Tiến hành nhân giống vi khuẩn trên môi trường NBRIP và Burk’s lỏng trong các ống nghiệm.
Hút 100 µl mẫu vi khuẩn sau khi nhân giống cho vào 2 ml môi trường NBRIP và
Burk’s có và không có bổ sung tryptophan trong các effendof (2 ml), để trong bóng tối,
nuôi trong 8 ngày mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần cùng với đối chứng (không chủng vi khuẩn).
Lấy mẫu vào các thời điểm 2, 4, 6, và 8 ngày để xác định hàm lượng IAA vi khuẩn tổng hợp được bằng phương pháp so màu Salkowsky ở bước sóng 530 nm. IAA được tạo ra trong dung dịch sẽ phản ứng với thuốc thử tạo thành dung dịch có màu hồng xậm tùy thuộc vào IAA do vi khuẩn tạo ra.
Chuẩn bị thuốc thử Salkowsky
Đong 533 ml H2SO4 đậm đặc vào bình đựng chuẩn, thêm từ từ nước cất vào đủ 1 lít, để nguội sau 12 giờ được dung dịch H2SO4 đậm đặc.
Cân 4,5 gam FeCl3 cho vào cốc, thêm từ từ dung dịch H2SO4 đậm đặc 10.8 M vào cốc và khoấy cho FeCl3 tan đều, để nguội. Bảo quản trong chai xậm màu.
Tiến hành dựng đường chuẩn đo IAA
Bảng 6: Đường chuẩn đo IAA.
Ống nghiệm 0 1 2 3 4
Nước khử khoáng 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
Thuốc thử 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
IAA chuẩn 0µl 2µl 4µl 6µl 8µl
Đo mẫu
Lấy mẫu ở các thời điểm 2, 4, 6, và 8 ngày sau khi nuôi, ly tâm 12000 vòng/phút/5 phút.
Sau khi ly tâm hút 0,5 ml lấy dịch vi khuẩn vào ống nghiệm có chứa 0,5 ml H2O khử khoáng và 1 ml thuốc thử Salkowki để ổn định khoảng 15 phút trong tối, tiến hành đo OD bước sống 530 nm.
CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ THẢO LUẬN