a. Thực hành.
Chuẩn bị 5 ống nghiệm : 1 ống đối chứng và 4 ống thí nghiệm.
• Ống đối chứng :
- Hút 1ml nước cho vào ống nghiệm
- Thêm 2ml thuốc thử DNS
- Thêm 1ml dung dịch CMC pH5
• 4 ống phản ứng :
- Ống 1: Hút 1ml enzyme tái sử dụng lần 1 cho vào ống nghiệm
- Ống 3: Hút 1ml enzyme tái sử dụng lần 3 cho vào ống nghiệm
- Ống 4: Hút 1ml enzyme còn lại cho vào ống nghiệm
- Đem 4 ống nghiệm trên ủ ở nhiệt độ 400C từ 5-10 phút
- Thêm vào 4 ống trên, mỗi ống 1ml dung dịch CMC pH5 ủ trước ở nhiệt độ 400C
- Đem 4 ống nghiệm trên ủ chính xác 10 phút ở nhiệt độ 400C
- Sau đó lấy ra cho vào mỗi ống 2ml thuốc thử DNS để ngừng phản ứng.
- Đem đun sôi 15 phút. Để nguội. Đo ở bước sóng 540nm. b. Kết quả
• Quan sát bằng mắt thường theo thứ tự từ trái sang phải, ta thấy mẫu cồn lại có mầu đậm nhất chứng tỏ hoạt tính enzyme còn cao.
• Kết quả đo OD:
Số ống 1 2 3 4(còn lại )
OD 0.164 0.139 0.079 0.37
Dựa vào đường chuẩn albumin ta có phương trình: Y= 0.003x + 0.0657
Suy ra :
HLenzyme cố định= HLenzyme trước cố định – HLenzyme còn lại = 61.4 – 5.071 = 56.329(mg) Hiệu suất = = Số lần tái sử dụng: Lần 1: x1 = Lần 2: x2 = Lần 3: x3 =
Hiệu suất của 3 lần tái sử dụng: Lần 1: x1 =
Lần 2: x2 = Lần 3: x3 =
Nhận xét kết quả:
Sau 3 lần tái sử dụng ta thấy tái sử dụng lần thứ 3 tạo quá nhanh nên hiệu suất hoạt tính giảm nhiều. Do đó khuyến cáo không nên sử dụng enzyme tái sử dụng lần thứ 3.