Do điều kiện hạn chế chúng tôi chỉ tiến hành thử tác dụng kháng các dòng tế bào ung thư người đối với hai chất (II, VII) để thăm dò hoạt tính kháng ung thư của dãy này.
Nguyên tắc :
Phương pháp thử nghiệm hoạt tính kháng các dòng ung thư được tiến hành theo mô hình thử nghiệm hiện đang lưu hành và áp dụng tại Viện nghiên cứu ung thư quốc gia Mỹ (NCI).
Tế bào thử nghiệm có nguồn gốc: Hep -2 tế bào ung thư gan người.
Tiến hành :
Tế bào ung thư được duy trì ở điều kiện tiêu chuẩn và được thử test với các chất thử đã được chuẩn bị sẵn ở nồng độ khác nhau trên phiến vi lượng 96 giếng, trong dung môi DMSO 10%.
Mẫu thử nghiệm (bao gồm tế bào + môi trường nuôi cấy + chất thử )
được ủ ở
37°c
để tế bào phát triển.Sau 72 giờ lấy tế bào ra, cố định, rửa, nhuộm và hoà lại bằng dung dịch chuẩn. Đọc kết quả trên máy Elisa ở bước sóng 495 - 515 nm. Nồng độ ức
c h ế t ế b à o u n g th ư c ủ a c h ấ t th ử đ ư ợ c tín h b ằ n g đ ạ i lư ợ n g I C jo .
Đọc kết quả và biện luận:
Giá trị IC 5 0 được tính trên chương trình Table curve với giá trị logarit
dựa trên giá trị thang nồng độ khác nhau của chất thử và giá trị ED ( liều
lượng tác dụng) đo được, các mẫu có giá trị IC 5 0 khác nhau.
Các mẫu chất tinh khiết có giá trị IC50 < 5 ^g/ ml được coi là có hoạt tính.
Lưu ý: Song song làm phiến đối chứng OD ( ngày 0) để đối chứng cho lượng tế bào ờ thời điểm bắt đầu thí nghiệm.
về
đối chứng âm: gía trị OD của DMSO 10% để làm đối chứng cho giá trị của lượng tế bào khi kết thúc thí nghiệm. Cách cố định và nhuộm như với các mẫu thử.Dựa trên kết quả đo được của chứng OD ( ngày O) và OD của DMSO
10% so sánh với giá trị OD khi trộn mẫu chất thử để tìm giá trị ED50 theo công
thức;
OD (mẫu) - OD (ngày 0)
ED = X 100%
OD (DMSO 10%) -
o
D (ngày 0)Mẫu có giá trị ED < 50% là mẫu có hoạt tính, dùng giá trị ED50 của 10 thang nồng độ dựa vào chương trình Table curve theo thang giá trị logarit của
đường cong phát triển tế bào và nồng độ chất thử để tính giá trị IC50:
In Y= a+ bX Y : nồng độ chất thử X: gía trị
ED50
Kết quả thử nghiệm được ghi ở bảng 8
Bảng 8: Kết quả thử hoạt tính kháng tế bào ung thư của chất II và chất VII.
STT Ký hiệu mẫu
Dòng tế bào
Cell survival (%) Kết luận
Hep-2
1 DMSO 1 0 0,0+0 , 0
2 Chứng(+) 2,05+0,02
3 II 103,8±1,3 Âm tính
4 VII 57,9+0,09 Âm tính
Nhân xét:
Kết quả thử nghiệm hoạt tính kháng tế bào ung thư cho thấy cả hai chất (II, VII) đem thử đều không có tác dụng với dòng tế bào ung thư trên.
