a. Thực hành
Chuẩn bị 2 ống nghiệm: 1 ống nghiệm đối chứng và 1 ống nghiệm thực nghiệm.
• Ống nghiệm đối chứng: chỉnh quang phổ kế về độ hấp thụ bằng 0. - Hút 1 ml nước cho vào ống nghiệm.
- Thêm 2 ml dung dịch DNS-lastose và lắc đều.
- Thêm 1 ml dung dịch CMC pH5 vào ống nghiệm chứa enzyme và lắc đều.
- Đem đun sôi cách thủy trong 15 phút. Làm lạnh đến nhiệt độ phòng trong chậu nước lạnh. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 540 nm.
• Ống nghiệm thực nghiệm
- Hút 1 ml dung dich enzyme cho vào ống nghiệm và ủ ở nhiệt độ 400C trong 10 phút. Đồng thời, ta cũng để chai chứa dung dịch CMC pH5 thích hợp ở 40 0C trong 10 phút.
- Thêm 1 ml dung dịch CMC pH5 vào ống nghiệm chứa enzyme và lắc đều.
- Để phản ứng ở 400C chính xác 10 phút.
- Thêm 2 ml dung dịch DNS-lastose, lắc đều để ngừng phản ứng enzyme.
- Đem đun sôi cách thủy trong 15 phút. Làm lạnh đến nhiệt độ phòng trong một chậu nước lạnh. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 540 nm
b. Kết quả:
- Quan sát bằng mắt thường ta thấy: ống đối chứng có màu vàng là màu của dung dịch DNS-lastose. Ống có phản ứng với enzyme có màu đỏ đậm, chứng tỏ ở đây có xảy ra quá trình thủy phân giữa enzyme và dung dịch CMC pH5, như hình 12.
Hình 12: Kết quả so màu.
- Kết quả đo độ hấp thụ ở bước sóng 540 nm có OD = 1.53 c. Tính toán kết quả thu được:
Dựa vào phương trình: y = 1.303x + 0.003
Ta có kết quả đo độ bước sóng 540 nm là OD = 1.53