nhau 6 giờ, bắt đầu đo sau 12 giờ từ lúc bắt đầu thí nghiệm. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
Chuyên ngành Vi sinh vật học 18 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học