Các chế độ tách trong HPLC
Gồm 2 loại sắc ký : trao đổi ion dương và trao đổi ion âm Cụ thể, nếu pha tĩnh mang điện âm (như cột carboxymethyl- cellulose (CM-cellulose)), , thì pha động sẽ là những phân tử mang điện tích dương và tiến trình được gọi là sắc ký trao đổi ion dương. Ngược lại, nếu pha tĩnh mang điện tích dương (như cột diethylaminoethyl-cellulose (DEAE-cellulose)), gọi là sắc ký trao đổi ion âm, thì tương tác với pha động mang điện tích âm.
HPLC trao đổi ion
Các chế độ tách trong HPLC
Cấu tạo:
Pha tĩnh: tùy vào từng loại cột cho từng mục đích sử dụng khác nhau
mà ta có các loại cột sau:
•Cột trao đổi cation: cột trao đổi cation mạnh: SCX :chứa nhóm –SO3-
( sufopropyl) ví dụ sodium sunfate.
•Cột trao đổi cation yếu: WCX :–COO-( carboxyl), ví dụ như carboxylmethyl-cellulose CMC.
•Cột trao đổi anion:
•Cột trao đổi anion mạnh: SAX: R4N+ (amine)
•Cột trao đổi anion yếu: WAX : hợp chất DEAE-diethyl aminoethyl.
HPLC trao đổi ion
Các chế độ tách trong HPLC
Pha động:
Pha động sử dụng trong HPLC thường là dung dịch đệm có chứa nước. Tăng lực ion của pha động làm giảm thời gian lưu của chất tan. Sự thay đổi pH của pha động cũng làm ảnh hưởng đến pha tĩnh và cả mẫu. Chế độ rửa giải thường sử dụng là đẳng dòng pha động , gradient nồng độ, gradient pH.
HPLC trao đổi ion
Các chế độ tách trong HPLC
Ứng dụng:
HPLC trao đổi ion có nhiều ứng dụng, từ việc nhận biết các ion vô cơ đơn giản đến việc phân tích các hợp chất carbohydrate và acide amine hoặc tinh sạch các protein.
Ứng dụng lớn nhất của HPLC trao đổi ion là tinh sạch các
protein và phân tích các thành phần carbohydrate có trong các mẫu thực phẩm, mẫu sinh học
HPLC trao đổi ion
Các chế độ tách trong HPLC
HPLC trao đổi ion
Các chế độ tách trong HPLC
Nguyên lý:
Các chất trong mẫu được tách nhờ sự sai khác nhau về kích thước, quá trình không có sự tương tác về mặt hóa học giữa pha động và pha tĩnh. Trong đó, pha tĩnh là các vật liệu có một độ xốp nhất định, chất tan có kích thước lớn không lọt qua được các lỗ trong sẽ di chuyển ở bên ngoài các khoảng trống các hạt của pha tĩnh và đc rửa giải ra khỏi cột đầu tiên. Các chất tan có kích thước nhỏ hơn sẽ lần lượt ra khỏi cột.